杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体与疾病关系的研究

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)主要表达在NK细胞和部分T细胞膜表面,通过识别细胞表达的MHC-Ⅰ类分子来调节NK细胞的活性,在病原体感染、自身免疫性疾病、妊娠、移植排斥、肿瘤等疾患中起重要作用,本文就近年来KIR及其配体HLA与相关疾病关系的研究作一综述。     

人类NK细胞活化受体的研究进展

近年来,因为一大批活化和抑制性受体在功能和分子水平上得到阐明,使我们对NK细胞尤其是其表面表达的分子有了较为深入的了解。一方面,NK细胞表达HLA-I类分子特异的抑制性受体,由于宿主自身组织细胞表面HLA-I类分子表达正常而使杀伤抑制性受体介导产生的作用占主导地位,因此能使正常细胞免受NK细胞的杀伤;而另一方面,不同的活化受体参与NK细胞介导的细胞毒作用,他们参与人类NK细胞杀伤HLA-I类分子表达减少或缺失的靶细胞。本文主要就NK细胞的活化受体和协同活化受体以及它们的配体作一综述。     

NK细胞受体（Ⅱ）：免疫球蛋白超家族分子

免疫球蛋白超家族ＮＫ细胞受体是一大类结构和功能具有一定异质性的分子，迄今已克隆了３２个全长ｃＤＮＡ，已确定一级结构的分子２０个，Ｉｇ－ＳＦ ＮＫＲ属于Ｉ型跨膜蛋白。     

免疫球蛋白重链可变段和T细胞受体可变段的分子进化研究

为阐明免疫球蛋白(Ig)和T细胞受体(TCR)在抗体多样性产生机理上的异同,作者比较了Ig重链可变段(Ig V_H)和TCR可变段(TCR V)的密码子替代率和协同进化,并分析异同的原因。共搜集8种鼠和3种人的TCR α链可变段(V_α),11种鼠和1种人的TCRβ链可变段(V_β),以及2种鼠和4种人的T细胞γ链可变段;同时搜集11种鼠、3种人、3种南美鳄鱼和1种鲨鱼的Ig V_(H_(o))研究结果揭示:(1)对编码蛋白质的密码子来说,TCR V(包括V_α和V_β)的核苷酸替代率为Ig V_H的2.4倍,说明前者有更高的替代率。(2)以协同进化而言,TCR V和Ig V_H的基因重复率分别为1.7×10~(-6)和1.6×10~(-6)/基因年。两者几乎相同,均系低速保持者。TCR V的数目(V_α为100,V_β为30)远少于Ig V_H(数目为300),原因是前者受到主要组织相容性复合体的制约,即受到负选择,这与中性学说观点相一致。文章还讨论了体细胞突变和DNA重排对两类抗体多样性产生上的作用,并探讨了IgV_H和TCR V的假基因问题。     

树突细胞上Toll样受体的介导作用

树突状细胞是体内最重要的抗原提呈细胞,它表面表达多种Toll样受体。Toll样受体可通过多条途径来激活树突细胞,介导树突细胞对抗原的摄取,递呈及生存与凋亡,促进T细胞增值和分化并参与免疫反应。     

主要组织相容性复合体(MHC)基因的研究概况

主要组织相容性复合体(MHC)因其在免疫方面的重要作用而倍受免疫学家重视．随着研究的不断深入,了解到MHC是一个高度多态的基因群,它广泛分布于各种脊椎动物体内．MHC除了具有免疫功能外,还在其它许多方面起作用．MHC基因的多态性是最受关注的特征,尤其是Ⅱ类基因．根据MHC基因的多态性,可以在遗传、进化、行为、保护及生态等许多方面对其进行研究．就目前的研究情况,在结构、功能及应用等方面对MHC作了介绍．     

自然杀伤细胞受体的研究进展

自然杀伤细胞（ＮＫ细胞）可表达两类功能相悖的识别受体,即活化受体（ＫＡＲ）和抑制受体（ＫＩＲ）。ＫＩＲ能识别自身细胞上的ＭＨＣⅠ类分子与自身或外来肽形成２的复合物,所产生的抑制信号可阴断ＫＡＲ的活化,以此抑制ＮＫ细胞的细胞毒作用。如果靶细胞失去ＫＩＲ所识别的配体,ＮＫ细胞即可通过ＫＡＲ对靶细胞进行攻击。本文将介绍此类受体的结构及基识别与信号转导机制的研究进展。     

