小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1／NDPK A的表达

nm23家族除与肿瘤转移抑制有关,它还参与调节正常细胞的发育、增殖、分化及凋亡等过程。运用RT-PCR、Western blot和免疫组织化学技术,分析小鼠胚泡黏附时子宫内膜着床点和着床旁组织nm23-M1／NDPK A的表达,以未交配鼠作对照,为进一步阐明胚泡着床的机制提供有意义的实验依据。RT-pCR结果显示,小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M1／NDPK A mRNA表达明显高于对照组,并且着床点明显高于着床旁,Western blot和免疫组织化学分析nm23-M1／NDPK A蛋白表达,也得到一致的结果。提示nm23-M1／NDPK A参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

钙网质蛋白在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜的表达及意义

目的:研究钙网质蛋白(CRT)在PCOS大鼠子宫内膜中的表达及生物学意义。方法:60只雌性SD大鼠随机分为PCOS组和对照组,每组各30只。给模型组24日龄大鼠皮下埋植左旋甲基炔诺酮硅胶棒3 mm/只,3 d后BID皮下注射人绒毛膜促性腺激素1.5 IU。给对照组皮下注射等体积生理盐水。注射9 d后观察大鼠卵巢形态学(HE染色),化学发光法测定性激素水平。结果:模型组大鼠卵巢重量和体积均显著高于对照组(P<0.01)。模型组大鼠卵巢出现类多囊卵巢综合征的改变。模型组卵巢各级发育期卵泡及黄体少见,卵泡多呈囊性扩张。模型组大鼠血清孕激素、睾酮、空腹胰岛素、空腹血糖水平均显著高于对照组(P<0.05);卵泡刺激素(FSH)水平显著低于对照组(P<0.05)。LH/FSH比值显著高于对照组(P<0.05)。采用免疫组织化学方法及灰度值测定,定量分析CRT在PCOS组和对照组的子宫内膜中表达。CRT在两组中的子宫内膜中均有表达。PCOS组子宫内膜上皮CRT表达显著低于对照组(P<0.01)。结论:避孕硅胶棒联合hCG诱导SD大鼠多囊卵巢综合征模型是较好的PCOS模型。CRT与PCOS的发病密切相关。     

钙网质蛋白在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜的表达及意义

目的：研究钙网质蛋白（CRT）在PCOS大鼠子宫内膜中的表达及生物学意义。方法：60只雌性SD大鼠随机分为PCOS组和对照组,每组各30只。给模型组24日龄大鼠皮下埋植左旋甲基炔诺酮硅胶棒3mm／只,3d后BID皮下注射人绒毛膜促性腺激素1．5IU。给对照组皮下注射等体积生理盐水。注射9d后观察大鼠卵巢形态学（HE染色）,化学发光法测定性激素水平。结果：模型组大鼠卵巢重量和体积均显著高于对照组（P〈0．01）。模型组大鼠卵巢出现类多囊卵巢综合征的改变。模型组卵巢各级发育期卵泡及黄体少见,卵泡多呈囊性扩张。模型组大鼠血清孕激素、睾酮、空腹胰岛素、空腹血糖水平均显著高于对照组（P〈0．05）;卵泡刺激素（FSH）水平显著低于对照组（P〈0．05）。LH／FSH比值显著高于对照组（P〈0．05）。采用免疫组织化学方法及灰度值测定,定量分析CRT在PCOS组和对照组的子宫内膜中表达。CRT在两组中的子宫内膜中均有表达。PCOS组子宫内膜上皮CRT表达显著低于对照组（P〈0．01）。结论：避孕硅胶棒联合hCG诱导SD大鼠多囊卵巢综合征模型是较好的PCOS模型。CRT与PCOS的发病密切相关．     

p16INK4a在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响

本研究旨在检测肿瘤抑制基因p16INK4a(inhibitor of cyclin-dependent kinase 4a)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨p16INK4a在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕小鼠及孕小鼠第2、3、4、5、7天子宫内膜p16INK4a mRNA和蛋白的表达;子宫角注射p16INK4a抗体观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示孕小鼠子宫内膜组织p16INK4amRNA的表达高于未孕小鼠,且随着妊娠天数的增加呈现表达逐渐增强的趋势,到妊娠第5天达到最高,后渐降.免疫组织化学分析显示p16INK4a蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射p16INK4a抗体后胚泡着床数明显减少.以上结果提示,P161INK4a在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与胚泡着床.     

PTEN在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响

本研究旨存检测肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase andtensinhomologdeletedonchromosometen)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨PTEN在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用实时荧光定量聚合酶联反应(real.time fluorescent quantitative PCR.FQ.PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕及孕1、3、4、5、7 d小鼠子宫内膜PTEN mRNA和蛋白的表达;子宫角注射PTEN反义寡核苷酸观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示,妊娠小鼠子宫内膜组织PTENmRNA的表达高于未妊娠小鼠,且随着妊娠天数的增加表达逐渐增强,到妊娠第5天达最高.免疫组织化学分析显示,PTEN蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射PTEN反义寡核苷酸后胚泡着床数明显减少.结果提示,PTEN在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床.     

