滇牡丹内生真菌PR20的鉴定及次生代谢产物的研究

根据形态学特征和18S rDNA序列分析,将滇牡丹根中分离得到的内生真菌菌株PR20鉴定为高大毛壳Chaetomium elatum。利用柱色谱层析方法从该菌株的发酵产物中分离到5个化合物,通过理化性质及波谱数据分析,分别鉴定为7-羟基-4,6二甲基苯酞(1)、苔黑酚(2)、苔色酸(3)、间羟基苯甲酸(4)和次黄嘌呤核苷(5),以上化合物均为首次从滇牡丹内生真菌中分离获得。     

海莲内生真菌Pestalotiopsis clavispora代谢产物研究

从海莲内生真菌Pestalotiopsis clavispora发酵液乙酸乙酯萃取物中分离得到9个化合物。根据波谱数据,化合物1－9结构分别鉴定为：3β,22β,24-三羟基齐墩果-12-烯,乌苏酸,3-羟基-4-甲氧基苯乙烯,邻苯二甲酸二异丁酯,3,4-二羟基苯乙醇,对羟基苯乙醇,3β-羟基-5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯,麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮,胸苷。9个化合物均为首次从该内生真菌中分离得到。     

喜树产10-羟基喜树碱内生真菌的分离鉴定

采用组织块法从喜树(Camptotheca acuminata Decne.)果实中分离筛选得到13株纯化的内生菌株.经过摇瓶发酵培养后,采用TLC法与HPLC法对其菌丝体提取物进行分析,发现有1株菌株能够产生10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT),其10-羟基喜树碱产量为677 μg/L,并将该菌株命名为XK001.对菌株XK001菌落、菌丝体和孢子的有无进行观察研究,表明菌株XK001暂属于无孢菌群(Mycelia sterlia).     

罗汉松内生真菌Pestalotiopsis heterocornis的代谢产物研究

从罗汉松内生真菌Pestalotiopsis heterocornis的发酵培养液中分离得到10个代谢产物,应用质谱、核磁共振等现代波谱学方法鉴定为jesterone(1),hydroxy-jesterone(2),ambuic acid(3),6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮(4),(24S)-麦角甾-5-烯-3β,7α-二醇(5),7,22-二烯-3β,5α,7β-三羟基-麦角甾醇(6),麦角甾-7,22-二烯-3-酮(7),(4E,8E,2S,3R,2'R)-N-2'-羟基棕榈酰-9-甲基-4,8-sphingadienin(8),鲨肝醇(9),棕榈酸(10)。以上化合物均为首次从内生真菌P. heterocornis的代谢产物中分离得到,化合物4,6,7为首次从拟盘多毛孢属真菌代谢产物中分离得到。     

广东红冬蛇菰及其内生真菌Penicillium coprophilum Mzz9的化学成分研究

本文研究了广东梅州地区产名贵中药材红冬蛇菰及其内生真菌Penicillium coprophilum Mzz9的化学成分。通过多种色谱技术和波谱学分析共分离鉴定了11个化合物。从红冬蛇菰的二氯甲烷萃取物中分离得到5个化合物:羽扇豆醇(1)、β-香树脂醇(2)、鄁桐甾醇(3)、乙酸蛇麻脂醇酯(4)和亚油酸甘油酯(5);从其内生真菌P.coprophilum Mzz9的发酵液中分离得到6个化合物:去氯灰黄霉素(6)、灰黄霉素(7)、脱氢灰黄霉素(8)、oxaline(9)、4-megastigmen-3,9-dione(10)、对羟基苯乙酮(11)。其中化合物1和5为首次从红冬蛇菰中分离得到,化合物6～11为首次从红冬蛇菰的内生真菌中分离得到。     

夹竹桃叶内生真菌Colletotrichum sp. HK-08的次生代谢产物及其活性研究

本研究运用多种色谱技术从夹竹桃叶内生真菌Colletotrichum sp.HK-08中分离得到11个化合物,利用波谱学方法鉴定其结构分别为butyl 2-(4-hydroxyphenyl)acetate(1)、4-hydroxyphenethyl acetate(2)、phenethyl 2-phenylacetate(3)、phenethyl 2-(4-hydroxyphenyl)acetate(4)、4-hydroxyphenethyl 2-(2-hydroxyphenyl)acetate(5)、4-hydroxyphenethyl 2-(4-hydroxyphenyl)acetate(6)、对羟基苯甲醛(7)、2-羟基苯乙醇(8)、对羟基苯甲酸(9)、对羟基苯乙酮(10)和3a-hydroxyindoline(11)。其中化合物4、5和11为新的天然产物,化合物1～6和11为首次从Colletotrichum属真菌中分离得到。活性测试结果显示,化合物4和6表现出一定的细胞毒活性。     

