牛生长激素抗体的制备及其纯化

 <正> 生长激素是垂体前叶分泌的蛋白质类激素,它在体内有多种生物学效应。近年来,对生长激素的作用机理及生长激素基因工程的研究报道很多,国内也开始了这方面的工作。我们实验室从1984年开始进行牛生长激素基因工程的研究。在这项研究中,为获得牛生长激素基因的探针,首先需要有高纯度牛生长激素mRNA。双抗体免疫沉淀法是分离、纯化特异mRNA的有效方法,采用这种方法分离牛生长激素(bGH)mRNA,需要有高纯度bGH抗体。此外,高纯度牛生长激素抗体对于检测生长激素cDNA在细菌中的表达,对于制备亲和层析     

tRNA的结构、功能及合成简介

DNA是遗传的物质基础.DNA分子中由4种碱基组成的不同的核苷酸的排列顺序携带着不同的遗传信息.DNA分子所储存的遗传信息,必须通过转录传递给信使RNA分子(mRNA),才能到达蛋白质合成的场所--核糖体.然后合成蛋白质的酶系再把mRNA所带来的信息翻译成蛋白质.     

真核细胞中多重表达框mRNA的选择性翻译起始

扫描模型和遗漏扫描模型是真核生物mRNA翻译起始的两种主要机制,但其仍存在某些例外情况,如对具有多顺反子结构的mRNA,选择性翻译起始的发生机制目前仍不清楚.本研究基于GFP蛋白开放表达框(ORF)构建了一系列重组表达载体,用以转录在移码翻译顺序及同一翻译顺序下,AUG起始密码子处于不同序列背景,以及间隔不同距离的多顺反子结构mRNA.通过转染人Bel 7402细胞系,研究了这些多顺反子结构mRNA的翻译起始模式.结果表明,在移码翻译顺序下,多顺反子mRNA可翻译出对应的不同蛋白质,而在同一翻译顺序下,GFP蛋白表达框中的多个AUG密码子,仅有首位起始密码子可发挥作用,提示核糖体在从首位起始密码子开始翻译的同时,可能会有部分核糖体继续向下扫描并识别下游的起始密码子,而这种选择性的翻译起始效率,主要取决于密码子所处的序列背景及间隔距离等因素.     

猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达及其对伪狂犬病病毒的抑制

目的:研究猪Mx1和牛Mx1蛋白在PK-15细胞中的表达并检测其是否对伪狂犬病病毒(PRV)具有抑制作用。方法:从IBRS-2细胞和MDBK细胞中分别调取猪Mx1和牛Mx1基因,并克隆到pc DNA3.1/myc-His(-)B,构建得到真核重组表达质粒,以脂质体转染的方法将其分别导入到PK-15细胞,从mRNA水平和蛋白质水平鉴定重组质粒在细胞内的表达情况,然后用细胞毒性试剂盒检测这两种蛋白是否对PK-15细胞具有毒性。之后,通过荧光定量PCR检测猪Mx1和牛Mx1在攻毒后不同时间、不同攻毒剂量的条件下对PRV的抑制情况,并观察100TCID50病毒攻击细胞72h后的病变程度。结果:成功克隆了猪Mx1和牛Mx1基因,经mRNA水平和蛋白质水平证实,两种重组质粒在PK-15细胞内能够正常表达。从荧光定量PCR和细胞病变的角度来看,细胞内表达的Mx1蛋白对PRV具有显著性的抑制(P0.001)。结论:猪Mx1和牛Mx1基因在PK-15细胞中表达的Mx1蛋白能够抑制PRV在胞内的复制。     

氨基酸、肽和蛋白质的色谱分析及色谱法制备

<正> CA96(05)30198v J牛肠内钙束缚蛋白质的氨基酸顺序Full-mer,Curtis S.et al.,Dey.Biochem.,1980,363—70,英文CA96(05)30258q J人体钴氨素束缚蛋白质中Apo和Holo间的疏水作用Begley,James A.et al.,Biochem.Biophys.Res.Commum,1981,2,434—41,英文CA96(05) 31002p J从混合功能柱中生物专一性的解吸附Yon,     