热休克蛋白70在妊娠早期小鼠子宫中的表达及雌激素的诱导作用

采用Western印迹、免疫组织化学、免疫电镜和图像分析技术研究了妊娠早期小鼠子宫热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)的表达变化以及雌二醇对子宫HSP70表达的影响。结果表明：(1)与正常小鼠相比,孕鼠HSP70含量显著增多,且随妊娠日龄的增加而增加(P＜0．01);(2)小剂量(0．28μg／g体重)和大剂量(1．10μg／g体重)雌二醇均可诱导小鼠子宫HSP70免疫反应阳性细胞数显著增加(P＜0．01),但不表现剂量依赖关系;(3)Western印迹显示雌二醇使子宫HSP70蛋白谱带发生改变,正常小鼠仅有73kDl条蛋白带,小剂量组检出68kD、72kD、73kD3条蛋白带,大剂量组检出72kD、73kD2条蛋白带;(4)电镜下,HSP70免疫阳性反应定位于子宫内膜基质细胞胞浆与细胞核。这些结果提示,HSP70可能与蜕膜反应中基质细胞增殖密切相关,雌二醇对子宫HSP70的表达具有明显的诱导作用[动物学报49(3)：345—352,2003]。     

XBP1在小鼠早期妊娠子宫的表达和调节

转录因子X盒结合蛋白1 (X-box binding protein-1,XBP1)在未折叠蛋白反应中起关键作用.本研究旨在分析XBP1在小鼠早期妊娠过程中的表达和调节,探讨其与胚胎着床的相关性.分别建立小鼠早期妊娠、人工诱导蜕膜化、发情周期和激素调节模型,通过免疫组织化学染色和实时定量RT-PCR技术检测XBP1在这...     

小鼠围着床期子宫内膜甲基化CpG结合域蛋白2的表达规律

为研究甲基化CpG结合域蛋白2（methyl-CpG binding domain protein 2,MBD2）在围植入期小鼠子宫内膜的表达规律,通过采用实时荧光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR）、Western blot和免疫组化技术检测未孕小鼠（d0）和不同孕天小鼠子宫MBD2的表达情况。qPCR结果显示,d0至d7的小鼠子宫内膜组织均有MBD2 mRNA表达,在d5至d7高表达。MBD2蛋白在子宫内膜的表达规律与qPCR结果相符。MBD2蛋白在孕d1到d4中度表达于腔上皮、腺上皮和基质细胞,在d5至d7基质细胞表达增强,主要表达于蜕膜区。假孕小鼠子宫内膜中,MBD2在腔上皮、腺上皮和基质细胞中中度表达,d5至d7基质细胞表达明显减弱。动物模型中,宫角注射MBD2基因反义寡聚脱氧核苷酸,可抑制MBD2的表达,降低人工诱导蜕膜化反应和蜕膜化标志物PRL的表达。MBD2在早孕小鼠子宫内膜的表达模式提示其可能参与了蜕膜化过程。     

WISP2和Slug蛋白在Ⅰ型子宫内膜样腺癌组织中的表达与E-cadherin的关系

目的探讨Ⅰ型子宫内膜样腺癌组织中WISP2、Slug、E-cadherin的表达与临床参数的关系及WISP2、Slug表达与E-cadherin的关系。方法应用免疫组织化学方法检测85例Ⅰ型子宫内膜样腺癌、30例正常子宫内膜及38例复杂性增生的WISP2、Slug及E-cadherin蛋白的表达。结果Ⅰ型子宫内膜样腺癌WISP2、Slug与E-cadherin的表达率分别为35.29%、45.88%及20.00%,与正常内膜(93.33%、10.00%、93.33%)和不典型增生内膜组织(31.58%、26.32%、52.63%)相比,差异均有统计学意义(P均0.01)。Ⅰ型子宫内膜样腺癌高临床分期、高组织学分级、肿瘤肌层浸润深度1/2及淋巴结转移的患者中,WISP2表达明显下调(P0.05)。在高临床分期及淋巴结转移患者中,Slug阳性表达明显上调(P0.05)。在年龄大于50岁及肌层侵犯深度大于1/2的患者,E-cadherin阳性表达明显下调(P0.05)。Spearman相关性分析发现,在Ⅰ型子宫内膜样腺癌组织中WISP2和Slug的表达呈明显负相关(r=-0.270,P=0.012),Slug与E-cadherin的表达存在负相关关系(r=-0.224,P=0.039)。结论 WISP2的失表达可能通过上调Slug的表达从而抑制E-cadherin的表达,在Ⅰ型子宫内膜样腺癌发生、侵袭和转移中发挥重要作用。     

