酪氨酸蛋白激酶底物的 ELISA 测定及应用

用合成的磷酸酪氨酸牛血清白蛋白(P-tyr-BSA)免疫家兔得抗血清,此抗血清与3种磷蛋白均有交叉反应.将 IgG 纯化并与辣根过氧化物酶偶联,经 Sephadex G-200纯化得酶标结合物.纯化的 IgG 只与载体牛血清白蛋白和磷酸酪氨酸蛋白有交叉反应.ELISA (酶联免疫吸附测定法)的最小检出量为2—4ng,与被检磷酸酪氨酸蛋白均有交叉反应,但与磷酸丝氨酸和磷酸苏氨酸蛋白及其他含磷酸物质无交叉反应.样品变异系数,批间和批内均小于5%.血清磷酸酪氨酸蛋白检测结果:20例正常人均阴性,20例急性淋巴细胞性白血病18例阳性,14例非急性淋巴细胞性白血病均阳性.     

L—酪氨酸

<正> 酪氨酸是芳香族含酚基的氨基酸,它在1847年首先被李比格(Libig)发现和分离出来。最早来沅于干酪素,因而取称为酪氨酸。De、La、Rue.W.第一个提出它的分析正确数据,指出其实验式为 C_8H_(11)NO_3,②1947-1957年期间及有博普(Bopp)等人。进一步多种蛋套质酸水解物中分出酪氨酸来。酪氨酸以蚕丝、蚕蛹、猪毛等含量较为丰富。除了为蛋白质组成存在外,尚有以溴代酪氨酸或碘代酪氨酸及 L—多巴等,酪氨酸的衍生物形存在于自然界。此外,还有作为新陈代谢调节剂的动物激素(催产素、释放素等)及某些菌素(放线菌素等)的组成而存在。酪氨酸是一种重要的生化试剂,也是合成二碘酪氨酸、L—多巴及含酪氨酸的多肽素,抗菌素等药物的原料。其用途正逐步扩大,需要量也日益增加。最近,我们用它进行小猪生长影响的试验。发现它能起促进小猪生长和节约蛋白质饲料的作用。③添加千分之一至千分之二的酪氨酸,就能比对照增27-65%。     

胱氨酸粗制废液中胱、酪氨酸的回收与分离

毛发水解制备胱氨酸的第二次中和(粗制)在pH2.0时所得粗品纯度高便于精制,将母液中和到pH4.0可回收到原料量3—3.5%的胱、酪氨酸混合物,分离精制后,胱、酪氨酸成品率分别为1.2—1.5%和0.5—0.8%。     

从猪血粉水解液中分离L—酪氨酸

<正> L—酪氨酸(L—Tyrosine)即α—氨基—β—对羟苯基丙酸,在医疗、生化、工业、农业各领域的应用日益广泛。我们在酸水解猪血粉制备混合氨基酸注射液时,酪氨酸因水中溶解度极小而首先被分离,鉴于原料来源广、工艺操作简便,又是综合利用,现阶段有实用意义。故将分离操作和产品鉴定结果报告如下:     

活性炭色谱法分离苯丙氨酸、酪氨酸

根据活性炭对苯丙氨酸、酪氨酸的选择性吸附特性和二者在活性炭吸附中的差异,通过活性炭吸附与氨水、乙醇二步解吸的活性炭色谱法从多种氨基酸的猪血粉水解液、棉籽蛋白水解液中成功地分离提取了苯丙氨酸、酪氨酸。活性炭色谱法工艺对提取法、发酵法生产苯丙氨酸具有实用价值。还为联合离子交换色谱法分离水解液中其他氨基酸改善了物料条件,从而较好地解决了树脂毒化问题、氨基酸交叉重选问题,并使洗脱溶液中杂质少、纯度高,易于结晶。     

磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化

以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为免疫原免疫兔获得抗血清。自抗血清中分离获得抗体。自酪胺合成磷酸酪胺,并偶联到溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上。抗体经磷酸酪胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和柱纯化,所得抗体专一性强,Ｄｏｔ ｂｌｏｔ显示：抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白,溶菌酶,卵清蛋白起抗原抗体反应,而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶,卵清蛋白,也不识别作为免疫     