一株秋茄内生真菌Colletotrichum sp. SCSIO KcB3-2的次级代谢产物研究

对红树植物秋茄内生真菌Colletotrichum sp. SCSIO Kc B3-2的次级代谢产物进行研究,利用硅胶柱层析,中压ODS反相柱层析,半制备高效液相色谱仪等分离手段对其大米发酵产物进行分离纯化,利用核磁共振、质谱等波谱学手段并结合其理化性质及文献数据鉴定了14个单体化合物的结构:对羟基苯甲醛(1),2-(4-羟苯基)乙醇(2),2-(4-羟苯基)乙酸乙酯(3),2-羟基-2-(4'-羟基苯基)乙醇(4),2-甲氧基-2-(4'-羟基苯基)乙醇(5),苯乙二醇(6),2-氨基-3-苯基-1-丙醇(7),对羟基苯乙酸甲酯(8),2-(2-羟基乙基)苯酚(9),3-chlorogentisyl alcohol (10),4-hydroxymellein (11),diaporthin (12),环(L-苯丙-L-亮)二肽(13),环(D-苯丙-L-异亮)二肽(14)。化合物3～14均为首次从红树植物秋茄内生真菌中分离得到。     

红树植物老鼠簕内生真菌Aspergillus flavipes AIL8化学成分的研究

利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析及半制备高效液相色谱等分离手段对红树林老鼠簕内生真菌Aspergillus flavipes AIL8的提取物进行分离纯化,并利用各种波谱方法,结合文献对照,确定化合物结构。从提取物中分离得到6个化合物,经鉴定为4-羟基-3-甲氧基-5-[(2E,6E)-3,7,11-三甲基十二烷-2,6,10-三烯-1-基]苯甲酸(1)、芳香类内酯化合物(2)、一癸酸甘油酯(3)、菜子甾醇(4)、7,22(E)-麦角二烯-3β,5α,6β-三醇(5)和麦角甾-6,22-二烯-5α,8α-环二氧-3β-醇(6)。6个化合物均为首次从红树林老鼠簕内生真菌A.flavipes AIL8中分离得到,其中化合物1为新天然产物。     

银杏内生真菌Aspergillus oryzae YX-5抗肿瘤活性物质的分离与鉴定

【背景】植物内生真菌是天然活性物质的重要来源。【目的】对一株具有抗肿瘤活性的银杏内生真菌米曲霉Aspergillus oryzae YX-5进行活性物质的分离与鉴定。【方法】将该菌株发酵培养后,发酵液经乙酸乙酯萃取,采用减压柱层析、葡聚糖凝胶柱层析和高效液相色谱分析,从其代谢产物中分离活性化合物,在分离过程中以MTT法跟踪检测分离到的各组分及纯化合物的抗肿瘤活性。【结果】从菌株YX-5的发酵产物中分离纯化得到4个化合物。经核磁共振和高分辨质谱分析,将其分别鉴定为羟基曲霉酸(1)、环(4-羟脯氨酸-苯丙氨酸)(2)、环(亮氨酸-苯丙氨酸)(3)和环(丙氨酸-苯丙氨酸)(4)。其中羟基曲霉酸对人宫颈癌HeLa细胞具有显著的细胞毒活性,其IC_(50)为1.07μg/mL。【结论】报道羟基曲霉酸在抗肿瘤方面的活性,表明米曲霉及羟基曲霉酸在抗肿瘤天然产物开发中具有一定的应用潜力。     

产杜仲黄酮内生真菌的初步研究

由杜仲植株的根、茎、叶分离到内生真菌,分别对各菌株进行液体培养,筛选能产生与杜仲药材相同或相似黄酮类化合物的内生真菌。将培养物适当处理后,根据黄酮类化合物所特有的颜色反应进行初筛,然后根据TLC分析和紫外-可见光分光光度法测定结果进行复筛,结果从杜仲植株共分离得到44株内生真菌,其中1株(DZY5)能产出与其宿主相同或相似的黄酮类物质。     

产喜树碱喜树内生真菌的筛选及喜树内生真菌的SRAP分析

生活在宿主植物里的内生真菌是很重要的药用资源。喜树是中国的传统药用植物。从喜树植物中分离得到了大约50种菌株,其中一株产喜树碱的菌株通过形态学鉴定为青霉属,这是首次在喜树植物中发现产喜树碱的青霉属菌株。为研究简单序列重复相关序列扩增多态性(SRAP)方法在喜树内生真菌中应用的可行性,选择了十株喜树内生真菌进行SRAP多态性分析。SRAP引物共扩增出1 295条带,而这些菌株也被分为三大类。这些结果表明,SRAP研究喜树内生真菌具有高效性,是讨论喜树内生真菌的遗传多样性的有效方法。     