双向凝胶电泳-飞行时间质谱技术鉴定小鼠胚泡黏附时子宫内膜nm23-M2／NDPK B的表达

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE)分析未交配小鼠子宫内膜和妊娠第五天(D5)小鼠子宫内膜胚泡黏附时植入位点及其旁组织蛋白质组。差异蛋白质组学显示,等电点(isoelectric point,pI)约7．1、分子量(molecular weight,Mw)约18kDa的蛋白质点在D5小鼠子宫内膜特别是植入位点表达上调。对此蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption／ionization time of flying mass spectrometry,MALDI—TOF—MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(Peptide Mass Fingerprint,PMF),经Mascot：Peptide Mass Fingerprint中SWISS-PROT数据库查询后,鉴定该蛋白质为鼠源性nm23-M2／NDPKB。RT—PCR和免疫组织化学结果也显示D5小鼠子宫内膜nm23-M2／NDPK B mRNA和蛋白表达明显增加。提示nm23-M2／NDPKB参与胚泡着床这一重要生命活动过程。     

早孕小鼠子宫内膜mTOR基因表达增高

利用实时荧光定量PCR、原位杂交法、免疫组化(SP法)和Western印迹法分别检测未孕、假孕及孕d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian tar get of rapamycin,mTOR)mRNA和蛋白质的表达,研究mTOR基因在早孕小鼠子宫内膜的表达规律.结果显示妊娠子宫内膜组织mTOR的表达较未妊娠的子宫内膜组织显著增加(P＜0.05);着床窗期表达最高(d4,d5),且与其他妊娠各期比较差异有统计学意义(P＜0.05);原位杂交和免疫组化分析显示mTOR mRNA和蛋白质表达主要在子宫内膜基质细胞,与上皮细胞各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).研究表明mTOR在子宫内膜基质细胞的规律性表达所调控的细胞生长、增殖和分化可能是胚胎正常着床的分子机制之一.     

KAI1/CD82 在早孕小鼠子宫内膜组织的表达研究

目的：观察KAI1／CD82 mRNA和蛋白在小鼠妊娠D1-D8子宫内膜组织的表达。方法：以胚胎与肿瘤同源性为理论基础,胚胎植入与肿瘤侵袭转移相似为切入点,采用免疫组化和RT-PCR技术。结果：KAI1／CD82 mRNA和蛋白在早孕子宫中,KAI1／CD82mRNA的表达渐增多,蛋白表达的量和范围也渐增强。结论：KAI1／CD82mRNA和蛋白在早孕子宫组织中的动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用,是滋养层细胞精确侵袭调控的分子机制之一。     

妊娠小鼠子宫内膜LIF基因表达的研究

本文对妊娠第4天(Ⅰ组)、第7天(Ⅱ组)、第10天(Ⅲ组)的小鼠(各20只)子宫内膜LIF基因表达进行了研究。Ⅰ组20只小鼠子宫内膜全部存在LIF基因的表达、Ⅱ组有5只小鼠表达、Ⅲ组仅有1只小鼠表达。文中对不同孕期LIF基因的表达程度与胚胎着床的关系进行了讨论。 Abstract:Leukemia inhibitory factor(LIF)is a glycoprotein with multiple activities and is essential for blastocyst implantation in mouse.We have examined LIF gene expression in mice endometrium on day 4(group Ⅰ),day 7(group Ⅱ),day 10(group Ⅲ)of pregnancy.In group Ⅰ all had LIF gene expression,5 mice had LIF gene expression in group Ⅱ,only one mouse had LIF gene expression in group Ⅲ.We discussed the relation between level of LIF gene expression and embryonic implantation.     

卵巢激素对小鼠围着床期子宫内膜Le^y寡糖表达的调控

研究表明Le^y寡糖介导了胚胎与子宫内膜之间的识别与粘附,在胚胎植入中起重要作用。其α1,2、α1,3岩藻糖基的合成分别与α1,2岩藻糖基转移酶（FUT1）、α1,3岩藻糖基转移酶（FUT4）的催化作用密切相关,应用Western印迹、免疫组化和半定量RT-PCR方法,观察小鼠妊娠早期、去卵巢后雌孕激素处理的子宫内膜Le^y寡糖抗原以及其合成相关的FUT1、FUT4基因的表达,分析卵巢激素对Le^y寡糖表达的调控,结果显示：妊娠早期,FUT1、FUT4基因的转录水平随孕激素水平上程式而呈下降的趋势,这与Le^y寡糖抗原表达一致。进一步观察发现,去卵巢后经孕激素处理,FUT1、FUT4基因及Le^y寡糖抗原表达均较对照组降低,雌激素处理组表达则明显升高;雌孕激素联合作用介于雌激素组和孕激素组之间,结果表明,孕激素能下调FUT1、FUT4基因的表达。雌激素对其有上调作用,两种激素之间表现为相互拮抗,提示雌孕激素可能通过FUT1、FUT4基因转录水平调控Le^y寡糖抗原在小鼠子宫内膜上皮的表达。     

