Notch3 is dispensable for thymocyte β-selection and Notch1-induced T cell leukemogenesis

Notch1 (N1) signaling induced by intrathymic Delta-like (DL) ligands is required for T cell lineage commitment as well as self-renewal during “β-selection” of TCRβ⁺ CD4⁻CD8⁻ double negative 3 (DN3) T cell progenitors. However, over-expression of the N1 intracellular domain (ICN1) renders N1 activation ligand-independent and drives leukemic transformation during β-selection. DN3 progenitors also express Notch3 (N3) mRNA, and over-expression of ligand-independent mutant N3 (ICN3) influences β-selection and drives T cell leukemogenesis. However, the importance of ligand-activated N3 in promoting β-selection and ICN1-induced T cell leukemogenesis has not been examined. To address these questions we generated mice lacking functional N3. We confirmed that DN3 progenitors express N3 protein using a N3-specific antibody. Surprisingly however, N3-deficient DN3 thymocytes were not defective in generating DP thymocytes under steady state conditions or in more stringent competition assays. To determine if N3 co-operates with N1 to regulate β-selection, we generated N1;N3 compound mutants. However, N3 deficiency did not exacerbate the competitive defect of N1^+/− DN3 progenitors, demonstrating that N3 does not compensate for limiting N1 during T cell development. Finally, N3 deficiency did not attenuate T cell leukemogenesis induced by conditional expression of ICN1 in DN3 thymocytes. Importantly, we showed that in contrast to N1, N3 has a low binding affinity for DL4, the most abundant intrathymic DL ligand. Thus, despite the profound effects of ectopic ligand-independent N3 activation on T cell development and leukemogenesis, physiologically activated N3 is dispensable for both processes, likely because N3 interacts poorly with intrathymic DL4.     

Notch1信号蛋白在卵巢癌细胞系中的表达

目的:检测卵巢癌细胞系中Notch1信号蛋白的表达,为在卵巢癌细胞中对Notchl进行RNA干涉研究的体外实验筛选靶细胞.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及Western blotting对卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910、HO-8910-PM和3AO中Notch1进行检测.结果:Notch1信号蛋白在4种卵巢癌细胞系中均有表达,其在HO-8910-PM中表现为高表达,在SKOV3和3AO中表现为中等表达,在HO-8910中表现为低表达.结论:HO-8910-PM适合作为靶细胞,进行Notch1信号蛋白的RNA干涉研究.     

PKM2和Notch1在结直肠癌中的研究进展

研究表明, M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2, PKM2)和Notch1在结直肠癌组织中高表达,且与结直肠癌的发生、发展有一定的关系;其表达水平亦与肿瘤的化、放疗效果有关,严重影响患者预后,是目前结直肠癌治疗和研究的关键靶点。PKM2主要通过调节癌细胞代谢及基因转录,促进癌细胞外泌体分泌,并在某些lncRNAs的调节下发挥促癌作用,可作为结直肠癌的辅助诊断指标。Notch1可在mi RNAs以及自噬的调节下发挥促癌作用,且可通过促进上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)促进结直肠癌转移。此外,PKM2和Notch1在结直肠癌中的作用与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路有联系,但两者之间是否有相关性,目前尚不明确。本文主要就PKM2和Notch1在结直肠癌中的研究进展进行探讨,以期为结直肠癌的靶向治疗研究提供新思路。     

大鼠Notch 1胞质段的克隆及其表达

Notch 1信号途径参与决定细胞命运,其水解后产生的活性片段——胞质段（Notch 1 intracellular cytoplasmic domain, NICD）能被转运进核,激活下游靶基因的表达.Notch 1参与细胞的增殖、分化、程序性死亡、发育过程中的形态发生和器官形成等许多重要过程.为了获得重组的NICD,以大鼠脑cDNA文库为模板,用PCR方法扩增出编码NICD的基因片段,克隆至谷胱甘肽-S-转移酶（GST）融合表达载体pGEX-KG中,并在大肠杆菌中获得较高水平的表达.表达的融合蛋白GST-NICD分子质量约为120 ku左右,以包涵体和可溶性两种形式存在,易于亲合层析纯化.为制备抗体和进一步的功能研究奠定了基础.     

