产谷氨酸棒杆菌B9和T6—13的原生质体融合

棒杆菌Ｂ９和Ｔ６—１３两菌株经ＵＶ变处理得到Ｂ９—２（ＳｍＲ）和Ｔ６—１３—３（ＲｉｆＲ）两菌株,以此两菌株做为出发菌株。将对数前期的培养细胞经青霉素予处理及酶解制备原生质体,用４０％ＰＥＧ６０００为助融剂,进行原生质体融合。用间接法检出具有Ｓｍ、Ｒｉｆ抗性的融合子。融合频率为６．５５×１０－６－１．６４×１０－５,融合子双抗性稳定,产谷氨酸,经摇瓶实验筛选出一株产谷氨酸明显高于亲本的融合子ｆｕ３６。     

糖化酶生产工艺的改进

在前面研究的基础上,仍采用黑曲霉突变株ＷＭＣ－１５为产酶菌株,对糖化生产和提取工艺进行了较大的改进,提高了菌株的产酶缩短了发酵时间,提高回收率,大幅度降离糖化酶的生产成本,按最佳的培养基配方和发酵工艺条件,采用突变株ＷＭＣ－１５仅发酵９６小时左右,酶活力可达２５,０００ｕ／ｍｌ以上,对提高我国的糖化酶活力及设备利用率都具有现实意义。     

黑曲霉变异株UV-11-48的选育及产糖化酶条件的研究

以黑曲霉(Aspergillus niger)变异株UV-11为出发菌株,经亚硝基胍多次诱变,获得一株比亲株产糖化酶活力提高30%左右的变异株UV-11-48。对UV-11-48菌株进行了发酵条件及酶系组成等的研究。固体曲生产性试验,种曲糖化酶活力最高达12240u/g,麸曲酶活力平均8000—9000u/g,最高达11700u/g,在酿酒工业固体曲生产中,取得明显经济效益。     

新一代糖化酶高产菌株的选育及其工业应用

【目的】建立对糖化酶生产菌种黑曲霉随机突变文库进行筛选的方法,以获得糖化酶酶活提高的突变菌株。【方法】以一株可产糖化酶的黑曲霉菌株Aspergillus niger X1为出发菌株,经硫酸二乙酯诱变获得突变文库,采用葡萄糖的结构类似物——2-脱氧葡萄糖进行筛选,并在筛选过程中逐渐提高2-脱氧葡萄糖浓度,定向选育具有2-脱氧葡萄糖抗性、高产糖化酶的突变株。【结果】获得的高产突变菌株DG36摇瓶发酵糖化酶产量比出发菌株A.niger X1提高22.2%–33.8%,经工业水平50 m~3罐发酵测试,突变株DG36发酵128 h糖化酶活可达49094 U/m L,在相同发酵时间内,其酶活较出发菌株A.niger X1提高32.8%,发酵时间缩短16.9%。【结论】本研究开发了一种以2-脱氧葡萄糖为抗性标记选育高产糖化酶突变株的方法,所得突变株DG36遗传性状稳定,与出发菌相比具有菌丝粗壮、产酶期提前、糖化酶活高、发酵时间短、有利于发酵后处理的优点。     

L－赖氨酸快速发酵新菌种及工艺研究

以我室选育的赖氨酸生产菌Ｓ－２１－２４为出发菌株,经硫酸二乙酯（ＤＥＳ）和紫外线（Ｕ．Ｖ．）的复合处理,选育到一株代谢速率高,发酵周期短的新菌株ＦＴＳ－１。对该菌的发酵条件作了研究,选择了最佳培养条件,该菌在５Ｌ发酵罐中发酵４８小时产酸８０ｇ／Ｌ以上,７２小时产酸可达１１０ｇ／Ｌ。     

L－赖氨酸快速发酵新菌种及工艺研究

以我室选育的赖氨酸生产菌Ｓ－２１－２４为出发菌株,经硫酸二乙酯（ＤＥＳ）和紫外线（Ｕ．Ｖ．）的复合处理,选育到一株代谢速率高,发酵周期短的新菌株ＦＴＳ－１。对该菌的发酵条件作了研究,选择了最佳培养条件,该菌在５Ｌ发酵罐中发酵４８小时产酸８０ｇ／Ｌ以上,７２小时产酸可达１１０ｇ／Ｌ。     