固有免疫应答与动脉粥样硬化关系的研究进展

固有免疫应答在动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)的发生和发展中起重要作用．固有免疫应答细胞,包括单核/巨噬细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、中性粒细胞和树突状细胞,是机体抵御微生物和异物入侵的第一道防线．这些细胞广泛参与As中泡沫细胞形成、斑块内基质降解、细胞凋亡、血管新生和斑块破裂等事件．模式识别受体是免疫细胞上识别病原体(或某些内源性成分)相关分子模式的一类受体分子,包括Toll样受体和NOD样受体,介导固有免疫应答反应．Toll样受体在固有免疫应答细胞中具有不同程度的表达,在As中具有不同的作用,如TLR2和TLR4对As起促进作用,而TLR3具有As保护作用．NLRP3炎性体与动脉血管壁的早期损伤有关．对固有免疫应答细胞及模式识别受体在As形成中的作用进行深入研究,不仅有助于理解As的形成过程,而且还能为临床上防治心血管类疾病提供了新的治疗靶点和诊断指标．     

重组激活基因

本文概述了能诱导可变、多样与连接片段重组又称ＶＤＪ重组的两个重组激活基因－ＲＡＧ－１和ＲＡＧ－２的研究现状,主要介绍了ＲＡＧｓ的发现过程、结构特征、功能以及激活ＶＤＪ重组的可能机制。     

Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型中的动态表达

目的:通过观察大鼠心肌组织缺血/再灌注(I/R)急性期Toll样受体2(TLR2)和4(TLR4)mRNA及蛋白质的表达,探讨TLR2和TLR4在心肌缺血/再灌注损伤中的作用。方法:雄性Wistar大鼠随机分为缺血/再灌注组(I/R组)和假手术组(sham组),建立大鼠心肌缺血/再灌注模型,按不同的再灌注时间(1、2、4、6、12、24 h和7 d)处死动物(n=42)。光镜下观察心肌组织形态改变。实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)定量心肌TLR2及TLR4mRNA水平。逆转录聚合酶链式反应(r-t PCR)测定心肌白介素-6(IL-6)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的mRNA水平。结果:①随着再灌注时间的延长,心肌梗死面积逐渐增大,在再灌注4 h时达最大值,再灌注4 h、6 h、12 h、24 h,再灌注7 d已发生心室重塑。②在再灌注早期,sham组心肌组织形态未见明显改变,I/R组心肌结构有不同程度损伤,在复灌7 d时可见心室重塑,左室壁厚度明显变薄,大量成纤维细胞替代原有的心肌细胞。③sham组和I/R组TLR2、TLR4、MCP-1和IL-6mRNA水平均出现不同程度上调,其中TLR2和TLR4均在再灌注4 h时达高峰,随后逐渐下降,至再灌注7 d时TLR4水平再次升高。IL-6在6 h达到高峰后开始下降,到24 h时基本降至sham组水平,再灌注7 d时再次有升高趋势。MCP-1在缺血/再灌注后一直保持与sham组相当水平,在再灌注7 d时才有明显升高。结论:在心肌缺血/再灌注早期,心肌组织中TLR2和TLR4基因水平迅速上调,并促进下游炎症因子的产生造成心肌早期的损伤。在再灌注后期,TLR2和TLR4的再次升高使得炎症因子的表达再一次增加,从而影响心肌重塑,损伤心肌结构及功能。     

Toll样受体增强树突状细胞中腺苷受体A2B亚型的表达及功能

树突状细胞(dendritic cell,DC)表面所表达的腺苷受体A2B亚型(ADOR-A2B)可促进DC对辅助性T淋巴细胞(T helper cell,Th)的激活,导致自身免疫性疾病的发生或加重.本文旨在研究作为免疫反应的诱导分子Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是否可调节ADOR-A2B在DC中的表达并籍此影响其功能.体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞(BM-DC),以多种TLRs的配体,Pam3csk4、polyIC、LPS及CpG进行干预.提取细胞总RNA,real-time PCR测定ador-a2a、ador-a2b的表达;放射性配体结合实验测定BM-DC对3H-腺苷结合能力的变化.以LPS及选择性ADOR-A2B激动剂BAY 60-6583协同干预BM-DC,ELISA测定培养基中IL-1、IL-6及IL-12的含量.以干预后的BM-DC刺激naive CD4细胞,ELISA测定培养基中IL-17A、IFNγ的含量,荧光抗体染色及流式细胞仪分析检测CD4细胞的分化.结果显示,TLR-4的配体LPS可显著提高BM-DC中ador-a2b的表达及对腺苷的结合能力.BAY 60-6583与LPS相协同可刺激BM-DC分泌多种致炎因子,并增加其诱导CD4细胞向Th1及Th17分化的能力.由此可见,Toll样受体可上调adora2b在DC中的表达,并可籍此增加DC分泌促炎因子的能力及对CD4细胞的刺激作用.     

