脐血CD-34单个核细胞来源间充质干细胞研究

目的 :探讨分离培养脐血CD-3 4 细胞来源间充质干细胞 (MSC)及研究其生物学特征。方法 :取足月妊娠健康产妇胎儿脐血 ,分离其中单个核细胞 (MNC) ,去除CD 3 4 细胞 ,体外用低糖型DMEM培养基培养。观察细胞形态、测定生长曲线、利用流式细胞仪对培养细胞进行表型测定、细胞周期分析、体外诱导分化实验以及检测造血因子的表达情况。结果 :脐血CD-3 4 细胞中可培养出间充质干细胞 ,可诱导向成骨和脂肪细胞分化并表达IL 6、SCF和SDF 1等造血生长因子。结论 :从足月妊娠健康产妇脐血CD-3 4 细胞可分离培养出间充质干细胞 ,具有与其它来源MSC类似的表型及分化潜能 ,在体外传代可保持其低分化状态并表达造血因子 ,可作为组织工程的种子细胞和具有促进造血作用     

脐带血来源干细胞神经分化的研究进展

中枢神经系统损伤后的自身修复能力有限,因而研究者致力于寻找一种合适的细胞进行移植以代替受损的神经细胞修复神经损伤。近年来的研究表明,脐带血干细胞能够在体外诱导条件下向神经样细胞分化,并在动物体内实验中促进神经损伤的恢复,有可能作为一种有效的细胞资源,应用于人类中枢神经系统疾病的细胞替代治疗以及神经保护与支持。     

两种不同密度分离液分离的脐血CD34+、CD34-细胞造血活性比较

目的:比较两种不同密度的ficoll-泛影葡胺分离造血干细胞群的效果,找出更适合分离脐血造血干、祖细胞的分离密度,为脐血造血干细胞的医学研究及临床应用提供一定依据。方法:采集脐血6份,根据密度梯度离心法,用质量分数为(1.068±0.001)g/m L、(1.077±0.001)g/m L ficoll-泛影葡胺分离液等量分离同一份脐血,分别计数这两种分离液的单个核细胞获得率及细胞存活率,得到的单个核细胞再分别经免疫磁珠分选法获得高纯度的CD34~+细胞及除去了CD34~+的单个核细胞(CD34~(-depleted) MNCs),统计分析这两种不同密度分离液获得的CD34~+细胞、CD34~(-depleted)MNCs在甲基纤维素中形成CFU-GM集落数。结果:1(1.068±0.001)g/m L、(1.077±0.001)g/m L两种分离液分离的单个核细胞平均密度分别为(1.52±1.0)×10~6个/m L、(2.84±0.98)×10~6个/m L,(P0.05);经免疫磁珠纯化后的CD34~+细胞占单个核细胞(MNCs)的比率分别是(1.26±0.47)%、(1.07±0.15)%,(P0.05);2(1.068±0.001)g/m L分离的单个核细胞经免疫磁珠纯化后1.5×10~3个CD34~+细胞形成CFU-GM的集落(140.5±14.5)显著多于(1.077±0.001)g/m L的集落数(118.3±13.8)(P0.05);(1.068±0.001)g/m L分离的5×10~4个CD34~(-depleted) MNCs形成的CFU-GM集落数(132.0±5.1)也显著多于(1.077±0.001)g/m L的集落数(101.3±9.4),(P0.05)。结论:与1.077 g/m L Ficoll相比,1.068g/m L Ficoll-泛影葡胺分离液分离的单个核细胞中的CD34~+、CD34~-细胞造血活性更强,更适合用来分离脐血中造血干细胞群。     

Characterization of HMBP-2, a DNA-binding protein that binds to HIV-1 LTR when only one of the three Sp1 sites is methylated

HIV-1 methylation binding protein-1 (HMBP-1) (formerly called HMBP) is a protein found in human cell nuclei that binds with enhanced affinity to a fragment of the HIV-1 long terminal repeat sequence (LTR) containing three Sp1 sites when all three sites are methylated. HMBP-2 is another protein present in the nuclei of human T helper lymphocytes and HeLa cells that binds to the HIV-1 LTR. HMBP-2 binds preferentially to the same region of the HIV-1 LTR as does HMBP-1, but HMBP-2 binds best when only one of the three Sp1 sites is methylated. HMBP-2 can be separated from HMBP-1 chromatographically, and dimethyl sulfate (DMS) methylation interference analysis indicates that their binding sites are not identical. HMBP-2 represents a novel protein factor capable of binding to a partially methylated region of the HIV-1 LTR.     