欧文氏菌和棒杆菌的属间融合研究*

研究了用原生质体融合技术获得欧文氏菌和棒杆菌的融合细胞。串联发酵Ｄ－葡萄糖产生２－酮基－Ｌ－古龙酸的第一步发酵菌株欧文氏菌ＳＣＢ２４７经０．８ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解０．５ｈ后,原生质体的形成率和再生率分别为９９．８％和２７．８％。第二步发酵菌株棒杆菌ＳＣＢ３０５８经预处理后由１．３ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解２ｈ,原生质体的形成率和再生率分别为９９．５％和５６．３％。用携带氨苄青霉素抗性标记的ＳＣＢ２４７和经热灭活的ＳＣＢ３０５８为亲本,在４０％ＰＥＧ６０００和０．２ｍｏｌ／Ｌ新生磷酸钙等适宜条件下融合,融合频率为３．６×１０~(－６)。在非选择和选择培养基上连续传代十几次后,对融合子的单菌形态、染色结果、菌落形态、色泽、总蛋白量、同工酶、发酵性能等方面与亲本进行了比较。结果表明,融合子确系棒杆菌和欧文氏菌的融合细胞。摇瓶发酵结果显示,所得的３８株稳定的融合子中约４０％能转化葡萄糖为维生素Ｃ前体２－酮基－Ｌ－古龙酸。     

雅致枝霉高产γ-亚麻酸突变株的选育

以雅致枝霉ＡＳ３．３４５６为出发菌株发酵生产γ－亚麻酸,经过２次５－氟尿嘧啶、紫外线、氯化锂复合诱变处理,得到变异株ＴＥ７－１５,其菌体生物量提高了１０．１２％,产脂率提高了５８．８８％,γ－亚麻酸产量提高了１１７．２８％,达到１０７９．９５ｍｇ／Ｌ,已满足工业化生产的要求。     

PGDH^L生化突变型谷氨酸生产菌株选育的生化模式

以Ｔｂｍ－３（ｉｃｌ＾－,异柠檬酸裂解酶活力的生化突变株）为出发菌株,经紫外一诱变,通过依据生人代谢所设计的选择培养基（Ｌ－阿拉伯糖平板与Ｄ－葡萄糖酸钠平板）对接的筛选方法,获得磷酸葡萄糖酸脱氢酶（ＰＧＤＨ,Ｅ．Ｃ．４．２．１．１２）忖突变型的生化突变型菌株Ｔｂｍ３．１８,该菌株经摇瓶发酵试验显示,比出发菌株Ｔｂｍ－３提高产酸率８．９％和转化率８．１％,表明ｐｇｄｈ或ｐｇｄｈ生在变型菌株的选育,对     

复合诱变黑曲霉选育β—葡萄糖苷酶高产菌株

对黑曲霉原生质体进行紫外、ＬｉＣｌ复合诱变,观察诱变后原生质体再生菌落,发现了孢子色变异较大的菌株,且其变化与酶产量相关。经发酵筛选,获得β－葡萄糖苷酶活较高菌株,其酶活由出发菌株的１０ｕ／ｍｌ提高到１４．７ｕ／ｍｌ。再对高产突变株进行氮离子注入,酶活又提高２０％（达１７ｕ／ｍｌ）。     

黑曲霉变异株A.S.3.4309产葡萄糖淀粉酶的研究 1.发酵条件的研究

关于葡萄糖淀粉酶(简称糖化酶)的研究,国外近年来发展较快,我们为更好地发挥菌株的产酶潜力,研究了黑曲霉变异株A.S.3.4309的发酵条件。     

肌苷产生菌缺失核苷水解酶活性突变株选育及其发酵生产试验

以枯草芽孢杆菌ＪＳＩＭ－１０１９为出发菌株,经物理、化学诱变剂连续处理,获得一株缺失核苷水解酶活性的突变株ＪＳＩＭ－Ｂ－１９８。该突变株不能降解肌苷,应用于发酵生产中,肌苷产量显著增加。在２００００升发酵罐中,连续１０罐批,平均产肌苷８．３８ｇ／Ｌ,对糖转化率２１．９８％,发酵周期５０ｈ￣６０ｈ,该菌株遗传性能稳定,已在工业生产中应用。     

荧光假单胞菌抗噬菌体菌株的选育

本实验从荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＡＳ—３菌株的不正常发酵液中分离到一种噬菌体,将其命名为ＰＦＡＳ。ＡＳ—３菌株能利用葡萄糖发酵产生Ｄ－异维生素Ｃ的前体物质２－酮基－Ｄ－葡萄糖酸。电镜观察表明ＰＦＡＳ噬菌体呈蝌蚪形,具有直径为６６ｎｍ的六角形头部及长１１７ｎｍ的尾部。通过紫外线诱变及自然选育两种途径,配合简便有效的初筛方法,经多次分离、纯化、复筛最终在摇并发酵试验中获得６株产量稳定地高于对照敏感菌的抗噬菌体菌株,可望用于生产。     