Toll样受体直接调节Treg细胞抑制功能的研究进展

Treg细胞具有维持自身免疫耐受,调节免疫应答的作用。Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）家族可识别病原相关分子模式或内源性配体,启动固有和适应性免疫应答。Treg细胞选择性表达某些TLRs,TLRs活化可能直接增强或降低Treg的免疫抑制功能,这种调节可以影响对感染和肿瘤的免疫监视、移植免疫排斥和自身免疫病发生的进程。因此,了解两者的关系对发现新的治疗靶点和对策有重要的作用。简要综述TLRs对Treg细胞抑制功能直接调节作用的研究进展。     

NKG2A的生物学特性与临床应用

NKG2A是主要表达于自然杀伤(natural killer, NK)细胞表面的抑制性受体,与NK细胞表面的激活性受体相互竞争,从而调控NK细胞的活性.近年来,抑制NKG2A免疫检查点可以恢复NK细胞活性从而杀伤肿瘤细胞,使得NKG2A成为抗肿瘤治疗的焦点之一.然而诸多研究发现,NKG2A还参与病毒感染、自身免疫等疾病...     

类风湿性关节炎成纤维样滑膜(FLS)细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响

目的:在类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜(FLS)细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2(DDR2)的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法:首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验,进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RA FLS细胞侵袭能力的影响。结果:Ⅱ型胶原刺激引起RA FLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高,DDR2被活化,活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化,经质谱分析,其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2;在HEK293T细胞中,免疫共沉淀结果显示Fc DDR2与波形蛋白存在相互作用;激光共聚焦结果显示在RA FLS细胞中,DDR2和波形蛋白存在共定位;下调RA FLS细胞中波形蛋白的表达后,细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论:波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,Ⅱ型胶原可引起RA FLS细胞的DDR2磷酸化水平升高,并通过波形蛋白促进RA FLS细胞的侵袭。     

GLP-2对小鼠小肠黏膜的作用及不同脏器分布的影响

目的：观察胰高血糖素样肽-2对小鼠小肠黏膜的作用效果及其受体在不同脏器的分布和表达。方法：选用5-6周龄的雄性健康BALB/C小鼠,体重17～20g。随机分为3组。对照组8只;脑内注射GLP-2组9只,每天按25μg/kg脑内注射GLP-2液2次,连续3天;腹腔注射GLP-2组9只,每天按250μg/kg腹腔注射GLP-2液2次,连续3天。3天后,处死小鼠,做组织切片进行HE染色,观察小鼠小肠黏膜的组织学变化,用免疫组化方法检测GLP-2R在不同脏器的表达和分布。结果：小鼠经腹腔注射GLP-2后,小肠不同肠段黏膜的绒毛高度较对照组明显增加（P〈0.05）,脑内注射组的肠黏膜无明显形态学变化;GLP-2R在小鼠胃、空肠与结肠部位均有表达,而食管与肝显阴性;腹腔注射组的GLP-2R表达较对照组显著下调（P〈0.05）。结论：GLP-2能刺激小肠黏膜上皮增厚,增加小肠不同肠段黏膜的绒毛高度;小鼠的胃、空肠与结肠经GLP-2（腹腔注射）处理后其受体表达下调。     

LPS受体及信号转导研究进展

内毒素脂多糖（LPS）可激活单核／巨噬细胞,产生一系列炎症反应,而LPS跨膜信号转导是引起细胞效应的关键。本文主要综述LPS结合蛋白（LBP）、LPS受体（mCD14、sCD14）以及Toll群受体（TLRs）在LPS激活细胞及信号跨膜传递中的重要作用。推测LPS／LBP与细胞膜CD14结合后,TLRs以及细胞外富含亮氨酸片段的重复序列识别LPS,将LPS的刺激信号跨膜转导,激活NF－kB信号途径导致效应基因的表达。     

Toll样受体调节树突状细胞中腺苷受体A2B亚型的表达及功能

树突状细胞（dendritic cell,DC）表面所表达的腺苷受体A2B亚型（ADOR-A2B）可促进DC对辅助性T淋巴细胞（T helper cell,Th）的激活,导致自身免疫性疾病的发生或加重. 本文旨在研究作为免疫反应的诱导分子Toll样受体（Toll-like receptors, TLRs）是否可调节ADOR-A2B在DC中的表达并籍此影响其功能. 体外诱导小鼠骨髓细胞分化为树突状细胞（BM-DC）,以多种TLRs的配体,Pam3csk4、polyIC、LPS及CpG进行干预. 提取细胞总RNA,real-time PCR测定ador-a2a、ador-a2b的表达;放射性配体结合实验测定BM-DC对3H 腺苷结合能力的变化.以LPS及选择性ADOR-A2B激动剂BAY 60-6583协同干预BM-DC,ELISA测定培养基中IL-1、IL-6及IL-12的含量. 以干预后的BM DC刺激naive CD4细胞,ELISA测定培养基中IL-17A、IFNγ的含量,荧光抗体染色及流式细胞仪分析检测CD4细胞的分化. 结果显示, TLR 4的配体LPS可显著提高BM DC中ador-a2b的表达及对腺苷的结合能力. BAY 60-6583与LPS相协同可刺激BM DC分泌多种致炎因子,并增加其诱导CD4细胞向Th1及Th17分化的能力. 由此可见,Toll样受体可上调ador-a2b在DC中的表达,并可籍此增加DC分泌促炎因子的能力及对CD4细胞的刺激作用.     