磷酸酪氨酸蛋白专一抗体的制备和纯化

以偶联磷酸化酪氨酸的牛血清白蛋白（ＢＳＡ）作为免疫原免疫兔获得抗血清．自抗血清中分离获得抗体．自酪胺合成磷酸酪胺,并偶联到溴化氰活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上．抗体经磷酸酪胺－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化,所得抗体专一性强,Ｄｏｔｂｌｏｔ显示：抗体仅对酪氨酸磷酸化的蛋白质包括酪氨酸磷酸化的血清白蛋白,溶菌酶,卵清蛋白起抗原抗体反应,而不识别非酪氨酸磷酸化的溶菌酶,卵清蛋白,也不识别作为免疫原的骨架成分ＢＳＡ,也不识别丝氨酸磷酸化的卵清蛋白和苏氨酸磷酸化的卵清蛋白．     

小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶的纯化和性质研究

以~(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr(4:1)为底物,用于研究小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)的分离纯化和性质。再生肝胞浆经60％饱和度硫酸铵盐析,二次DEAE纤维素层析,Sephadex G-200柱层析和Poly Glu,Tyr-Sepha-rose 4B亲和层析后,得到的PTPP分子量为67000,纯度提高1123倍,活性回收率为28％,对~(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr有很高的活力,对~(32)P(Ser/Thr)-Casein(酪蛋白)和PNPP(对硝基苯酚磷酸盐)没有作用,其最适pH为6.8～7.1,对热不稳定。EDTA对酶有激活作用,Zn~(2+)、PNPP、P-Tyr、多胺化合物、焦磷酸根、钼酸根、柠檬酸根对酶有明显的抑制作用。酶对Na_3VO_4不敏感。碱性蛋白质组蛋白、鱼精蛋白对酶活力有抑制作用,酸性蛋白质酪蛋白和酸性多糖物质肝素对酶活力有激活作用,且后者能减弱前者的抑制作用。     

六种氨基酸混合物溶液的紫外光谱的人工神经元网络定量分析研究

把人工神经网络用于六种氨基酸(酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、组氨酸,3,4—二羟基苯丙氨酸)混合物紫外光谱的定量分析,以酪氨酸为例,不经分离测定了混合溶液中酪氨酸的含量,为氨基酸的多组分分析提供了一种新方法。并与卡尔曼滤波方法进行了比较,表明神经网络在一些方面优于卡尔曼滤波方法。     

六种氨基酸混合物溶液的紫外光谱的人工神经元网络定量分析研究

把人工神经网络用于六种氨基酸(酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、组氨酸,3,4—二羟基苯丙氨酸)混合物紫外光谱的定量分析,以酪氨酸为例,不经分离测定了混合溶液中酪氨酸的含量,为氨基酸的多组分分析提供了一种新方法。并与卡尔曼滤波方法进行了比较,表明神经网络在一些方面优于卡尔曼滤波方法。     

用酪氨酸苯酚裂合酶催化苯酚和 S-(O-硝基苯)-L-半胱氨酸合成 L-酪氨酸

近年来生物技术学家对酶法合成氨基酸具有浓厚的兴趣。我们对弗氏柠檬酸细菌(ATCC29063)酪氨酸苯酚裂合酶催化高Vmax,低Km 基质S(O—硝基苯)-L-半胱氨酸和苯酚,合成L 酪氨酸进行了研究。用可溶性S(o-硝基苯)-L-半胱氨酸反应迅速,2小时或更短时间反应达到完全,约70%苯酚转化为L-酪氨酸,反应底物所剩无几。这一反应的最适pH 值范围广泛,从6.8到9以上。由于S-(O硝基苯)-L-半胱氨酸易用L-半胱氨酸和对一氟硝基苯制备,所以采用这一反应合成L-酪氨酸及其衍生物具有潜在价值。     

