原生质、原生质体与原生质球

原生质(Protoplasm)原是生命的原始物质或首要物质之意。法国动物学家迪雅尔丹(Félid Dujardin,1801—1860)在1835年将原生动物的细胞物质称为原肉质(Sarcode)。1839年捷克斯洛伐克生理学家浦金野(Jan Evangelism Purkyně,1787—1869)把植物细胞物质称为原生质。同年德国植物学家摩尔(Hugo von Mohl,1805—1872)确认两者为同样物质。1879年德国植物学家、细胞学家施特拉斯布格(Eduard Strasburger,1844—1912)以原生质指动植物细胞内整个的粘稠的有颗粒的胶体,包括细胞质和核质。随着科学技术的发展,细胞的复杂结构和化学组成逐渐被认识,原生质作为一种物质的概念就逐渐失去意义。现在原生质这个词,是泛指细胞的全部生命物质,包括细胞膜(质膜)、细胞质和细胞核三部分,主要成分为核酸和蛋白质。 1880年德国植物学家汉斯坦(Hanstein)将细胞质     

柱胞鱼腥藻原生质球自发融合的研究

早在1976年,细菌就实现了原生质体融合杂交[1]。同样是原核生物,蓝藻原生质球融合及细胞杂交至今没有任何报道。究其原因,首先是由于蓝藻原生质球再生技术长期不过关、近年来,蓝藻原生质球再生虽有若干报道[2～4],但再生技术还不够成熟;另一方面,很早就通过电镜检查发现     

蓝藻原生质球渗透稳定剂的研究

蓝藻原生质球渗透稳定剂的研究郭厚良,陈勇,金传荫（武汉大学生物系,４３００７２）（中国科学院水生生物研究所,武汉４３００７２）ＡＳＴＵＤＹＴＯＴＨＥＳＴＡＢＩＬＩＺＥＲＳＩＳＯＬＡＴＩＮＧＯＦＢＬＵＥ－ＧＲＥＥＮＡＬＧＡＬＳＰＨＥＲＯＰＬＡＳＴＳ￥Ｇ...     

蓝藻原生质球研究的现状及存在问题

在原生质体(球)技术方面,蓝藻也许是一种最为困难的材料了。蓝藻原生质球的研究工作起步不算很晚,但进展不快。直到现在,作为一项可以用于遗传操作的基本技术还没有建立起来。这主要表现在,原生质球的再生问题没有解决;此外,在基本分离制备方面也存在不少问题。而对于植物、真菌、细菌、放线菌和绿藻,这些问题都早已     

五属七种蓝藻原生质球分离研究

五属七种蓝藻原生质球分离研究郭厚良，宋文贞，金传荫（武汉大学生物系，武汉，４３００７２）（中国科学院水生生物研究所，武汉，４３００７２）关键词蓝藻，原生质球，青霉素，溶菌酶ＡＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥＩＳＯＬＡＴＩＯＮＯＦＳＰｌｌＥＲＯＰＬＡＳＴＳＦＲＯＭ...     

螺旋藻原生质球的分离及其光合作用特性的研究

利用改进后的分离方法可获得大量有活性的钝顶螺旋藻 ( Spirulina platensis)原生质球。原生质球大小不等 ,直径在 2 .9～ 4 .6μm,原生质球表面有皱纹及小的孔洞 ,放氧速率为完整藻的 4 0 %。原生质球的室温吸收光谱表明其色素种类与完整细胞基本相同 ,都具有叶绿素 a、藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白和类胡萝卜素。但原生质球中减少了藻蓝蛋白和类胡萝卜素的相对含量 ,而藻红蓝蛋白明显增多。螺旋藻的完整细胞与原生质球的 77K荧光发射光谱略有不同 :激发光为 4 36nm时 ,藻丝体和原生质球都具有 4个荧光发射峰 :F686、F696、F730和 F75 7,原生质球的 F75 7明显减弱 ;激发光为 5 80 nm时 ,藻丝体有 5个发射峰 :F64 0、F685、F693、F72 8和 F75 8,原生质球的 F75 8消失。原生球中 F72 8/F685、F64 0 /F685值增高 ,F693/F685值降低 ,光系统 的 F72 8与捕光色素系统的 F64 0的比值降低。上述结果表明 ,失去细胞壁可能抑制光系统 活性 ,在光系统 与 F695有关的核心天线色素系统受影响更大     

