综述与专论: 基于核酸适配体的细胞外囊泡分离分析方法

细胞外囊泡通过参与细胞间通讯，在诸多生理病理过程中发挥着重要作用。因此，细胞外囊泡的分离分析对理解其生物学功能以及发展基于囊泡的疾病诊疗方法具有重要价值。细胞外囊泡的高效分离以及高灵敏可靠检测很大程度上取决于识别配体。核酸适配体是一类高效、特异结合其靶标分子的单链寡核苷酸。核酸适配体的易修饰和可程序化设计等特征，使其成为细胞外囊泡分离和分析的理想识别配体。为提高细胞外囊泡的分离效率，研究者们提出多种策略用于提升核酸适配体的亲和力，以及界面与细胞外囊泡的接触几率。此外，分离不同亚型的细胞外囊泡有助于理解细胞外囊泡的生物学意义。在细胞外囊泡分析方面，根据核酸适配体与细胞外囊泡识别信号的转导方式不同，分为电化学、可视化、表面增强拉曼光谱、荧光法等方法。本文综述了核酸适配体的筛选以及其在细胞外囊泡分离和分析中的最新进展、挑战及未来方向。     

细胞外囊泡与肿瘤

细胞分泌的胞外囊泡(包括外泌体、微囊泡、凋亡小体、迁移体、retractosomes、R-EVs等)含有DNA、RNA、分泌性蛋白质、脂质、膜受体和其他类型的生物活性大分子。它在细胞的可塑性、细胞间交流和微环境重塑中起着关键作用。该文总结了细胞外囊泡的类型、形成、调节及其在肿瘤发生、转移、肿瘤免疫和靶向治疗中的作用和临床意义。     

细胞外囊泡在治疗膝骨关节炎中的作用与前景

膝骨关节炎（knee osteoarthritis,KOA）是以关节软骨退变为主要病变的退行性疾病。目前，KOA尚无有效治疗药物。细胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）是由细胞释放的脂质双分子层包绕形成的球状膜性囊泡，可在细胞间传递核酸、蛋白质等生物活性分子。与动物来源EVs相比，植物来源EVs因其来源广泛且经济，在药物载体递送研究领域引起广泛关注。通过基因工程等方法改造EVs进行药物递送，可极大提高药物递送效率及其疗效。本文综述了动、植物两种来源的EVs在KOA中的治疗进展，特别聚焦于工程化EVs作为药物递送载体在KOA治疗中的研发现状，旨在为利用EVs治疗KOA提供参考。     

葡萄球菌细胞外囊泡研究进展

细胞外囊泡(extracellular vesicles,EV)是由脂质双分子层包裹着蛋白质、核酸等生物分子组成的天然纳米结构颗粒。EV作为细胞间无细胞通讯的一种方式,通过传递包括遗传信息在内的大量生物分子来影响细胞间的通讯。此外,EV还参与多种生物学功能的调控,如免疫调节、细胞间竞争、水平基因转移和致病性等。革兰氏阳性细菌分泌的EV携带多种化合物,这些化合物在细菌竞争、生存、入侵、抗生素耐药和感染方面发挥多样化作用。目前对于细菌EV的研究主要集中在革兰氏阴性细菌中,对革兰氏阳性细菌EV的研究报道较少,其中对葡萄球菌EV的报道主要是金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。这篇综述介绍了葡萄球菌EV的化学成分组成、功能和分泌的影响因素及临床应用。     

细菌来源的细胞外囊泡在病原微生物与宿主细胞相互作用中的研究

细胞外囊泡指所有类型的细胞包括免疫细胞通过不同的生物发生途径释放的具有双层膜结构,包含脂类、蛋白质、糖类、遗传物质的球形纳米级膜结合小泡,其也可以从许多生物液体中分离出来。细胞外囊泡在原核生物和真核生物中都被认为是细胞间通讯的有力载体,可以参与广泛的生物过程。该文从细胞外囊泡、细菌来源的细胞外囊泡、细菌来源的细胞外囊泡与宿主细胞相互作用等方面介绍了细胞外囊泡大小和组成,进一步阐述了细菌来源的细胞外囊泡的特点、功能、发生及其引发的炎症反应和细胞死亡,最后对细菌来源的细胞外囊泡作为疫苗和载体的应用进行了展望。     

真菌细胞外囊泡的研究进展CSCD

细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是一种细胞分泌的膜性囊泡。研究表明EVs在细胞生命的许多方面起着重要作用,包括细胞间的通讯、发病机制和癌症进展[1]。然而,EVs在微生物学中的作用却研究较少,EVs在微生物中最先是在革兰氏阴性菌中发现的[2],后续的研究表明它们在革兰氏阳性菌中也普遍存在[3],此后也有研究发现其在病毒致病过程中的作用和机制。目前,关于EVs与真菌感染关系的研究甚少,本综述将介绍EVs在真菌中的相关研究进展。     