反义及正义表达癌基因c-Ha-ras重组质粒的构建

c-Ha-ras癌基因通过其产物p21蛋白的点突变或过量表达使细胞恶变。国外一些实验室的初步研究表明,导入一段与c-Ha-ras基因转录出的mRNA(sense RNA,正义RNA)顺序互补的RNA(anti-sense RNA,反义RNA),有可能通过阻断DNA复制,RNA转录或蛋白质翻译等过程,减少p21蛋白的合成,从而使转化细胞逆转。为了进一步系统研究反义c-Ha-ras RNA在转化细胞逆转中的     

脊髓和周围神经可溶性酸性蛋白质的研究

 利用微型双向电泳、SDS电泳、免疫印迹法、DEAE-Sephadex色谱、高效液相色谱及氨基酸分析等方法,对牛脊髓(中枢神经)和马尾神经(周围神经)的可溶性酸性蛋白质进行了研究。结果表明在牛脊髓和马尾神经中有钙调素(CaM)、S-100蛋白和神经元特异烯醇化酶(NSE)等可溶性酸性蛋白质存在;脊髓中这些酸性蛋白质的含量远较马尾神经为高。     

我国成功研制表达凝血八因子新的重组质粒

石家庄牛满江实验室科研人员经过艰苦攻关,近日成功研究出表达凝血八因子的一种新的重组质粒,这为生产治疗血友病的药物“基因重组人的凝血八因子”奠定了基础。国家专利局已经受理了该项目的发明专利申请。     

基因的转录都必须是连续的吗?

蛋白质的一级结构是由 mRNA 决定的,而 mRNA 是在基因组的一段 DNA 上合成的。通常认为一段连续不断的 DNA 为一分子蛋白质的编码,亦即 mRNA 是直接从这一段 DNA的顺序连接地转录下来的。这段 DNA 就是这个要被翻译出的蛋白质的基因。原核生物方面的实验无疑是支持这种看法的,不过真核生物方面的一些实验结果却很不相同。     

合成编码蛋白质基因的设计

 本文以牛生长激素基因为例,对合成编码蛋白质基因的微机设计原理进行了探讨。微机程序的编制采用高级BASIC语言,在IBM-PC微机上完成。设计合成编码蛋白质基因的要点为:(1)按照宿主系统中高表达蛋白质基因对密码子的使用频率选用氨基酸密码子,以期合成基因得到高效表达;(2)对较大的合成基因设计有能够进行分段克隆的酶切位点,从而将一个大的基因分解成为多个基因片段的合成,减少了酶促连接化学合成DNA片段的步骤;(3)对于酶促连接化学合成DNA片段有干扰的重复顺序和互补顺序,则利用变换简并密码子的办法予以消除。     

大豆胚轴信使核糖核酸(mRNA)的分离

信使核糖核酸(以下简称mRNA)是在细胞质中指导蛋白质合成的遗传物质。已有不少动物组织mRNA分离纯化,植物材料中的mRNA报导不多。我们用Oligo(dT)—纤维素柱层析法分离、纯化了大豆(Glycine max)胚轴的mRNA。引言 mRNA是从细胞核内DNA处接受遗传信息,携至细胞质中供作蛋白质生物合成的模板。但确定它存在的历史却起源于一个假说。那是1961年Jacob及Monod根据大肠杆菌乳糖操纵子控制某些诱导酶形成过程的现象而提出的学说。这个学说很快就由Brenner、Jacob和Meselson在研究感染     

胚胎干扰素

随着生殖生物学研究的不断深入,从分子生物学水平探索着床机理已成为一种必然趋势。美国的J.D.Gordin和R.M.Robert等从羊、牛妊娠早期的胚胎分泌物中分离出干扰素类似物:羊滋养层蛋白质-1(ovine trophoblast Protein-1)和牛滋养层蛋白质-1(bovine tropho-blast protein-1),并首先提出了胚胎干扰素(conceptus interferon)的概念。     

肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS对BDNF基因表达调控作用的研究

该文旨在探讨肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS(antisense brain derived neurotrophic factor)对BDNF基因表达的调控作用。将BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒瞬时转染肝癌细胞HepG2后采用q PCR方法检测肝癌细胞中lncRNA BDNF AS和BDNF mRNA水平;采用Western blot方法检测BDNF蛋白质水平;采用ELISA方法检测细胞培养上清中BDNF蛋白质水平;采用免疫荧光染色检测BDNF蛋白质水平;采用FISH方法检测lncRNA BDNF AS和BDNF mRNA的水平和亚细胞定位。研究结果显示,转染BDNF AS质粒的细胞中,lncRNA BDNF AS水平高于对照组(P0.001),BDNF mRNA和蛋白质水平均低于对照组(P0.001)。转染突变体质粒的细胞中,lncRNA BDNF AS水平高于对照组(P0.05),低于BDNF AS组(P0.001),BDNF mRNA和蛋白质水平低于对照组(P0.05,P0.001),高于BDNF AS组(P0.05,P0.001)。免疫荧光染色发现,转染BDNF AS质粒和转染突变质粒细胞的平均D值均低于同一视野中未转染的其他细胞(P0.05,P0.01)。FISH染色显示,转染BDNF AS质粒的细胞中,BDNF mRNA在细胞中分布的核/质比低于对照组(P0.001);转染突变质粒的细胞中,BDNF mRNA在细胞中分布的核/质比低于对照组(P0.05),高于lncRNA BDNF AS过表达的细胞(P0.05)。该研究结果表明,肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS过表达下调BDNF mRNA和蛋白质水平,二者基因完全互补序列参与lncRNA BDNF AS对BDNF基因表达的调控作用。     

翻译延伸的顺式调控机理与生物学效应

翻译延伸是核糖体将信使RNA (mRNA)蕴含的遗传信息解码为蛋白质的有序过程,是细胞维持基本代谢活动的核心步骤。多种人类疾病(如神经退行性疾病、癌症等)都与翻译延伸的异常有关。翻译延伸作为中心法则的关键步骤曾是现代分子生物学研究的重点内容,然而方法学上的限制却阻碍了对其动态过程以及调控规律的进一步研究。近年来,对翻译延伸调控相关方法的突破让与其相关的生命科学研究获得了长足的发展,尤其是近10年来的研究揭示了翻译延伸的复杂调控机理和多种生物学效应,为理解蛋白表达调控和疾病发生的关联提供了新的理论视角。本文在总结翻译延伸研究方法的基础上,重点探讨了顺式调控元件(mRNA与新生肽链序列)对局部翻译延伸速率的调控作用,同时列举了翻译延伸调控对模板mRNA和蛋白质产物功能的影响,包括mRNA稳定性、蛋白质的合成与降解、蛋白质亚细胞定位以及蛋白质共翻译折叠等,以期吸引生命科学各领域的学者共同参与翻译延伸领域的研究。     

HTLV-Ⅰ tax反义RNA逆转小鼠神经纤维瘤

来源于转基因小鼠 (HTLV ⅠLTRtax基因 )的神经纤维瘤细胞系的细胞中 ,外源基因HTLV I tax高表达产生mRNA和蛋白质 ,使细胞出现转化表型 .当将反向插入了HTLV I taxcDNA的逆转录病毒导入这种细胞后 ,转录生成的反义RNA可抑制tax基因的表达 ,mRNA和蛋白质均减少 40 %强 ;细胞的形态和生长特征也随之发生明显变化 ;原先由Tax蛋白质激活的基因如GM -CSF ,IL -6,LT/TNF (蛋白质水平 ) ,c -myc和LIF(mRNA水平 )等的表达均下调 ;M -CSF(蛋白质水平 )和原癌基因c src(mRNA水平 )的表达上升 ;β 肌纤蛋白mRNA则不受影响 .这些变化可能是由于tax反义RNA降低了细胞内Tax蛋白质浓度的缘故 .这表明HTLV ⅠTax蛋白质维持转化细胞的形态、生长和增殖起关键性作用 ;由Tax蛋白质激活的细胞内源基因的表达受阻 ,则是转基因小鼠发生神经纤维瘤的原因 .     