完整分离围着床期小鼠子宫内膜方法的建立

目的　为了获得组织结构完整、功能正常的子宫内膜样本以进行胚胎着床的体外研究。方法　作者比较了剪碎法、刮取法和挤压法取得子宫内膜的效果。结果　挤压法得到的小鼠子宫内膜呈圆形条状;子宫内膜组织结构完整,具有内膜上皮并包含腺体、血管的基质;意外发现子宫系膜侧的子宫内膜缺损。结论　挤压法是获取子宫内膜进行相关研究的理想方法。     

Glycoconjugate Expression During Early Mouse Oculogenesis

The carbohydrate side-chain of glycoconjugates can show a developmentally regulated expression pattern. In order to analyse these changes during the development of the eye, 13 lectins were used to reveal glycoconjugates histochemically in 8.5- to 14-day- old mouse embryos. During this period, eyes develop from the most immature vesiculation of the neural plate neuroepithelium into a primitive stage with all structures present, such as pigment epithelium, not yet differentiated neuroretina and lens. A striking diversity of carbohydrate side-chain expression was observed in the preocular somatoectoderm and neural plate of 8.5- day-old embryos, as indicated by the binding of nine different lectins. Binding sites at the apical poles of neuroepithelium of five of these lectins (PNA, LCA, SBA, LPA and GSA-II) disappeared completely during further development. The binding sites of four other lectins, WGA, MPA, Con A and BPA, remained expressed during the course of development, being indicative for the carbohydrate side-chains -GlcNAc(1-4)Gluc, -Gal(1-3)GalNAc, -D-Man/-D-Gluc and -GalNAc. In contrast, binding sites for GSA-I, RCA-I (-D-Gal), UEA-I (-l- Fuc) and DBA (-GalNAc(1-3)GalNAc) were not present at any developmental stage. The time point of gross changes of lectin binding sites correlates well with the period of neural tube formation. During later development from neuroectoderm to the ocular pigment epithelium, a sharp reduction in all lectin binding sites at the apical cell poles, except for WGA and MPA, was observed. WGA binding sites were present until embryonic day 10, while those for MPA were present until day 9. At the basal cell poles of the pigment epithelium, all lectin binding sites except for WGA were lost after e mbryonic day 11.5. These results indicate that there are sophisticated kinetics of glycoconjugate expression during the course of early embryonic development of ectoderm into its descendent tissues.     

小鼠子宫内膜LIF基因表达与雌、孕激素的关系

白血病抑制因子（LIF）是一种多功能活性的糖蛋白,LIF基因在大多数妊娠第4天的小鼠子宫内膜进行着强烈的表达,然而LIF基因表达调控的机制目前尚不清楚。本实验对168只妊娠第4~5天的小鼠LIF基因表达和血清中雌、孕激素水平分别进行了检测,发现18只小鼠无LIF基因表达,其血清中雌、孕激素水平分别极显著（P＜0.01）和显著（0.01＜P＜0.05）低于其他表达的小鼠。提示：雌、孕激素对小鼠LIF基因表达过程中起着一定的作用,将为LIF基因表达调控机制的深入研究打下基础。     

The Expression of X-Linked Phosphoglycerate Kinase in the Early Mouse Embryo

Abstract. During early mouse embryogenesis, the activity of X-chromosomally linked maternal and paternal phosphoglycerate kinase (PGK-1) alleles was determined using electrophoretic separation of their gene products and a sensitive fluorometric enzyme assay. In the embryos collected from females homozygous for PGK-1^b mated with PGK-1^a males and vice versa, the paternally derived allozyme was first detected after implantation on day 6. Expression of the maternally inherited allele was studied in embryos from females heterozygous for PGK-1^b and PGK-1^a. From day 1 to day 4, the embryos maintained a constant ratio of enzyme activity of PGK-1B to PGK-1A. Prior to implantation of the embryos between day 4 and day 5, the activity ratio of the two PGK-1 allelic variants changed significantly due to the first appearance of newly synthesized PGK derived from the maternally inherited allele.
Our data demonstrate a temporal difference in the onset of PGK synthesis depending on whether this particular gene product is of maternal or paternal origin. Therefore, we conclude that the maternal PGK-1 locus is already activated during late preimplantation development whereas the paternally inherited gene locus remains silent at the preimplantation stage but is subsequently expressed at approximately the time of X-chromosomal inactivation.