Umbilical Cord Blood Stem Cell Mediated Downregulation of Fas Improves Functional Recovery of Rats after Spinal Cord Injury

Human umbilical cord blood stem cells (hUCB), due to their primitive nature and ability to develop into nonhematopoietic cells of various tissue lineages, represent a potentially useful source for cell-based therapies after spinal cord injury (SCI). To evaluate their therapeutic potential, hUCB were stereotactically transplanted into the injury epicenter, one week after SCI in rats. Our results show the presence of a substantial number of surviving hUCB in the injured spinal cord up to five weeks after transplantation. Three weeks after SCI, apoptotic cells were found especially in the dorsal white matter and gray matter, which are positive for both neuron and oligodendrocyte markers. Expression of Fas on both neurons and oligodendrocytes was efficiently downregulated by hUCB. This ultimately resulted in downregulation of caspase-3 extrinsic pathway proteins involving increased expression of FLIP, XIAP and inhibition of PARP cleavage. In hUCB-treated rats, the PI3K/Akt pathway was also involved in antiapoptotic actions. Further, structural integrity of the cytoskeletal proteins α-tubulin, MAP2A&2B and NF-200 has been preserved in hUCB treatments. The behavioral scores of hind limbs of hUCB-treated rats improved significantly than those of the injured group, showing functional recovery. Taken together, our results indicate that hUCB-mediated downregulation of Fas and caspases leads to functional recovery of hind limbs of rats after SCI.     

脐血干细胞向不同体细胞分化的研究进展

脐血干细胞是一种具有多分化潜能的原始细胞,具备自我更新和增殖的能力,并能在特定因素的影响或诱导下,向多种细胞或组织分化。脐血来源的间充质干细胞不但可以分化为骨、脂肪和软骨,还可以转变成带有神经、肝脏及骨骼肌特异标记的细胞,并且具有应用到组织损伤修复、基因治疗载体和造血干细胞共移植等方面的潜力。旨在对于脐血干细胞在一定条件下分化为多种细胞研究进展进行综述。     

小鼠脐血移植模型研究进展

脐血中含有丰富的原始造血干细胞,由于免疫细胞发育不成熟,抗原表达和功能活性低下,移植物抗宿主疾病发生率低。脐血来源丰富、不易受病毒及残留肿瘤细胞的污染,越来越多地作为造血干细胞的优质来源在临床上广泛应用。通过建立小鼠脐血移植模型,对临床多种疾病尤其是对恶性血液病的造血干细胞移植研究提供有效途径,可以对脐血的生物学功能、植入过程、移植疗效做进一步研究,不断优化的小鼠移植模型对我们解读人类疾病的发病机理、疾病进程起到推动作用,本文将从小鼠种属的选择、移植模型的构建及脐血移植模型新进展等方面对进行综述。     

脐血干细胞移植治疗肝硬化的临床研究

目的:观察脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效。方法:对60例失代偿期肝硬化患者进行自身对照的临床研究。在无菌条件下取健康产妇足月生产的脐带血,分离纯化脐血干细胞,通过肝动脉途径,将纯化的脐血干细胞移植入患者肝脏内,于移植后2周、4周、8周进行肝功能、凝血指标检测,并于4周及8周行腹部B超及胃镜检查,观察患者移植后不同时间症状改善情况及术后不良反应的发生情况。结果:60例接受脐血干细胞移植的肝硬化患者术中术后无明显不良反应发生。移植后,患者临床症状改善明显,食欲不振、乏力、腹水等减轻甚至消失;血清学检测:白蛋白水平较术前明显升高,凝血酶原时间、总胆红素较术前明显下降;术后8周复查胃镜,食道静脉曲张没有明显变化。结论:脐血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化是一种安全、有效的方法,尤其是在提高白蛋白水平及改善凝血功能方面有很好的疗效,可作为肝移植治疗的过渡或补充治疗。     

脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的临床研究

目的:探讨脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的疗效及安全性。方法:40例脊髓损伤患者给予脐带间充质干细胞移植治疗,移植方法采用静脉输注联合腰穿鞘内注射的方法。术后随访1年余定期观察患者临床症状及各项指标的变化并进行综合分析。移植过程中为促进干细胞的生长和分化,根据患者病情及身体状况给予相应的康复功能锻炼。结果:与入院时比较,脐带间充质干细胞移植治疗3、6、12个月后,不完全性脊髓损伤患者针刺觉评分、轻触觉评分、运动评分均有明显改善(P<0.05或0.01),完全性脊髓损伤患者针刺觉评分、轻触觉评分、运动评分均无明显变化(P>0.05),两组残损分级均无明显改善(P>0.05)。移植后各项生化指标正常,未出现严重的并发症和明显的不良反应。结论:脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤近期疗效明显,可以改善患者的临床症状,提高患者的生存质量,是一种值得借鉴的治疗方法。     

脐带间充质干细胞移植对脑瘫患儿运动功能的影响

目的:探讨脐带间充质干细胞移植治疗对脑瘫患儿运动功能的影响极其应用价值。方法:25例脑瘫患者给予脐带间充质干细胞移植治疗,移植方法采用静脉输注联合腰穿鞘内注射的方法。移植术前及移植术后定期采用粗大运动评估量表(Gross MotorFunction Measure,GMFM)及Berg平衡量表(Berg Balance Scale,BBS)对运动功能的改善情况进行评估并进行综合分析。结果:移植术后6月25例脑瘫患儿中有22例患者主观上运动功能较前有明显好转,客观上25例患者GFMF与BSS与术前比较有明显改善(P<0.05),随访6月未发现与移植相关的副作用。结论:脐带间充质干细胞移植是一种安全有效的治疗方法,可在一定程度上改善脑瘫患者的后遗症,提高脑瘫患者的运动功能和生活质量。     

脐血干细胞移植治疗缺血性心脏病的临床疗效及安全性分析

目的:探讨脐血干细胞移植治疗缺血性心脏病(IHD)的临床效果和安全性。方法:选择2011年1月至2013年1月在我院接受治疗的IHD患者130例。随机分为观察组和对照组,各65例。其中对照组应用常规药物治疗,观察组应用脐血干细胞移植方法进行治疗。观察对比两组患者治疗前以及治疗后3个月的左室舒张末容量(LVEDV)、右室舒张末容量(RVEDV)、左室射血分数(LVEF)及治疗后临床疗效及生活质量改善状况。结果:观察组治疗后显效率和总有效率为49.23%,90.77%,显著高于对照组的30.77%,70.77%,差异均有统计学意义(均P0.05)。两组在治疗前LVEDV、RVEDV以及LVEF比较无差异。在治疗后观察组这三个指标得到明显改善,其中LVEDV和RVEDV减小、LVEF提高均较对照组显著,差异均有统计学意义(均P0.05)。观察组在治疗后身体功能、运动限制和总体健康评分均高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:应用脐血干细胞移植治疗IHD效果好,能显著改善心功能,提高生活质量,安全性高,值得临床使用。     

利用人脐血单个核细胞重建急性肝损伤小鼠肝组织的实验研究

利用人脐血单个核细胞重建急性肝损伤小鼠肝组织,探索建立人-小鼠嵌合肝模型方法。15只SCID小鼠,以四氯化碳(CCL4)制备急性肝损伤模型,24h后行2/3肝切除,然后分为三个实验组细胞移植组(7只)、阴性对照组(3只)及空白对照组(5只);将人脐血单个核细胞悬液注入细胞移植组小鼠脾脏内,阴性对照组小鼠脾脏内注入等量磷酸盐缓冲液(PBS),空白对照组不注射细胞悬液和PBS。术后7d、14d及21d取小鼠肝组织观察病理变化、检测人白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19),同时检测小鼠血清及肝组织匀浆中人ALB含量。全部小鼠表现出急性肝损伤组织学特征;细胞移植组小鼠术后7d、14d、21d肝组织内均见大量人ALB及CK19阳性表达细胞,血清及肝组织匀浆可检测出人ALB;阴性对照组小鼠肝组织未见人ALB及CK19阳性表达,血清及肝组织匀浆中未检测出人ALB。人脐血单个核细胞在部分肝切除的急性肝损伤小鼠肝组织内可大量分化为人肝细胞及胆管细胞,在建立模型方面已取得关键突破。     