mRNA药物研究进展及市场应用分析

信使RNA(messenger RNA,mRNA)是一段编码蛋白质的核糖核苷酸序列,因为其进入细胞经翻译修饰后可以表达目的蛋白,所以mRNA分子可以作为药物治疗相应的疾病。mRNA药物用于治疗多种疾病,包括感染性疾病、肿瘤,以及由于缺少某种蛋白质或者某种蛋白质机能异常所引起的疾病,甚至作为基因编辑的工具参与基因治疗。mRNA分子作为疫苗用于预防感染性疾病已经在市场上取得了巨大的成功,因此其应用潜力得到了广泛的关注。由于mRNA药物应用方向广泛,且mRNA药物具有研发生产过程快、生产成本较低等优势,目前多种mRNA药物的相关研究正在进行中。就mRNA的基础结构、mRNA的递送系统、国内外mRNA药物的研究及临床进程进行综述,并对进一步广泛应用mRNA药物所面临的问题进行探讨。     

枯草杆菌复制始区主要核糖体蛋白质基因群中两个新突变的遗传研究

我们分离到19株螺旋霉素抗性(spi~R)突变体和49株核糖霉素抗性(Rib~R)突变体。其中有5株带有改变的核糖体蛋白质,这些蛋白质是:S4,S5,L18,L23和L13,它们的改变同抗菌素抗性表型没有因果关系。遗传定位spi和rib在主要核糖体蛋白质基因群中,基因排列的顺序是:cysA—rib—rpsL—spi—ts-5—rpsC—rpsE—ts。L23蛋白质基因也在rpsL—rpsC区,L18蛋白质基因不在这一区域内。带有L18蛋白质基因突变的SP4菌株的大分子合成速率都比对照菌株低,而仅带有L23蛋白质基因突变的TDL23菌株,RNA合成速率降低,蛋白质合成速率与对照菌株相差不大,这是TDL23的mRNA合成蛋白质能力提高的结果。     

如何改造蛋白质

1.前言 蛋白质是由20种L-α-氨基酸通过肽键接连起来的多肽链组成的。不同的蛋白质,其氨基酸的组成数目、种类、顺序也不一样。蛋白质的氨基酸顺序(也称一级结构)是由每种蛋白质的基因(DNA)的核苷酸序列决定的。生物机体产生的蛋白质是生物个体维持其生命、进行繁殖不可缺少的物质。     

mRNA展示技术

mRNA展示技术是一种新兴的体外筛选多肽和蛋白质的有力工具.在筛选过程中,mRNA与其编码的多肽或蛋白质共价结合,形成mRNA-蛋白质融合体,能在大容量的多肽文库(1013～1015)中筛选具有特定生物学功能的多肽和蛋白质.目前,mRNA展示技术主要应用于各种靶分子的多肽和蛋白质适体的发现以及蛋白质相互作用机制的阐明和分析.由于其自身的巨大发展潜力,mRNA展示技术具有更为广阔的应用前景.     

应用免疫技术纯化特异性mRNA

真核基因表达的调控的研究,是分子生物学最活跃的领域之一。为了深入地对这一问题进行研究,分离特定蛋白质的信使RNA(mRNA)及其基因(DNA)是非常之必需。由于mRNA分子的长度随其所编码的多肽链的长度不同而有很大的差别,因此按其分子量的大小和密度,通过密度梯度超离心的方法,从理论上来说可以得到不同的mRNA。然而到目前为止,用此法只从特定组织或细胞中分离纯化几种蛋白质的mRNA,如分别从网织红血球、蚕丝腺以及早期海胆胚及同步的Hela细胞中分离纯化了血红蛋白、丝蛋白及组蛋白等mRNA,由于这些mRNA多半是这些组织和细胞中mRNA