猪脾脏酪氨酸蛋白激酶的研究

 采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析和Tyrosine-agarose亲和层析,首次从猪脾脏30000Xg颗粒中部分纯化了酪氨酸蛋白激酶,其比活性约为12000pmol.min~(-1).mg~(-1)。磷酸氨基酸分析表明,该酶能催化合成多肽poly(Glu.Ala.Tyr)_n(6:3:1)中的酪氨酸(Tyr)磷酸化,对该多肤废物和ATP的Km值分别约为2mg/mL和15μmol/L。Mn~(2+)对部分纯化的酪氨酸蛋白激酶的最大激活活性高于Mg~(2+),其AC_(50)分别约为1.4mmol/L和8mmol/L;发现红花素能强烈地抑制该酶活性,其IC_(50)约为125μmol/L。     

发酵法生产 L—酪氨酸

<正> 1、发明的名称:发酵法制备L—酪氨酸2、专利申请范围:采用谷氨酸棒状杆菌属的L—苯丙氨酸缺陷型,以及对L—苯丙氨酸类似物及磺酰胺有抗性的突变株制造酪氨酸的方法,该突变株在培养基中可以生成和积累L—酪氨酸。3、本发明的详细说明:本发明是关于发酵法制备L—酪氨酸。用发酵法生产L—酪氨酸已知的有谷氨酸微球菌的L—苯丙氨酸缺陷型的制造方法、短杆菌属等的对一氟苯丙氨酸抗性株或棒状杆菌属的L—酪氮酸及L—苯丙氨酸的类似物的抗性菌株的制造方法等。     

发酵法生产 L—酪氨酸

<正> 1、发明的名称:发酵法制备L—酪氨酸2、专利申请范围:采用谷氨酸棒状杆菌属的L—苯丙氨酸缺陷型,以及对L—苯丙氨酸类似物及磺酰胺有抗性的突变株制造酪氨酸的方法,该突变株在培养基中可以生成和积累L—酪氨酸。3、本发明的详细说明:本发明是关于发酵法制备L—酪氨酸。用发酵法生产L—酪氨酸已知的有谷氨酸微球菌的L—苯丙氨酸缺陷型的制造方法、短杆菌属等的对一氟苯丙氨酸抗性株或棒状杆菌属的L—酪氮酸及L—苯丙氨酸的类似物的抗性菌株的制造方法等。     

家蚕蛋白酪氨酸磷酸酶基因克隆、表达纯化与结构分析

蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein tyrosine phosphatase,PTP,EC 3.1.3.48)特异性地催化去除磷酸化修饰的酪氨酸残基上的磷酸基团,导致蛋白去磷酸化,从而调控了细胞生长、增殖、分化和免疫等生命活动。家蚕Bombyx mori蛋白酪氨酸磷酸酶h(BmPTP-h)参与了核型多角体病毒(Nucleopolyhedrovirus,NPV)在家蚕体内的复制过程,但目前对于BmPTP-h结构和性质的了解并不多。本文从家蚕中肠克隆了BmPTP-h基因编码序列,分析了BmPTP-h的基因组结构、mRNA结构、序列特征、二级结构和溶液中的状态。同源氨基酸序列比对分析表明BmPTP-h与多种昆虫NPV的PTP序列具有高相似度,暗示了它们可能具有共同的起源和相似的功能。文中构建了原核表达载体,通过大肠杆菌在25℃下表达获得了可溶性的重组BmPTP-h,利用Ni-NTA亲和层析纯化了BmPTP-h。凝胶过滤分析显示BmPTP-h在溶液中可以形成聚集体和单体。圆二色光谱分析显示重组的BmPTP-h包含α螺旋结构,升高温度导致BmPTP-h的α螺旋结构去折叠,α螺旋结构含量下降。这些研究为深入研究BmPTP-h的结构和调控机理提供了基础。     