脐带血IGF-1浓度和DNA甲基化与巨大儿发生的相关性研究

为探究脐带血中胰岛素样生长因子Ⅰ（insulin like growth factor 1, IGF-1）的浓度和基因甲基化变化与巨大儿发生的关系,选择152名正常妊娠足月分娩的产妇和新生儿为对象,其中68名巨大儿,84名正常出生体重儿.收集产妇及新生儿的基本信息和脐带血样品. 采用双抗体夹心ABC ELISA法测定脐带血IGF-1蛋白浓度,基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术（MALDI-TOF）测定脐带血IGF-1基因启动子区CpG位点的甲基化水平. 结果显示,脐带血IGF-1启动子区CpG位点均呈低甲基化状态. 以所有研究对象出生体重的上四分位数（4 260 g）为拐点,出生体重＜4 260g组的脐带血IGF 1浓度显著高于出生体重≥4 260 g组（P=0.015）,且与出生体重呈正相关关系（r=0.242,P=0.011）. 表明在出生体重＜4 260 g范围内,脐带血IGF-1浓度的增加贡献于出生体重的增长. 但当胎儿过大时,存在负反馈调节机制,使脐带血IGF-1浓度降低,以限制胎儿过度增长. 这些结果提示,脐带血IGF-1浓度与出生体重呈双向性关联,两者均与处于低甲基化状态的脐带血IGF-1的甲基化程度无关.     

shRNA随机文库结合TK自杀基因筛选靶向HIV-1LTR相关宿主因子

构建shRNA随机文库与HIV-1 LTR启动胸苷激酶基因(TK基因)稳定表达的稳定细胞系HEK293/TK,将两者结合起来,筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子.方法:通过化学合成含有19个随机脱氧核苷酸的发夹结构,将其退火补平后与合成的接头Linker连接进行PCR反应,将PCR产物酶切后置于慢病毒载体pLenti-U6启动子下游由此构建shRNA随机文库;利用重叠PCR将HIV-1 LTR片段和TK基因连接起来,连接产物经酶切后与pcDNA3.1载体连接;将连接正确的质粒转染HEK293细胞同时用G418加压筛选获得稳定细胞系HEK293/TK;将所获得的文库质粒包装成慢病毒后侵染所构建的HEK293/TK细胞系,通过加入药物GCV进行加压筛选获得存活细胞.结果:成功筛选到加药后存活下来的细胞,抽提细胞基因组,采用巢式PCR扩增目的干扰序列并用Western blot对干扰序列进行验证,鉴定获得一个克隆所表达的shRNA能对TK基因的表达起到抑制作用,通过测序分析获得其干扰序列,该序列很有可能针对HIV-1 LTR某宿主相关因子.结论:成功构建了一种筛选HIV-1 LTR相关宿主因子的方法,筛选所得序列可以定位到具体相关宿主因子,为靶向筛选抗HIV-1药物提供了重要手段.     

Current Perspectives on Umbilical Cord Abnormalities Including Blood Flow Parameters Based on Ultrasound Observations

The umbilical cord is a vital structure between the fetus and placenta for the growth and well-being of the fetus. Although the umbilical cord may be the only organ that dies at the beginning of life, it is one of the most important parts of the feta-placental unit and plays a role in determining how life begins. In general, the prenatal examination of the umbilical cord is limited to the observation of the number of vessels and the evaluation of umbilical artery blood flow parameters. Pathologists have done more research on the morphological characteristics of the umbilical cord and linked them to perinatal outcomes. The introduction of advanced imaging technology makes it possible to study the characteristics of fetal umbilical cord from early to late gestation. Many studies have shown that the changes of umbilical cord structure may be related to pathological conditions, such as preeclampsia, fetal growth restriction. Prenatal morphometric umbilical cord characteristics and arterial blood flow parameters in normal and pathologic conditions are discussed in this review.     