Notch1在胆管癌细胞光动力疗法中的作用研究

目的:1、研究Photosan介导光动力疗法(Photodynamic Therapy,PDT)对胆管癌细胞的杀伤作用。2、探讨Notch1在胆管癌发生中的表达情况以及Notch1在PDT治疗胆管癌细胞中的作用。方法:1、体外培养人胆管癌QBC939细胞株,在细胞对数生长期用不同浓度Photosan处理,并用半导体激光治疗仪不同强度光照后,采用MTT法检测PDT对QBC939细胞的杀伤作用。观察不同的光敏剂孵育时间、光敏剂浓度及光照剂量对PDT效果的影响。2、采用免疫细胞化学方法和蛋白印迹法检测胆管癌细胞Notch1表达,经Photosan介导光动力作用胆管癌细胞后,检测胆管癌细胞内Notch1表达变化。结果:1、MTT结果显示Photosan介导的PDT对胆管癌细胞有杀伤作用(P0.05),而且这种杀伤作用在一定范围内随着光敏剂浓度增加、光敏剂孵育时间、光照剂量呈正相关。2、免疫细胞学检查发现Notch1在胆管癌细胞中高表达,其表达主要位于细胞膜及胞浆,并且经PDT处理后Notch1表达量较前减少(P0.05)。结论:Notch1与胆管癌细胞生长、增殖密切相关,且Notch1在PDT对胆管癌细胞产生的抑制、促凋亡和杀伤作用中有重要作用。     

Notch1对糖尿病肾小管间质细胞外基质沉积的影响

本文旨在明确糖尿病肾小管间质中Notch1和自噬水平的变化对细胞外基质沉积的影响,并探讨其机制。取db/m小鼠(正常对照组)和db/db小鼠(糖尿病组)各8只,饲养12周后测定相应的生化指标;同时,体外在正常糖(normal glucose, NG)和高糖(high glucose, HG)条件下培养大鼠肾小管导管上皮细胞(NRK52E细胞),用Western blotting检测各组细胞中Notch1和LC3蛋白表达变化;在NG和HG条件下过表达和敲低Notch1,用共聚焦显微镜观察自噬流变化,用细胞免疫荧光化学法观察肾小管上皮细胞中Notch1、I型和III型胶原蛋白(Collagen-I和III)变化。结果显示,与db/m小鼠比较,db/db小鼠肾组织中Notch1和Collagen-III表达增加(P <0.01),而LC3表达降低(P <0.05);体外实验结果显示,HG组与NG组比较,NRK52E细胞Notch1蛋白表达增加(P <0.01),LC3表达明显降低(P <0.01),高渗组与NG组比较,以上蛋白表达无明显变化;高糖条件下敲低Notch1...     

Notch信号通路研究进展

在无脊椎动物和脊椎动物发育过程中 ,Notch信号对细胞的命运决定起关键作用。通过Notch受体的信号传递能够扩大并固化相邻细胞之间的分子差异 ,最终决定细胞的命运。本文综述了Notch信号通路的相关细节 ,重点讨论了CSL非依赖的途径     

Notch信号转导与调控

Notch是一个进化上十分保守的跨膜受体蛋白家族,它可以通过与表达配体的相邻细胞间的相互作用转导信号,从而决定动物系统发育过程中多种细胞的“命运”.Notch信号转导过程包括Notch受体与配体的结合、Notch受体的酶切活化、可溶性NICD转移至细胞核并与CSL DNA结合蛋白相互作用,从而调控靶基因的表达.Notch活性水平、时间和空间分布受到包括配体、蛋白质转运、泛素化降解等多水平内源性和外源性诱导因素的调节.系统介绍了Notch信号转导通路的分子组成、Notch信号激活的生化机制、Notch信号的多水平调节以及与部分相关疾病的关系.     

小肠腺癌组织中Notch1和P53免疫反应性增强

目的研究小肠腺癌中Notch1、Numb、P53和P63蛋白的免疫组织化学表达情况及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测含有60例小肠腺癌(small intestinal adenocarcinoma,SIA)组织芯片中Notch1、Numb、P53和P63蛋白的表达情况,与9例正常小肠组织进行对照,并进行统计学分析。结果在小肠腺癌组织中,Notch1免疫组织化学染色阳性率显著高于正常小肠组织,Notch1蛋白在小肠腺癌中的免疫组织化学表达与肿瘤TNM分期相关,而与年龄和性别不相关。P53在小肠腺癌组织中的免疫组织化学表达为41.7%,P53在正常小肠组织中无表达。Numb蛋白在小肠腺癌组织和正常小肠组织中阳性表达率分别为68.3%和77.8%,二者比较无统计学差异。Numb蛋白在小肠腺癌组织表达缺失率为31.7%。P63在小肠腺癌组织中表达率为5%,而在正常小肠组织中不表达。P53和Numb表达均与年龄、性别、TNM分期等临床病理参数不相关。相关分析显示,小肠腺癌中Numb与Notch1,P53与Numb、Notch1表达之间无相关性。结论小肠腺癌组织中存在Notch1的过表达,且与小肠腺癌的进展相关,部分病例Numb蛋白表达缺失及P53突变,Numb-Notch1信号通路蛋白可能参与了小肠腺癌的发生机制。     