蛇足石杉内生真菌Neofusicoccum sp. F483的化学成份研究

植物内生真菌是重要的生物资源,来自植物不同组织的内生菌还有一大部分未被人们所认识,该研究通过查阅国内外相关文献,发现内生菌产生的化合物大多具有生物学活性。在此基础上以蛇足石杉(Huperzia serrata)为材料,从其茎部分离纯化得到1株内生真菌,提取这株真菌的总DNA,用PCR扩增ITS片段,将测序结果在GenBank数据库中进行比对,最终鉴定为葡萄座腔菌属(Neofusicoccumsp.)。具体方法:(1)对内生真菌Neofusicoccumsp.F483进行固体培养基发酵,并用混合有机溶剂提取得代谢产物;(2)采用硅胶、Sephadex LH-20凝胶色谱柱层析、半制备HPLC等方法对代谢产物的化学成分进行分离;(3)利用理化性质及1 H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱数据鉴定化合物结构。结果表明:共分离得到8个化合物,经过波谱数据分析并结合文献对照鉴定结构为fusaproliferin(1)、过氧麦角甾醇(2)、麦角甾醇(3)、1-(furan-2-yl)-2-hydroxyethanone(4)、脑苷脂C(5)、腺嘌呤核苷(6)、versicolactone B(7)、versicolactone A(8)。该研究结果可为进一步从植物内生菌中挖掘有价值的天然活性产物奠定基础,为新的药用植物内生菌资源的开发利用提供理论依据。     

内生真菌对姜黄素的微生物转化

目的:调查姜黄根茎内生真菌对姜黄素的微生物转化,以期获得一些姜黄素的结构类似物或衍生物。方法:利用表面消毒法分离内生真菌;采用薄层层析和高效液相色谱(HPLC)技术筛选生物转化姜黄素的内生真菌;利用硅胶柱层析和制备型HPLC分离纯化生物转化产物;应用波谱技术解析转化产物的化学结构;通过形态学特征和内转录间隔区(ITS)序列分析对内生真菌进行初步鉴定。结果:从姜黄根茎中分离出18株内生真菌,经筛选发现其中1株丝状真菌能转化姜黄素,其产物分别为去甲基姜黄素和二去甲基姜黄素。初步鉴定该内生真菌属于Diaporthe sp.。结论:内生真菌Diaporthe sp.能对姜黄素进行去甲基化修饰,推测它可能具有O-去甲基化酶系。     

高盐条件下红树植物内生异色拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis versicolor次级代谢产物的研究

对红树植物桐花树内生异色拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis versicolor)高盐条件下固体发酵培养物的化学成分进行研究。利用硅胶柱层析,Sephadex LH-20凝胶柱层析,半制备高效液相色谱仪等分离手段对内生异色拟盘多毛孢菌(P.versicolor)的提取物进行分离纯化,并利用各种波谱方法,结合文献对照,确定化合物结构。从提取物中分离得到9个化合物,经鉴定为pestalachloride B(1)、1,6,8-三羟基-3-(羟甲基)蒽醌(2)、大黄素(3)、麦角甾-6,22-二烯-5α,8α-环二氧-3-醇(4)、3β-羟基-5-胆甾烯-6-酮(5)、3-吲哚甲醛(6)、4,6-二羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮(7)、2-(4-羟苯基)乙醇(8)、对羟基苯甲醛(9)。其中,化合物1~3、6~8为首次从该种真菌中分离得到。     

耐盐菊芋块茎内生真菌次生代谢产物的分离与结构鉴定

盐生植物菊芋(Helianthus tuberosus)是一种新型经济作物,特殊生境可能会使其内生真菌产生特殊的次生代谢产物,如结构新颖或活性显著的化合物.为研究这种耐盐植物内生真菌的次生代谢产物以及植物宿主和内生真菌之间可能存在的关系,本实验室从耐盐菊芋块茎中分离纯化出10株内生真菌,对这10株内生真菌进行抗卤虫活性筛选,初步筛选出1株抗卤虫活性良好的菌株Mucor sp.ht-7,规模发酵后通过提取分离技术得到7个化合物,用波谱手段鉴定了7个化合物的结构,对这株内生真菌和宿主次生代谢产物之间的关系进行分析探讨,并对化合物生物活性加以分析.     