灵芝原生质制备,再生及融合的研究

报道不同菌龄、酶液浓度、稳渗剂对灵芝原生质体产率及不同种类、不同浓度的稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明,诱变后具抗药性标记的“中国红灵芝”（菌种ｍＨ１）原生质体制备时菌丝最知菌龄为４８小时,酶液浓度为３％,稳渗剂以０．６ｍｏｌ／Ｌ蔗糖为佳;诱变后具抗药性标记的“韩国红灵芝”（ｍＫ１）原生质体制备时菌丝早适菌龄为４０小时,酶液浓度为１％,稳渗剂为０．４ｍｏｌ／Ｌ甘露醇时原生质体产率最高。ｍＨｌ,     

染色体DNA转化原生质球构建解烃工程菌

用供体菌C_(20-11)和D_(36-3)染色体DNA转化受体菌T_3原生质球。采用5mg/ml溶菌酶,37℃水浴1小时制备原生质球。原生质球形成率为99％,再生率为72.5％。在30％、PEG6000和0.1MCaC1_2作用下,供体DNA转化受体原生质球。我们用上述条件构建了能够同时降解以下四种碳源:苯甲酸、萘、樟脑、十六烷的工程菌株TCD32-14-1。     

鱼腥藻SP.595液泡化原生质球诱导条件的研究

用浓度为0．15mol／L的KNO3、KCl、K2SO4、KH2PO4、K2HPO4、NaNO3、NaCl、Na2SO4、NaH2PO4、Na2HPO4、(NH4)2SO4、MgSO4、CaC12等单盐分别配合0．1％的溶菌酶处理鱼腥藻sp．595(Anabaenasp．595)。经4h,KH2PO4、K2SO4、Na2SO4、NaH2PO4、(NH4)2SO4、MgSO4、CaC12能诱导形成原生质球,但液泡化原生质球极少,而KNO3、NaNO3、NaC1诱导形成少量液泡化原生质球。用相近浓度的双盐,即KNO3和NaC1、KNO3和(NH4)2SO4、NaC1和(NH4)2SO4分别配合0．1％的溶菌酶处理,诱导效果亦不佳。用相近浓度的三盐NaC1、KNO3和(NH4)2SO4及五种盐NaC1、KNO3、(NH4)2SO4、Na2HPO4和KH2PO4分别配合0．1％的溶菌酶处理,诱导原生质球和液泡化原生质球的效果明显提高,液泡化原生质球比例达到66．90％—79．97％。     

丝状固氮蓝藻柱胞鱼腥藻原生质球的培养再生

丝状固氮蓝藻柱胞鱼腥藻 (Anabaena cylindrica)在含 0 .1mol/ L KCl的 Allen液体培养基中培养7～ 9d,90 %以上细胞转化为原生质球或半原生质球 ,对低渗敏感或抗低渗。此种材料经 0 .1%溶菌酶 ,在 2 8℃下处理 3～ 4h,细胞低渗破裂率约 10 0 % ,成为质量较高的原生质球。用 0 .15mol/ L Ca Cl2 液体无机盐培养基培养 ,原生质球再生和分裂。不同原生质球再生不同步 ,最快培养 3 d分裂。再生分裂的主要方式为均等分裂 ,但有不规则分裂和出芽方式 ,再生率在 2 5%以上。     

鱼腥藻Anabaena PCC7120原生质球和液泡的同步诱导

植物和真菌的液泡,都是通过原生质体途径被分离后才得以深入研究.要分离蓝藻液泡,首先要求制备蓝藻原生质体(球),而这一技术在蓝藻方面长期不过关.最近十年来,作者在这方面进行了不断的努力,先后在蓝藻原生质球制备1、培养再生和融合2等方面获得进展,这方面的研究导致了蓝藻液泡的重新发现3.所发现的液泡由无机盐诱导产生,经电镜检查为单位膜所包围,故确定为液泡.借助较为成功的原生质球制备技术,首先分离了无机盐诱导形成的液泡,在此基础上进一步发现和分离了非诱导液泡4,在分离非诱导液泡的试验过程中发现了原生质球和液泡的同步诱导作用.       