欧文氏菌和棒杆菌的属间隔合研究

研究了用原生质体融合技术获得欧文氏菌和棒杆菌的融合细胞,串联发酵Ｄ－葡萄糖产生２－酮基－Ｌ－古龙酸的第一步发酵菌株欧文氏菌ＳＣＢ２４７经０．８ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解０．５ｈ后,原生质体的形成率和再生率分别为９９．８％和２７．８％。第二步发酵菌株棒杆菌ＳＣＢ３０５８经预处理后由１．３ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解２ｈ,原生质体的形成率和再生率分别为９９．５％和５６．３％,用携带氨苄青霉素抗性标记的ＳＣＢ２４７和     

妥布霉素产生菌诱变育种的研究

本实验以妥布霉素产生菌黑暗链霉菌（Ｓ．ｔｅｎｅｂｒａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ１７９２０为出发菌株,经紫外线处理,获得一株产量较高且稳定的菌株ＵＶ－５９,其抗生素效价比原株提高９２．３％对ＵＶ＿５９菌株进行高温处理,得到一株Ｔ－５４１菌株,所产抗生素只有两个组分,比原出发株减少一个组份,不再含有出发株产生的氨甲酸卡那霉素;再对Ｔ－５４１菌株进行原生质体制备,分别用紫外线和紫外线加氯化锂以及亚硝基胍诱变处理原生质体,获得四株高产菌株,效价比原株提高１１５～１５０％,且稳定。此外还研究了变异菌株的形态与产量的关系。     

高产糖化酶菌株的筛选与诱变育种

从土壤及霉变淀粉质材料等样品中分离获得到产糖化酶活性较高的菌株L-3,经鉴定为一种紫红曲霉;通过紫外线和硫酸二乙酯分别进行诱变,得到4株性能良好的糖化酶变异株,其中菌株7性能最好,命名为M.F7。对该菌株进行发酵性能测试,结果表明该菌株糖化酶活力比原菌株提高了20.8%;经过继代培养,证明其性状能稳定遗传。通过正交试验,确定菌株7最佳培养温度为30℃,最适pH值为5.5～6.0,最适培养时间为5 d。     

黑曲霉糖化酶基因表达调控的研究：I.高产及低产菌株糖化酶表达…

对黑曲霉高产菌株Ｔ２１和原始菌株３．７９５糖化酶的基因表达从菌体生长、酶形成动力学、ｇｌａＡ基因拷贝数、糖化酶ｍＲＮＡ含量及其稳定性等多个方面进行了分析和比较。Ｔ２１和３．７９５糖化酶的大量产生均自菌体生长的静止期开始。培养７２ｈ捂得的菌体浓度相同,但Ｔ２１产生的糖化酶量为３．７９５的１０￣１７倍,说明糖化酶产量的差异不是因生物量或酶起始合成期不同引起的,而是由于细胞内酶表达量不同引起的。Ｎｏｒｔ     

短杆菌变异株FMP92814产苯丙氨酸的研究

经过多次的人工诱变筛选,获得一株来自乳糖发酵短杆菌ＡＴＣＣ１３８６９的变异株ＦＭＰ９２８１４。它对多种苯丙氨酸结构类似物具有抗性,并兼有酪氨酸营养缺陷型特性。我们对ＦＭＰ９２８１４菌株的发酵生产苯丙氨酸条件进行了研究。在５Ｌ台式小罐的发酵试验中,该菌株的苯丙氨酸产量可达２５．２ｇ／Ｌ,糖酸转化率１６．８％．。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶羟基化酶组分…

从Ｍｅｔｈ ｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌株中经ＤＮＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣｌ－６Ｂ阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ３００凝胶层析分离出纯化出甲烷加氧酶羟基酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９０％,分子量为２４０ｋＤ,纯化们数为３．９,比活为２２５ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明,羟基化酶由三个亚基组成,亚基分子量为５６、４３、２７ｋＤ．ＩＣＰＡＥＳ测定羟基化酶的Ｆｅ     

复合诱变黑曲霉选育β-葡萄糖苷酶高产菌株

对黑曲霉原生质体进行紫外、ＬｉＣｌ复合诱变,观察诱变后原生质体再生菌落,发现了抱子颜色变异较大的菌株,且其变化与酶产量相关。经发酵筛选,获得卜葡萄糖昔酶活较高菌株,其酶活由出发菌株的１０ｕ／ｍｌ提高到１４．７ｕ／ｍｌ。再对高产突变株进行氮离子注入,酶活又提高２０％（达１７ｕ／ｍｌ）。