脐带间充质干细胞与再生障碍性贫血

再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)是由于物理、化学、生物或不明因素作用使骨髓造血干细胞和骨髓微环境严重受损,造成骨髓造血功能降低或衰竭,以全血细胞减少为主要表现的一组综合征。间充质干细胞(MSC)是属于中胚层的一类多能干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中。不仅具有多向分化潜能,还有多种免疫调节作用。许多研究表明MSCs抑制同种异体效应T淋巴细胞增殖,还能下调T淋巴细胞表面的活化分子CD25、CD38、CD69的表达。MSCs对DCs的分化、成熟和活化具有抑制作用,改变DCs的细胞因子分泌,使成熟的DCl分泌TNF-a减少,DC2分泌IL-10增加,从而抑制T淋巴细胞增殖。MSCs能够抑制IL-2和IL-15介导的NK细胞增殖,使IL-2刺激NK细胞分泌的IFN-y减少。通过这些机制来干预再生障碍性贫血,同时研究发现MSCs免疫原性较低。尤其脐带MSC,因为其独特优势,目前已经成为干细胞干预治疗AA的研究热点。     

人外周血单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的AFM研究

采用原子力显微镜与倒置显微镜在细胞层次上观察了人外周单个核细胞(PBMCs)与同种异源脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)共培养的过程,并在单细胞水平上分析了共培养前后人外周单个核细胞的形貌和生物物理性质。结果发现:共培养后贴壁人外周单个核细胞的形态发生了很大的改变,并且表面分布着大小不一的颗粒状聚合物。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,发现共培养72h后培养上清中人外周单个核细胞、贴壁的人外周单个核细胞的粘滞力分别是单纯培养72h的人外周单个核细胞的2倍、5倍,而细胞的硬度分别是单纯培养人外周单个核细胞的1.5倍、2倍。CCK-8检测提示,共培养过程中,干细胞的生长与外周血单个核细胞的生长出现了竞争作用。通过AFM探测人外周单个核细胞与脐带间充质干细胞共培养的可视化数据,有助于更好地了解间充质干细胞与外周血单个核细胞的相互作用。     

脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞的实验研究

目的:探讨通过化学诱导的方法,诱导脐带间充质干细胞分化为类许旺细胞,为组织工程神经寻找一种新的种子细胞来源。方法:通过酶消化法,分离获得原代脐带间充质干细胞。体外培养至第3代(P3),以1×103/cm2接种于培养瓶中,待细胞长至亚融合状态,吸弃培养液,加入含β-巯基乙醇的培养液预诱导24 h。然后,加入含有全反式维甲酸的培养液进一步诱导72 h。最后,加入含有胶质细胞生长因子的培养液,作用两周。对诱导后的脐带间充质干细胞用免疫荧光及RT-PCR法,进行形态观察和表型鉴定。结果:经过上述诱导过程,脐带间充质干细胞的形态,由开始时的扁平、片状、多极,类似成纤维细胞状,逐渐变为长梭形,双极或三极,类似许旺细胞。同时,表达许旺细胞特异性标志S-100、P75;而且S100,P75的m RNA水平也明显上调,并且可以观测到GFAP的m RNA条带。结论:化学诱导法,可以将脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞,有望为组织工程神经提供一种新的许旺细胞来源。     

采集到制备的不同时长对脐带血干细胞冻前质量的影响

目的:分析采集到制备不同的时长对脐带血干细胞的冻前相关质量指标的影响,为确定合适的采集到制备时长提供依据。方法:选取1712份脐带血样本,按照采集到制备的时长分为12 h组、(12-24) h组、(24-36) h组和(36-48) h组,分析脐带血干细胞冻前有核细胞数量、有核细胞活性、CD34+细胞百分比及CFU-GM集落数的变化。结果:(1)冻前有核细胞数量随着时间延长而下降,但各组冻前有核细胞数量的差异无统计学意义(P0.05);(2)各组的有核细胞活性结果比较发现,(12-24) h组和(24-36) h组的有核细胞活性差异无统计学意义(P0.05),其余各组间有核细胞活性比较差异均有统计学意义(P0.05);(3)CD34+细胞百分比随时间延长有微弱的升高趋势,但是差异无统计学意义(P0.05);(4)各组的CFU-GM集落数比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:随着脐带血采集到制备的时长增加,有核细胞活性会逐渐下降。脐带血采集后在36小时内制备是安全的,其干细胞的质量指标可稳定保持在较高水平,脐带血在36-48小时制备虽然质量有微弱下降,其干细胞的冻前质量也满足临床出库需求。