分离蓝藻原生质球的新方法：青霉素－溶菌酶法

蓝藻原生质球(体)的研究,至今尚未取得决定性突破,成为细胞壁生物之中的唯一例外。这不仅表现在原生质球(体)的再生没有成功,而且分离制备方法亦存在很大问题。从1967年沿用至今的Crespi-Biggins溶菌酶法不仅在质量上不能得到真正理想的原生质球,而且数量上也达不到。由于在分离过程中细胞大量破裂,原生质球的产率很     

大肠杆菌微球包封效率及稳定性的研究

多聚物制备而成的微球是一种具有佐剂效应的疫苗控释系统,在疫苗研制中得到广泛应用.为改进大肠杆菌疫苗的制备质量,本文以天然高分子聚合物海藻酸钠和壳聚糖为材料,应用了三种不同制备微球的方法来制备大肠杆菌微球,观察微球的形态、粒径和稳定性,并测算其对大肠杆菌的包封率.结果表明,采用乳化-内部凝胶化法制备的大肠杆菌海藻酸钙-壳聚糖微球,圆整规则,粒径较小,包封率达到≈93.1％,具有良好的控释性能和稳定性,适于低温保存.     

绿脓杆菌血清型的研究

在全国16个主要省市100多所医院里,收集了869株绿脓杆菌,并进行了血清型分类。分型率达98.7％。从血清型分布规律看,前4个型分布的最多(占59％),其次是7、8、9型(占31．3％),5、6、10和11型分布极少。Fisher的7个免疫型株中I、II、IV、VI和VII型菌各与我国血清型株有交叉凝集,而III和V型菌没有交叉凝集。本文还叙述了血清型的分型方法。并用此方法对本菌的流行病学和生态学研究的意义进行了讨论。     

观察原生质流动的材料

在中学里观察原生质流动的较好材料有黑藻(Hydrilla Verticillata水鳖科)、苦草(Vallisneria spiralis水鳖科)的嫩叶。水鳖(Hydrocharis dudia水鳖科)的根毛。轮藻(Chara globularis绿藻门)的叶节间细胞。南瓜、冬瓜、黄瓜茎、叶上的表皮毛。鸭跖草(Commelina Communis鸭跖草科)的花瓣、紫鸭跖草(Tradescuntia Virginical鸭跖草科)的雄蕊花丝毛。小麦幼苗的根尖,洋葱鳞茎的内表皮。在国外学校里常用加拿大藻(Elodea Canadensis产欧洲)。     

大肠杆菌肠毒素的基因融合及其免疫原性的研究

应用重组基因工程技术,将热敏肠毒素Ｂ亚基（ＬＴ－Ｂ）基因与含有部分前体的耐热肠毒素（ｐｒｏ－ＳＴ）基因融合在一起,构建了表达ＬＴ－Ｂ／ｐｒｏ－ＳＴ融合蛋白的重组质粒．该融合蛋白不仅保持结合神经节苷脂（ＧＭ１）的能力,而且具有热敏肠毒素和耐热肠毒素的抗原性．乳鼠实验证明,融合蛋白虽然含有野生耐热肠毒素,但不具耐热肠毒素的生物毒性．腹腔免疫和鼻饲免疫均能激发产生抗ＥＴＥＣ两种肠毒素的抗体．     

玉米黑粉菌DNA载体的构建和它的原生质球的转化和再生

我们用玉米黑粉菌(Ustilago maydis)热休克基因(Heat shock gene,hsp 70)的启动子和终止子与新霉素磷酸转移酶基因相连,构建成了有效的双功能质粒pDL1(在E。coli中用Amp作为选择标记,在玉米黑粉菌中用新霉素作为选择标记)。以分离的一株新霉素敏感的玉米黑粉菌作为受体菌,用构建的pDL1质粒作为供体DNA,对影响受体菌原生质球的形成条件(培养基、菌龄、各种酶、酶的浓度、作用时间和渗透压稳定剂)、再生条件和DNA转化条件进行了初步研究。对数前中期收集的菌体,以5mg/ml真菌溶壁酶处理30分钟左右,90%都形成原生质球,其再生率为60—80%,转化率为300—1000转化子/μg DNA。随机选出25个转化子,DNA杂交都为阳性。分析dot-blot和Southern blot DNA杂交结果,发现质粒在细胞中以整合形式存在,一个细胞可以有多拷贝的整合质粒,质粒可能以非完全同源性的重组形式,参入性地整合进染色体中。     

人白细胞介素－2－绿脓杆菌外毒素融合蛋白的初步研究

白细胞介素－２：绿脓杆菌外毒素；融合蛋白；原核表达；细胞毒活性     

原生质流动的观察实验

近来我用孔雀草(万寿菊Tagetes patula)花的表皮毛观察有色体时,同时发现了原生质的流动。经与其它材料的比较,我觉得用孔雀草花的表皮毛观察原生质流动效果较好。且具有取材方便、操作简易、杂色体多、原生质流动快等特点,便于学生掌握。