内生真菌产生喜树碱及其类似物的研究进展

喜树碱类抗癌新药已在临床上广泛应用,野生植物资源的短缺和市场需求的迅速增加,促使人类寻找获取喜树碱及其类似物的替代途径,内生真菌发酵生产喜树碱及其类似物显示了良好的应用前景。为此,概述了内生真菌发酵生产喜树碱及其类似物的优势,内生真菌的分离研究现状及内生真菌产生喜树碱及其类似物的能力。     

广西北部湾红树植物内生真菌多样性

【目的】研究广西北部湾地区红树植物内生真菌多样性,建立北部湾红树植物内生真菌种质资源库,为利用内生真菌生物技术促进农业可持续发展提供理论依据。【方法】从广西北部湾地区采集红树植物组织样本,采用表面消毒法分离真菌,通过测定分离菌株对宿主植物是否具有致病性来筛选内生真菌,结合形态学特征和分子生物学分析对内生真菌进行分类与鉴定。【结果】从60个红树植物样本中分离得到1 764个菌株,经过致病性测定筛选获得41株内生真菌,分离率为2.3%。其中从宿主植物红海榄分离得到15株内生真菌,占总菌株数的36.6%,比例最高。通过分析,发现这些内生真菌在ITS-NJ、NS-NJ两个系统发育树上各聚为7个大分支,分属8个科(目)。其中球腔菌属Mycosphaerella、德福里斯孢属Devriesia、假尾孢属Pseudocercospora、枝孢霉属Cladosporium、Pleosporales等属(科)真菌是广西红树林的优势菌。【结论】广西北部湾地区红树植物内生真菌菌种资源丰富。     

喜树果中喜树碱和10-羟基喜树碱的匀浆提取工艺

以喜树果为原料,对匀浆法提取喜树碱和10-羟基喜树碱的工艺进行了研究,确定了最佳的工艺条件：提取溶剂为体积分数55％的乙醇,匀浆时间为8min,料液比为1：15（g／mL）。在此工艺条件下,喜树碱和10-羟基喜树碱的提取率分别为0．801‰和0．546‰。将该法与超声提取、回流提取、常温冷浸提取、水浴振荡提取进行了比较,结果表明,匀浆提取具有得率高、省时间等方面的优势,是一种高效提取喜树碱和10．羟基喜树碱的方法。     

藏药穹代尔中内生真菌的分离及其次级代谢物的生物活性研究

从藏药穹代尔(攀茎钩藤,Uncaria scandens)的内生真菌中筛选对单胺氧化酶及乙酰胆碱酯酶具有抑制活性的提取物,并对高活性提取物进行化学成分的鉴定。采用组织切块法分离内生菌,发酵、萃取、甲醇回流提取法得到待测提取物,酶标法测定酶活性,波谱解析法鉴定结构。从穹代尔组织中共分离到9株内生真菌,检测发现3株内生真菌发酵提取物具有一定乙酰胆碱酯酶抑制活性,其抑制率在50%以上。通过分子生物学方法及形态学分析对活性菌株QDE-6进行了菌种鉴定,鉴定为黑曲霉属(Aspergillus sp.)真菌。从内生真菌QDE-6的次级代谢产物中分离鉴定了5个化合物,分别是Aspergiketone(1)、Gliotoxin(2)、Pseurotin A2(3)、Brevianamide F(4)、Pseurotin A1(5)。相比其他化合物,化合物3抑制率为51. 67%,具有较高的抗单胺氧化酶活性,化合物4抑制率为42. 76%,具有较高的抗乙酰胆碱酯酶活性。可作为进一步研究藏药穹代尔中内生真菌及开发药物的基础。     

马比木根的化学成分研究

通过硅胶、MCI和Sephadex LH-20反复柱层析、纯化,从马比木根的甲醇提取物中分离得到14个化合物,运用现代波谱技术鉴定为β-谷甾醇(1),β-胡萝卜苷(2),7-酮基-β-谷甾醇(3),β-sitosteryl-3-O-β-D-glucopyranoside-2'-O-palmitate(4),5α,6β-二羟基胡萝卜苷(5),羽扇豆醇(6),3-乙酰氧基-12-齐墩果烯-28醇(7),喜树碱(8),9-甲氧基喜树碱(9),10-羟基喜树碱(10),9-methoxy-mappicine-20-O-β-D-glucopyranoside(11),mappicine-20-O-β-D-glucopyranoside(12),(3S)-pumiloside(13),(-)-(3S)-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid(14)。化合物1~7、9~14为首次从该植物中分离得到。