自剪切多肽P2A对自然杀伤细胞的高效诱导扩增作用的研究

目的改进现有过继性人自然杀伤（NK）细胞体外诱导、分化及扩增方法,实现高效定向分化及大量扩增NK细胞的目的。 方法利用自剪切多肽P2A连接IL-15和4-1BBL基因,通过慢病毒感染和药物筛选的方法制备稳定表达IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株。该方法可刺激人PBMC细胞向NK细胞分化及高效增殖。实验结果以 ±s表示并用两样本t检验进行比较。 结果经该方法培养的CD3^- CD16⁺ 56⁺ NK细胞增殖倍数达到（4480.43±37.80）倍;CD3^- CD16⁺ 56⁺ NK细胞纯度达到94.79%;细胞内表达IFN-γ和TNF-α的NK细胞比例为（63.07±3.37）%和（54.85±2.04）%,分别高于对照组（16.28±2.86）%和（14.53±1.15）%（t = 62.25,22.66,P均< 0.01）;细胞分泌至培养上清液中的IFN-γ和TNF-α浓度为（111.39±6.95）?pg/ml和（32.76±3.23） pg/ml,分别高于对照组（44.99±4.74）pg/ml和（11.09±2.45）?pg/ml（t = 20.56,7.21,P均< 0.01）;在体外,该方法培养的NK细胞对K562细胞的杀伤效率为（78.52±7.36）%,高于对照组（48.53±6.66）%（t = 11.56,P < 0.01）;对H520细胞的杀伤效率为（65.03±3.27）%,高于对照组（35.85±3.99）%（t = 11.35,P < 0.01）。 结论利用自剪切多肽P2A构建稳定高表达的IL-15和4-1BBL的K562滋养层细胞株,从而提高了NK细胞增殖倍数、纯度和细胞毒性。     

Toll样受体信号转导对树突状细胞活化的影响

树突状细胞（dendriticcells,DCs）是目前已知功能最强的抗原提呈细胞（antigenpresentingcell,APC）,是介导固有免疫和适应性免疫的桥梁,在机体抗感染、抗肿瘤等方面发挥重要作用。Toll样受体（toll．1ikereceptor,TLRs）是一类重要的模式识别受体（paRemrecognitionreceptors,PRRs）,可识别入侵的病原体相关分子模式（pathogen-associatedmoleculepatterns,PAMPs）,通过招募接头蛋白、活化蛋白激酶和激活转录因子进行信号传导,从而引起效应细胞的活化和促炎因子的释放。不同亚型的DCs分布有不同的TLRs,多种TLRs可识别外来入侵的病原体成分,发挥重要的免疫学作用：诱导DCs分化成熟,摄取递呈抗原,促进DCs分泌多种细胞因子发挥作用。在炎症、病毒感染、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病状态下,DCs表面TLRs的表达上调或下调,并且存在功能障碍,可影响DCs的分化成熟,导致其功能低下,这与疾病的发生和发展密切相关。本文综述了TLRs及其信号通路对树突状细胞的活化及功能的影响。     

Toll样受体在烟曲霉侵染宿主细胞过程中作用的研究进展

烟曲霉侵染宿主细胞时伴有明显的细胞肌动蛋白骨架重排,而重要模式识别受体PRRs(pattern recognition receptors)之一,Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)参与调节病原细菌诱导的宿主细胞肌动蛋白骨架重排,其中TLR2和TLR4两亚型可以识别烟曲霉的病原相关分子模式PAMP(pathogen-assosiated molecular patterns),并诱发炎症因子表达等一系列效应信号,在宿主细胞抗烟曲霉天然免疫中发挥重要作用,但在烟曲霉内化侵入过程中TLR能否特异性介导细胞肌动蛋白骨架重排尚不清楚。因此,研究揭示TLR激活在烟曲霉侵入宿主细胞的调控作用,对寻找可能的抗真菌药物作用靶点具有重要意义。