改良混合固定液在HE制片中的应用

在病理技术工作中,组织固定是最基础,也是最关键的步骤。因固定不当造成切片困难、着色不良而延误诊断,严重影响临床治疗。我科通过长期实践对固定液进行改良,收到满意效果。材料和方法1.组织来源日常送检淋巴结、诊刮的子宫内膜、子宫肌瘤组织各60例,每一实验组20例。2.固定液     

大鼠睾丸组织固定法的优选研究

目的选择一种最优势、合理的固定方式以提高对睾丸组织制片效果,以配合不同种类的科学研究。方法选用10％甲醛溶液、NBF—Bouin’s、Bouin’s和改良Davidson’s四种不同的固定液对大鼠睾丸进行充分固定后,制作石蜡切片,进行HE染色,比较不同固定液中的睾丸组织学形态的差异;利用糖原特殊染色（PAS）,探讨不同固定液对睾丸糖原观察的影响;采用免疫组织化染色,测评睾丸组织内雄激素受体的固定效果。结果改良Davidson’8固定液较NBF—Bouin’s引起的曲细精管萎缩轻,形态更为清晰,用免疫组织化学方法检测雄激素更为敏感,并且改良Davidson＇s固定液在需要对精子发生进行分期时,其PAS染色的效果与Bouin＇s液固定后等同。结论与苴守圈常浦相№曲冉David0Rnn浦对女宙奥由的圈索特罩掂杯     

不同固定液对豚鼠免疫器官石蜡切片质量的影响

摘要 目的：比较不同固定液对SPF级豚鼠免疫器官的固定效果,为筛选适用于脾脏、淋巴结和骨髓的固定液提供参考。方法：将21只300～350 g雄性SPF级豚鼠随机分为7组,每组3只,摘取脾脏、肠系膜淋巴结、髂骨骨髓,各组分别使用4 %多聚甲醛溶液、10 %中性福尔马林溶液、Bouin''s溶液、Carnoy溶液、Davidson''s溶液、Zenker溶液、Helly溶液固定48 h。髂骨骨髓在固定前浸泡于EDTA脱钙液（pH7.2）中并置于37 ℃孵箱进行脱钙。通过制作石蜡切片并进行HE染色,从切片龟裂程度、细胞形态、染色效果等方面比较7种固定液对切片质量的影响。结果：10 %中性福尔马林溶液固定后的脾脏未出现龟裂,白髓和红髓着色清晰,淋巴细胞形态易辨。Carnoy溶液固定后的淋巴结生发中心明区暗区分明,红蓝染色适中,淋巴细胞形态清晰。4 %多聚甲醛溶液固定后的骨髓着色适中,清晰可辨。结论：常温条件下对组织固定48 h,经HE染色后想要达到理想的切片质量,建议使用10 %中性福尔马林溶液固定脾脏,使用Carnoy溶液固定淋巴结,首选4 %多聚甲醛溶液固定骨髓,如果考虑固定的同时完成脱钙建议选择Bouin''s溶液固定骨髓。     

冰冻切片染色方法的改进

冰冻切片染色方法的改进熊正文,胡海霞,苏红,商磊岩（张家口解放军二五一医院病理科,０７５０００）冰冻切片是肿瘤病理快速诊断不可缺少的手段,目前,常用的固定染色方法存在着对组织结构、核染色质颗粒不清晰等缺点,针对上述缺点,经参考有关文献,对ＡＡＦ液进行...     

利用微波固定组织的收缩率

目的探讨利用微波辐射固定、微波辐射与固定液结合固定组织的收缩程度。方法将组织分成40组,用一定强度的微波辐射或一定强度的微波辐射与不同固定液结合方法固定动物组织,并制做石蜡组织切片和HE染色,在此过程中测定各步骤前后的组织块体积,计算出收缩率。结果与结论一定强度的微波辐射和一些微波辐射与固定液结合方法固定的组织收缩率低,这些组织的切片具有细胞质均匀,染色鲜艳,细胞核大而清晰的良好效果。     

利用冰冻切片机快速制作木质茎显微切片技术

植物的木质茎,因次生维管组织含量多,细胞壁木质化程度高,质地较硬,徒手切片和石蜡切片均难以获得满意的切片效果。冰冻切片机可对一定硬度的组织进行切片,是制件植物木质茎的制片的有效工具之一。【方法】利用冰冻切片机可在不经化学固定,对一些质地均匀,含水量较高的木质茎直接切片;而对木质坚硬、含水量较少的茎,经过FAA等固定剂固定后,OCT包埋,(-30)～(-25)℃切片,用0.1%甲苯胺蓝染色液染色。【结果】木质茎的冰冻切片结构完整,图像清晰、色彩丰富。【结论】冰冻切片机可用于木质茎的显微切片制作,再结合甲苯胺蓝染色,具有简便、高效、易操作的优点。     