高效毛细管电泳法直接测定红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸

建立了红豆杉悬浮培养细胞中游离芳香族氨基酸的高效毛细管电泳的分离直接紫外吸收测定方法。在优化的实验条件下 ,以间苯二酚为内标 ,未涂层融硅毛细管 (75 μmi.d .,总长 37cm ,有效分离长度 30cm)为分离通道 ,40mmol/L磷酸缓冲液 (pH10 .46 )为电泳介质 ,3sec(0 .5 psi)压力进样 ,15kV恒压电泳 ,2 0 0nm检测 ,在 9min内三种氨基酸得到分离测定。色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的线性范围分别为 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 2 ,RSD =2 .5 2 % )、1.2 5～ 2 5 0 μmol/L(r =0 .996 6 ,RSD =2 .12 % )和 2 .5 0～ 2 5 0 μmol/L(r=0 .9940 ,RSD =2 .93% ) ,苯丙氨酸回收率为 96 .8%± 1.37% ,酪氨酸回收率为 99.2 %± 3.0 4%。     

HPLC在氨基酸注射液中乙酰—酪氨酸含量测定方法上的应用

<正> 含有乙酰—酪氨酸的氨基酸注射液由于乙酰—酪氨酸的存在,在氨基酸分析仪上无法一次将全部组分同时检测出来,而需将样品进行水解反应,将乙酰酪转化成能在氨基酸分析仪上出峰的酪氨酸,这样单独测一个酪氨酸组分在氨基酸分析仪上需1小时方能完成。本文采用HPLC法在常温下只需5分     

家蚕核型多角体病毒酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达

采用PCR方法克隆了家蚕核型多角体病毒中国镇江株 (BmNPV ZJstrain)的酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因(ptp) ,测定了该基因的核苷酸序列 ,比较了与相关病毒相应基因的同源性 ,并将该基因插入到原核表达质粒在大肠杆菌中进行了表达。该基因的编码部分由 5 0 7个核苷酸组成 ,编码 16 8个氨基酸残基的蛋白多肽 ,其中含有酪氨酸蛋白磷酸酶酯催化部位的“HC”基序。该基因与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV) ptp 基因和BmN PV -T3 株 (日本 )拟为的 ptp基因核苷酸序列的同源性分别为 96 8%和 98 2 % ,蛋白质氨基酸序列的同源性分别为 97 0 %和 97 6 %。将该基因插入到温度诱导型表达质粒pBV2 2 1的温控启动子PRPL 之后 ,在大肠杆菌JM10 9中表达了具有催化活性的蛋白质 ,分子量约为 19kD ,表达产物能催化对硝基酚磷酸钠 (PNPP)的脱磷酸反应 ,这种催化作用可被钒酸钠和ZnCl2 抑制     

蚕丝中甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、酥氨酸和酪氨酸的离子交换柱分离

<正> 我厂自一九七七年开展应用废蚕丝水解液分离提取氨基酸的研究工作,经过一年多的摸索试验,从废蚕丝水解液中分离提取了甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸,其纯度大部分为分析纯。在此基础上,于一九七九年十月转入工业规模生产,为缫丝行业的综合利用开辟新的途径。现将我厂的氨基酸生产经验介绍如下:     

大肠杆菌酪氨酸转运系统基因敲除对酪氨酸生产的影响

酪氨酸是三大芳香族氨基酸之一,广泛用于食品、医药和化工等领域。转运系统工程为代谢工程改造大肠杆菌选育酪氨酸生产菌株提供了一种重要的研究策略。大肠杆菌中酪氨酸胞内转运主要通过aroP和tyrP基因编码的通透酶进行调控。以酪氨酸生产菌株HGXP为出发菌株,利用CRISPR-Cas9技术成功构建了aroP和tyrP基因敲除菌,并通过发酵试验考察了调节转运系统对酪氨酸生产的影响。发酵结果表明,aroP和tyrP基因敲除菌酪氨酸产量分别达到3.74 g/L和3.45 g/L,较出发菌株酪氨酸产量分别提高了19%和10%。对诱导温度进行了优化,结果表明38℃为最佳诱导温度。在3 L发酵罐上进行了补料分批发酵,aroP和tyrP基因敲除菌酪氨酸产量进一步提高至44.5 g/L和35.1 g/L,较出发菌株酪氨酸产量分别提高了57%和24%。研究结果对代谢工程强化大肠杆菌生产酪氨酸具有重要的参考价值。