Notch信号途径的调节

Notch信号途径是通过局部细胞间相互作用,实现细胞间通讯、胞浆内的信号转导以及核内转录,从而控制细胞的增殖、分化、凋亡、迁移及粘附等细胞的命运的途径。它在进化中非常保守,在机体的整个生长发育过程的调控中发挥着重要的作用。Notch信号途径作用过程受其他多种分子和途径的调节。本文从细胞外水平、细胞浆水平和细胞核水平分别讨论了Notch信号途径的调节。对进一步了解Notch信号途径,解释生理病理现象、控制和治疗疾病提供基础。     

PKCζ regulates Notch receptor routing and activity in a Notch signaling-dependent manner

Activation of Notch signaling requires intracellular routing of the receptor, but the mechanisms controlling the distinct steps in the routing process is poorly understood. We identify PKCζ as a key regulator of Notch receptor intracellular routing. When PKCζ was inhibited in the developing chick central nervous system and in cultured myoblasts, Notch-stimulated cells were allowed to undergo differentiation. PKCζ phosphorylates membrane-tethered forms of Notch and regulates two distinct routing steps, depending on the Notch activation state. When Notch is activated, PKCζ promotes re-localization of Notch from late endosomes to the nucleus and enhances production of the Notch intracellular domain, which leads to increased Notch activity. In the non-activated state, PKCζ instead facilitates Notch receptor internalization, accompanied with increased ubiquitylation and interaction with the endosomal sorting protein Hrs. Collectively, these data identify PKCζ as a key regulator of Notch trafficking and demonstrate that distinct steps in intracellular routing are differentially modulated depending on Notch signaling status.     

昆虫Notch信号通路研究进展

Notch 信号通路由 Notch 受体、Notch 配体(DSL 蛋白)、CSL[C promoter binding factor-1(CBF1),Suppressor of hairless(Su(H)),Lag-1]转录因子、其他效应子和Notch调节分子构成,在动物组织的发育和器官的细胞命运决定中起着基础性的...     

Notch信号途径及其调控

Notch是一个进化上十分保守的跨膜受体蛋白家族,对无脊椎动物和脊椎动物发育过程中的细胞命运决定起重要作用。一条重要的Notch信号途径涉及Notch的“三步蛋白质水解”活化。许多相关分子和体内生化过程参与Notch信号途径调控。调控发生在不同水平,包括Notch-配体互作、受体和配体的运输、泛素化降解等。现就Notch受体、Notch信号途径及其所受的不同水平的调控进行综述。     

Notch信号通路与肺纤维化

Notch信号通路是在进化上非常保守的单次跨膜信号受体蛋白家族,广泛表达于脊椎动物与无脊椎动物中,主要由Notch受体、Notch配体及细胞内效应分子CSL蛋白组成。Notch信号通路是多种组织和器官早期发育所必需的细胞间调节信号,参与对细胞增殖、分化、凋亡的调控。近年的研究表明,Notch信号通路参与肺纤维化的发生发展,阻断或激活这一途径可以影响肺纤维化的进展,本文就Notch信号通路与肺纤维化的关系的研究进展做一综述。     

人Notch信号通路中Jagged1基因的克隆与真核表达

[目的]克隆人Notch信号通路中配体Jagged1基因并进行真核表达。[方法]采用RT-PCR的方法从Hela细胞总RNA中获取Jagged1基因,并克隆至携带FLAG标签的真核表达载体pCMV-Tag4。经酶切、PCR和测序鉴定后,将重组质粒Jagged1-pCMV-Tag4瞬时转染HEK 293T细胞,通过Q-PCR和Western blot检测目的蛋白的表达。[结果]成功构建了真核表达质粒Jagged1-pCMV-Tag4并在HEK 293T细胞中瞬时表达。[结论]Jagged1在HEK 293T细胞中实现瞬时表达,为稳定表达和进一步研究Jagged1/Notch信号通路奠定基础。