三种固定液对两种氧化应激细胞模型Bclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响

摘要 目的：比较采用三种不同的固定液对两种氧化应激细胞模型Beclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响。方法：本研究使用丙酮/甲醇（1:1）固定液、甲醇固定液和4%多聚甲醛三种固定液分别对氧化应激细胞模型大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞株进行固定,然后再分别进行免疫荧光双染实验,对比三种固定液固定后对自噬关键调控蛋白Beclin1和LC3染色效果。结果：三种固定液对氧化应激细胞模型Beclin1和LC3蛋白免疫荧光染色结果存在较大差异。丙酮/甲醇（1:1）固定液固定后免疫荧光染色效果最佳,细胞结构清晰可见,两种蛋白定位表达清晰,甲醇固定液次之,4%多聚甲醛固定液效果欠佳。结论：在对大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞进行自噬相关蛋白免疫荧光双染色实验中,在使用其它固定液染色效果不佳的情况下,可以选择应用丙酮/甲醇（1:1）固定液固定,再进行免疫荧光染色;根据不同实验需求相应选择更适宜的固定液,以达到最佳的荧光染色结果。     

肺组织切片的取材和固定新方法

应用在体气管灌注固定法固定肺组织,探索肺组织切片制作的新方法。在体气管灌注固定法操作简便实用,灌注量容易掌握,固定效果好,切片完整连续,组织结构无人为假象。     

激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA

采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切取肾小球,采用RNA裂解液提取RNA,使用Taqman定量PCR方法,比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量.结果显示:提取沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇固定的冰冻切片的RNA时,2种提取方法和3种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异;但在提取4%多聚甲醛固定冰冻切片时,使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法,且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异.石蜡切片中经激光微切割肾小球的RNA含量与冰冻切片经激光微切割肾小球的RNA含量无明显差异.结果提示:切片的固定方法和RNA的提取方法是影响切片RNA提取量的主要原因.     

冰冻切片与石蜡切片对乳腺肿瘤的诊断价值研究

目的:分析和比较冰冻切片与石蜡切片对乳腺肿瘤的诊断价值。方法:选取480例新鲜乳腺标本,将其制成冰冻切片以及石蜡切片,根据诊断结果进行对比分析,评价乳腺肿瘤的冰冻切片与石蜡切片的对乳腺肿瘤的诊断价值。结果:经石蜡切片诊断乳腺良性肿瘤277例,占57.71%,良性肿瘤中以乳腺纤维瘤诊断居多;经石蜡切片诊断乳腺恶性肿瘤203例,占42.29%,以乳腺浸润性导管癌居多。冰冻切片诊断乳腺良性肿瘤279例,占58.13%;恶性肿瘤195例,占40.62%;延迟诊断6例,占1.25%。以石蜡切片诊断结果为金标准,冰冻切片诊断乳腺良性肿瘤的准确率为98.56%(273/277),诊断恶性肿瘤的准确率为95.07%(193/203),假阳性率为0.72%(2/277),假阴性率为2.96%(6/203),冰冻切片与石蜡切片诊断乳腺肿瘤的结果具有显著一致性,K值为0.965(P0.05)。结论:冰冻切片与石蜡切片诊断乳腺肿瘤的符合率较高,可作为术中快速病理检测的手段,但该种切片方式存在少量延迟诊断,多与术者操作经验有关,故术中应注重制片过程,提高冰冻切片质量。     

碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。     

小鼠眼球标本固定液及制片方法的改进

在小鼠眼球标本石蜡切片制作过程中,由于眼球组织结构的特殊,各部分组织的软硬度不同,各层组织之间连接性差,如用常规10％甲醛液固定,眼球经过固定后用乙醇脱水,各层组织由于收缩率的不同容易造成组织分离,特别是造成视网膜的分离甚至脱落。其他的一些固定液虽然可以保证眼球内部各层组织完整,但是细胞肿胀肥大,细胞着色不均匀,给在显微镜下观察带来困难。因此我们结合眼球的结构特点,总结出一种比较适合固定眼球组织的固定液以及采用适当的取材方式,有助于制作高质量的眼球组织HE片,介绍如下。     

振荡法在组织石蜡制片中的应用

本文成功地把振荡法应用于组织石蜡制片中,采取鸡的各种组织,用常规、加温、振荡三种方法进行固定、脱水、透明和浸蜡,然后常规切片染色试验比较。结果表明,用振荡法从固定到浸蜡仪用2小时20分钟,提高功效10倍以上。具有传统方法所不及的简便、快速、切片薄及质量好等优点,尤其适用于临床病理检验的快速诊断。完全可以代替一般的快速石蜡切片和冰冻切片。     