细胞外囊泡表面蛋白冠的研究进展

细胞外囊泡是细胞释放的具有磷脂双层膜结构的天然纳米颗粒,参与体内细胞信号转导、肿瘤发生发展、免疫调节、延缓衰老等多种生理病理过程,在疾病诊断及治疗中表现出巨大潜力。既往研究认为,高纯度细胞外囊泡的制备易受杂质蛋白污染,制约了细胞外囊泡在生物标志物和药物运载系统方面的研究及转化应用。近两年,部分学者将合成纳米颗粒领域的蛋白冠这一概念引入细胞外囊泡领域,认为蛋白冠是细胞外囊泡表面的固有成分,并显著影响细胞外囊泡的生物学功能,为细胞外囊泡研究提供了新思路。概述了当前细胞外囊泡表面蛋白冠的研究现状,围绕该蛋白冠的形成过程、化学组成、生物功能、鉴定方法等展开,以期为细胞外囊泡及其蛋白冠的进一步研究提供参考。     

迁移体的产生、功能及应用

迁移体是在细胞迁移过程中产生的一种直径为0.5～3.0μm的单层膜囊泡结构,其内部还有一些含有核酸、蛋白质、脂质等生物活性物质的微小囊泡。迁移体在细胞间通讯过程中发挥重要作用,参与并调控多种生理和病理过程。尿液中迁移体的增加可以作为足细胞早期损伤的标志物,从而为足细胞病的临床诊断和治疗提供辅助。本文从迁移体的发现、发生机制、研究手段、生物学功能和应用潜能,以及与其他细胞外囊泡的异同六个方面进行了综述,探讨了迁移体的研究进展及未来可能的研究方向。     

自噬与外泌体在急性肺损伤中的研究进展

急性肺损伤(ALI)是一种常见的临床疾病,在全世界范围内引起严重的健康问题,但其发病机理尚不清楚。自噬(autophagy)是当前生物医学研究热点之一,涉及了多种病理生理过程。近期研究表明,自噬与包含ALI在内的多种肺部疾病的发病进展有关。外泌体(exsome)是由多种活细胞分泌的,由脂质双层被膜包围的纳米级结构(30～100 nm)。它通过传递其囊泡内包含的蛋白质,脂质和核酸来调节细胞间通讯和相互作用。外泌体的存在对其供体细胞、受体细胞、以及细胞间结构都有着重要的生理和病理意义。因此,外泌体的功能及特点得到越来越多的关注,成为疾病的诊断和治疗策略发展的新目标。在本篇综述中,我们概括了近年来自噬和外泌体对ALI病理生理的影响,并提出了二者可能的关联假设。     

干细胞来源的胞外囊泡对T细胞的免疫调控作用

胞外囊泡（EVs）是细胞旁分泌产生的一种亚细胞成分,实质上是一组纳米级颗粒。它是双层膜结合型囊泡,内含蛋白质、核酸等活性成分。EVs在细胞间通过转移携带的信号分子而获得重要的地位。目前关于EVs在体外和体内的研究中对T细胞的调控能力引起了人们广泛的兴趣。在大多数研究中干细胞被报道能够抑制T细胞的增殖、活化和分化,在极少数研究中也发现干细胞具有增强T细胞免疫反应的作用。事实上所有的细胞类型均能释放EVs,包括干/祖/前体细胞。EVs被认为是细胞间交流的一种新机制,具有与干/祖细胞等亲代细胞相似的免疫调控作用。本综述是概述干/祖细胞来源的EVs对T细胞调控作用及可能的机制。     

植物细胞外囊泡及其分析技术的进展

细胞外囊泡是细胞在生理和病理条件下通过胞吐作用释放的具有磷脂双分子层结构的纳米级囊泡。细胞外囊泡作为蛋白质、核酸、脂质和代谢物等物质的载体,能够在细胞与细胞之间穿梭,行使物质传递、信息交流的功能,是细胞间通讯的重要媒介。近年来,植物中细胞外囊泡的研究也不断深入,其研究和分析技术也取得了很大进展。本文介绍了细胞外囊泡的组成,综述了植物中细胞外囊泡的生物学功能,分析了细胞外囊泡分离与富集方法的优缺点,以及原位成像技术的应用,最后对植物细胞外囊泡研究技术发展的重点进行了展望。     

人脐带间充质干细胞微囊减轻小鼠急性肾损伤的研究

目的探讨人脐带间充质干细胞（MSCs）源性细胞外囊泡Oct-4 mRNA对受损的肾小管上皮细胞修复的作用及相关机制。 方法将培养的缺氧损伤肾小管上皮细胞置于含有人脐带MSCs细胞外囊泡及不同对照培养液的培养腔室玻片上孵育48?h,应用BrdU及TUNEL染色,检测各组细胞增殖或凋亡情况。将急性肾损伤模型小鼠分为4组：空白组、EVs组、Oct-4过表达组、Oct-4低敲组。并按照分组分别注射磷酸盐缓冲液（Vehicle）,人脐带MSCs细胞外囊泡（EVs）,过表达Oct-4基因的人脐带MSCs细胞外囊泡（EVs?+?Oct-4）及敲除Oct-4基因的人脐带MSCs外囊泡（EVs-Oct-4）,并在注射48?h及2周后采血测肌酐（Crea）及尿素氮（BUN）,了解肾功能变化;对各组上述处理后的肾组织应用TUNEL与增殖细胞核抗原表达量检测各组肾脏细胞凋亡与增殖情况;通过Masson染色检测了各组肾脏纤维化程度;通过PCR探索肾损伤后肾组织细胞Snail基因的表达变化。数据分析采用方差分析和SNK-q检验。 结果EVs?+ Oct-4处理缺氧的肾小管上皮细胞48?h后,TUNEL染色显示具有最少的凋亡细胞数（0~1）/?HPF,BrdU显示有最多的增殖细胞（7±2）/HPF。EVs,EV-Oct-4以及Vehicle对体外缺氧肾小管上皮细胞的上述作用依次减弱（P?相似文献   

烟曲霉的细胞外囊泡蛋白质及RNA分析

目的 分析烟曲霉的细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)中的重要成分,以进一步明确曲霉致病机制。方法 通过离心法分离烟曲霉的囊泡,用电镜观察形态。采用马尔文纳米颗粒跟踪分析仪分析溶液中EVs的大小分布。通过质谱仪对囊泡内处理后的肽段进行分析。二级质谱数据使用Maxquant (v1.5.2.8)进行检索。检测RNA分布,通过数据库分析烟曲霉EVs中miRNA可能参与的一些通路。结果 电镜下烟曲霉的EVs可见明显的双层脂质结构。NTA发现烟曲霉分析的EVs大小主要集中在130 nm左右。EVs蛋白中不稳定蛋白为9种(15%),其余为稳定蛋白,而等电点(isoelectric point, PI)>7的为6种蛋白。EVs中大部分是胞浆蛋白,其余比较多的是细胞外分泌蛋白,但仍有25%的蛋白不能定位。通过跨膜蛋白预测(transmembrane prediction, TMPred)和糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol, GPI)预测,有5种蛋白存在于双层脂质膜上的蛋白。检测到RNA中rRNA和tRNA分别占59.7%和...     

卵泡液中细胞外囊泡及其携带的microRNA对卵泡发育的作用

细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)是指细胞分泌的双层膜转运囊泡。EVs能从细胞中摄取大分子物质,并将其转移至受体细胞。在这些大分子物质中,研究最多的就是microRNA (miRNA)。miRNA是一种参与基因表达调控的非编码RNA,已证实在哺乳动物卵泡液EVs中有不同的非编码RNA存在,EVs携带miRNA可以作为自分泌和旁分泌的替代机制,影响卵泡发育。文中系统介绍了EVs的种类、特征和分离鉴定方法,重点综述了EVs及携带的miRNA对卵泡发育的作用,包括早期卵泡发育、卵母细胞成熟、卵泡优势化以及对颗粒细胞功能的影响。同时对卵泡液中EVs及其携带的miRNA的未来研究进行了展望,为卵泡液中EVs及携带的miRNA功能的研究及应用提供了思路和方向。     

卵泡液细胞外囊泡携带的microRNA对卵泡闭锁影响的研究进展

细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)是细胞主动释放的膜结合颗粒。在原核生物和真核生物中,EVs被认为是细胞间进行信息交流的一种方式。EVs具有携带蛋白质、脂质和核酸等生物大分子的能力,可以影响亲本细胞和受体细胞的不同生理功能。其中,EVs携带的microRNA研究报道最多,在生物体生理功能方面发挥着重要作用。卵泡在发育过程中,只有少数卵泡可以充分发育、成熟、排卵,大多数卵泡在发育的不同阶段发生闭锁。在卵泡发育的整个过程中,每一阶段的变化以及卵泡闭锁调控机制还不完全清楚。本文在总结EVs类型、特性、分离方法及用途的基础上,从不同细胞因子、激素方面重点论述了卵泡液中EVs携带的microRNA是如何调控卵泡闭锁,同时对卵泡液EVs携带的microRNA在生殖调控和生殖疾病诊断方面的研究前景进行了展望,对于卵泡发育调控研究以及有效利用研究具有一定参考意义。     