乳腺恶性肿瘤标本固定方法比较

目的 通过对比3种乳腺根治术标本的取材方式和固定时间,摸索制备高质量乳腺根治术标本切片的最佳固定方法。方法 随机收集上午、下午接收乳腺根治术标本50例,上午每例标本各取一块肿物、腺体组织和淋巴结组织,固定9 h后放入脱水机;下午每例肿物、腺体和淋巴结各取2块,1块固定4 h后放入脱水机,另1块固定28 h后放入脱水机。各组织常规脱水、石蜡包埋、切片后,进行HE染色、E-cadherin酶标法免疫组织化学检测和Her-2荧光原位杂交染色。比较3种固定方法的制片质量,探讨乳腺根治术标本最佳固定方法。结果 固定4 h即开始脱水的肿物和腺体组织的切片不完整发生率显著高于固定9 h和28 h;固定4h和9h的淋巴结切片不完整发生率高于固定28 h;固定4 h、9 h、28 h肿物、腺体HE染色质量无明显差异,但固定9 h与28 h的肿物、腺体E-Cadherin酶标法免疫组织化学正常率高于固定4 h,固定28h淋巴结染色质量高于固定4 h与9 h;固定4 h肿物Her-2荧光原位杂交成功率低于固定9 h与28 h。结论 乳腺根治术标本的肿物与腺体固定9 h后即可放入脱水机,淋巴结则需延长固定时间...     

采用固定液法改进"酵母菌种群数量的变化"实验

"培养液中酵母菌种群数量的变化"是高中生物学重要的探究实验之一,但因其时间跨度大、计数耗时长,实验开展难度较大.为克服上述困难,尝试采用对不同培养时间的酵母菌先进行固定后统一计数的方法,比较用不同细胞固定液或不同处理条件下(无水乙醇、95％乙醇∶冰醋酸=1∶ 1、-20℃冰冻处理)的固定效果.结果表明:选用无水乙醇作为...     

介绍一种效果良好的涡虫固定方法

介绍一种效果良好的涡虫固定方法在涡虫教学制片实践中,我们发现刺激性不同的固定液,会使虫体产生不同的形状。制片厂生产的涡虫装片标本,大都是虫体缩的较短,有失活体时的形象,这是由于固定液不太适合所造成的。我们总结出一种效果良好的固定方法,兹介绍如下：固定...     

病理冷冻切片组织速冻与解冻方法的优化

目的优化病理冷冻切片组织速冻与解冻的方法,以期提高冷冻组织制片的效率和切片质量。方法随机抽取50例术中快速冷冻切片诊断为乳腺浸润性导管癌病例,每例取3块组织,分3组进行速冻处理:不加盖冰锤组,冰冻切片机配置冰锤组,专利冰锤组。分析比较3组的速冻时间和冷冻切片HE染色质量。将冷冻制片后剩余的组织用不同的方法分两组进行解冻处理:固定剂融冰组,流水融冰组;将解冻处理后的组织与新鲜标本直接固定的组织行人表皮因子受体(HER-2)免疫组织化学染色,比较3组在免疫组织化学染色效果方面的差异。结果运用专利冰锤组件速冻,冷冻速度快,运用专利冰锤组件制出的冷冻切片组织结构形态良好,冰晶、褶皱现象少。三组不同方式处理的组织HER-2免疫组织化学染色阳性率一致,但组织新鲜固定组和固定液融冰组在阳性细胞定位和阳性染色强度方面均强于流水融冰组。结论推荐运用专利冰锤组件速冻组织,速度快且冷冻切片质量佳;冷冻制片后剩余组织的解冻处理,推荐在固定液中解冻,边溶化边退冰,最大限度的保存组织抗原以利于后续的工作。     

一种新的生物组织固定方法——微波辐射固定

微波辐射使生物组织均匀产热,灭活酶,可以广泛用于光镜、电镜、常规染色、各种特殊染色及免疫组化研究中组织标本的固定。固定液浸泡微波固定的方法可用于大块组织的快速固定,且染色效果更好。是一种较为理想的固定方法。     

介绍一种改良的油红O脂肪染色法

在日常病理诊断和科研工作中,显示组织内的脂肪常采用油红O进行染色。应用过程中发现,配制该染液所用的丙酮和异丙醇容易挥发,致使染液产生沉淀,染色时易在组织切片上留下红色的结晶,给染色结果的准确判断带来很大影响。为此,我们对染液配方进行了改进,收到较好效果。材料和方法1·标本人或动物的肝组织等,甲醛—钙液固定,冰冻切片,厚10μm。2·改良的油红O染色液油红O 0.5g,50%乙醇100m l。将油红O溶于乙醇内,且不断搅拌至完全溶解即可。配制好的染液置磨口瓶内保存备用。3·染色步骤①切片干燥后入50%乙醇稍洗;②油红O乙醇染液作用8m in…     

组织学石蜡切片制作中固定方法的改良

固定方法是组织学中制作优良石蜡切片的基础。通过对小鼠组织取材方法的改进、不同固定液的对比、固定方法的改良,探索出一种简单且易于本科生实验教学的石蜡切片固定方法。