干细胞衰老与衰老微环境调控的研究进展

干细胞衰老会损害机体组织的稳态,衰老的干细胞丧失修复能力从而引发衰老相关疾病。衰老微环境是促进机体衰老的重要因素之一。衰老相关分泌表型(SASP)是构成衰老微环境的主要成分,影响干细胞的组织修复能力,进而推动机体衰老进程。细胞外囊泡(EVs)被认为在衰老微环境中发挥重要作用,衰老细胞分泌的EVs通过运载mi RNAs等非编码RNA及SASP在内的多种活性分子参与调控衰老微环境,本文就干细胞衰老的诱发因素以及衰老微环境的研究进展进行综述,以期为干细胞的临床应用提供实验基础和理论基础。     

细胞外囊泡在非酒精性脂肪性肝炎中的应用前景

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种慢性肝病,常见于普通人群。随着病情的进展,单纯非酒精性脂肪肝患者会发展为非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)。由于缺乏明确的生物标志物和治疗策略,NASH的管理成为临床医生的一项艰巨任务。细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是细胞膜向内或向外出芽产生的异源性囊泡群,其中包含多种能调节细胞代谢活动的内容物,这些内容物参与了NASH的疾病进展。近年来越来越多的研究证明了细胞外囊泡应用于NASH的潜力。本文将阐明EVs在NASH中的作用及其在NASH中的应用前景。     

外泌体miRNA的生物学功能及其在肺纤维化疾病中的调控作用

外泌体是一种微型纳米级细胞外囊泡,由于能够直接参与细胞间信息的传递和物质的运输,被认为是细胞间通讯、免疫调节、疾病诊断和预后循环生物学标志物的重要载体,其携带的核酸和蛋白质等内含物能够影响受体细胞的生理状态.作为一种内源性非编码微小RNA,microRNA (miRNA)对疾病诊断和治疗有着重要的研究价值,有大量证据表明该类分子对肺部疾病的发病进程起着控制调节作用.本文聚焦于近年来细胞外泌体来源miRNA的生物学特性和功能领域,综述了近年来生物医学研究中的热点分子外泌体miRNA在肺部疾病尤其是肺纤维化中调控功能和机制的研究,因此不仅能为肺纤维化疾病的诊断提供新的标志物分子,并且还能够为肺纤维化的外泌体干预治疗建议新的干预策略.     

玉米细胞两种质膜囊泡的制备和鉴别

细胞质膜是细胞进行物质交换、能量转换及信息传递等重要生命活动的关键部位,现已成为细胞生物学、植物生理学和生物化学的重要研究领域。但目前对植物细胞质膜。：研究远远落后于对其它材料质膜的研究,其中一个重要原因就是制备高度纯化的具有特定朝向的密实质股囊泡比较困难,而不同的研究目的分别需要正向型（ROV）和内侧外翻型（IOV）两种质膜囊泡。我们在前人方法基础上加以改进,成功地制备了基本上为两种取向的密实质膜囊泡,并已用于质膜十”一泵和铁氰化钾还原酶的研究［’j。材料与方法1材料玉米（he＿）农大65的种子。奎叮…     

基于微流控技术的外泌体分离方法的研究进展

外泌体是一种由细胞分泌的,直径一般为30-150 nm的囊泡。外泌体携带有多种蛋白质、mRNA及miRNA等生物标记物,并直接参与细胞间的信息传递、抗原传递、蛋白转运以及RNA转录等重要的生命活动过程,与癌症等多种疾病的发生密切相关,因此在疾病的发生机制探索和相关疾病的检测中具有重大的应用价值。然而,外泌体通常以游离的形式存在于体液中,对外泌体的分离和纯化是实现基于外泌体的疾病发生机制及疾病检测应用研究的基础。近年来,研究人员利用外泌体的生物物理和生物化学性质研发了多种分离和纯化外泌体的方法技术,主要有超速离心法、聚合物沉淀法、免疫分离法以及基于微流控的分离法等。综述了近年来外泌体分离和纯化方法的研究进展,简要论述了传统的外泌体分离方法,重点介绍了基于微流控技术的外泌体分离方法,并比较了这些方法的分离机制、优缺点以及应用前景。通过对近年来外泌体分离和纯化方法的研究现状进行归纳和比较,旨为相关研究人员开展外泌体研究工作提供参考,从而进一步推进外泌体在疾病检测及其他生物医学应用的研究进展。