成功克隆人催产素受体的cDNA

大阪大学医学部妇产科教研室教授谷泽修、助手木村正等与大阪大学微生物病研究所分子遗传系教授兼东京大学医学部生化学第1教研室教授冈山博人、大阪生命科学研究所神经科学研究部门副部长森宪作等共同克隆了人催产素受体(OTR)的cDNA。将受体用于筛选,开发防止早产的药。罗特制药公司正在用开发这种受体的筛选法。还将成为从分子生物学探讨分娩机制的线索。木村在千叶县召开的日本产科妇女科学会总会上发表了这项成果。木村等与冈山合作从分娩之后因子宫破裂而摘除的子宫肌细胞中抽提出mRNA,建立了cDNA库。     

阿片受体的研究进展

阿片及其衍生物在神经系统中具有很强的镇痛作用,对阿片受体的研究已有20多年的历史。20世纪70年代发现了阿片受体的存在并先后发现了脑啡肽、β-内啡肽和强啡肽等阿片肽,随后发现了孤啡肽。如年代3种阿片受体的基因均已克隆成功,氨基酸序列表明它们均属G蛋白偶联受体,为7螺旋跨膜受体家族的成员,具有很高的同源性,功能包括介导腺苷酸环化酶的抑制作用以及一些离子通道的激活和抑制作用等。阿片受体基因的克隆将有利于新型临床药物的开发以及耐受和药物成瘾性分子基础的研究。目前阿片受体基因敲除、计算机结构模拟分析以及寻找新型阿片受体基因的研究均在深入进行。     

PGI2-PPARδ信号传导途径与哺乳动物的胚胎着床

前列腺素 (PGs)在胚泡着床和子宫的蜕膜化过程中起着重要的调节作用 ,前列环素 (PGI2 )是着床位点表达量最高的PGs .前列环素受体 (IP)和过氧化物酶体增殖因子活化受体 (PPARs)分别是PGI2 的细胞表面G蛋白偶联的受体和细胞核内受体 ,IP在胚泡着床位点不表达或检测不到 ,而PPARδ表达丰富 ,RXRs (PPARs的异二聚体伴侣 )及相应的PPARδ RXRα复合物、PGI2 合成酶 (COX 2 /PGIS)也在着床位点表达丰富 ,因此推测PGI2 在胚泡着床中的作用可能是通过PPARδ受体介导的 .利用PGI2 类似物 (cPGI)和PPARδ特异性类似物能够恢复COX 2基因敲除小鼠的胚泡着床和蜕膜化 .总之 ,PGI2 通过PPARδ在胚泡着床和蜕膜化过程中起着重要的调节作用     

人白细胞介素-2功能性受体在小鼠细胞可重建

白细胞介素-2(IL-2)与其受体相互作用,可促进已活化的T 细胞生长,但只当IL-2与高亲和性受体结合才能释放与生长相关的传导信号。作者从正常人用合成的寡聚核苷酸探针筛选出编码IL-2受体特异的基因克隆。筛选出的数个阳性克隆中,P~(IL-2R)-6克隆经分析发现能编码成人T 细胞白血病细胞表达的IL-2受体的全部序列。作者为了使IL-2受体cDNA 在哺乳细胞中稳定表达,构建了一个P~(SVIL-2R)-3质粒,并     

日克隆叶绿素分解基因首获成功

《日经生物技术》１９９９年４月１２日第１１页报道：东京工业大学生命理工学部教授高宫建一郎等小组首次成功地克隆出叶绿素分解酶。这种基因能抑制植物绿化和老化机构。这次克隆的基因是被称为叶绿素分解第一阶段机能的酶—叶绿素酶。今后利用反义技术等如果能抑制叶绿素分解,也许能开发出常绿性植物和由于光合作用时间长而增产的植物。叶绿素酶是１９１０年发现的,但是目前还没有克隆出该基因。成果的详细情况于３月３０日在仙台市召开的日本植物生理学会上发表。以藜科一年生杂草—藜作为提取叶绿素酶的材料。酶纯化后确定了部分氨基…     

粘附蛋白与内皮细胞

RGD是粘附蛋白与细胞接合的活性部分之一。血小板精白蛋Ⅱb/Ⅲa是识别RGD的受体家族,可以与RGD结合。纤维蛋白(原)能特异地刺激内皮细胞合成和分泌PGI2及t-PA。     

透明体蛋白的克隆

兵库医科大学妇产科教授礒岛浩二、助教授香山晋三等成功地克隆了作为人避孕疫苗开发的猪透明体蛋白ZP4。目前难以大量生产的透明体蛋白是简单地从重组体入手的。礒岛等于11月20日在名古屋召开的日本不孕学会上发表了这项成果。抗卵抗体有阻碍受精的作用。得知在卵抗原中透明体抗原的免疫原性特别强。因此,正在进行作为避孕疫苗开发透明体蛋白的尝试。但是,透明体蛋白都是糖蛋白,抗原决定基、糖链部分多,而难以大量生产抗原。磷岛等看准了ZP4糖链小这一特性,制作单克隆抗体时能获得与去除糖链的ZP4反应的抗体。     

为促进芦笋形成花芽以区分性别而合成了阿特拉津衍生物

日本东北大学农学研究所教授龟谷寿昭和京都大学农学部助教授岩村淑合成了能促进芦笋实生苗形成花芽,而并不妨碍生长的除草剂阿特拉津的衍生物。芦笋雄株比雌株产量高,经济价值大。为此,必需优先地只栽植雄株。但性别是要栽种后经过2～3年产生花芽后才能知道的。要是能在实生苗时即诱导出花芽,就可以方便地区分性别。龟谷等1986年发现阿特拉津和等两种除草剂能诱导芦笋形成花芽。但是,在形成花芽后植株就枯死了。因此,以岩村为中心,筛选了能保持花芽形成能力而没有枯杀作     

δ阿片肽受体分子药理学

目前已成功地克隆出δ、μ、κ阿片受体 ,均属Ｇ蛋白偶联受体 ,有 6 5 %同源序列 ,仅 35 %序列决定其特异性。阿片受体最大的同源区是跨膜区 (ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ,ＴＭ)和细胞内环 ,变化最大的区域在细胞外环及其氨基、羧基末端。近年来应用反义核酸技术、基因剔除、构建嵌合受体、基因定位突变、截短或缺失氨基酸突变等方法对阿片受体的结构和功能的研究取得了新进展。1 .内源性与克隆δ阿片受体δ阿片受体广泛分布于脑内 ,但在不同的脑区其分布密度不同。体内药理学实验证明 ,δ阿片受体有两种亚型δ1和δ2 [1] ,但是其亚型没被…     

G蛋白偶联受体的信号通路多样性及药物开发

正G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)是人类基因组编码的最大膜蛋白家族,包含视紫红质样受体、分泌素受体、谷氨酸类受体、黏附类受体和Frizzled/Taste2受体等5个大类共800多个受体成员[1～5]. GPCR受体家族的概念是由杜克大学的Lefkowitz教授和斯坦福大学的Kobilka在1986年首次提出. Lefkowitz与Kobilka等人[6,7]在克隆β肾上腺素受体后,将其序列与视紫红质进行比较,发现二者具有相似的7次跨膜拓扑结构,他们随即提出所有7次跨膜受体都可能具有偶联G蛋白能力的假说.目前认为,GPCR的共同结构特点是具有保守的7次跨膜α螺旋,通过3个胞内环和3个胞外环相连,其N-末端和C-末端     

糖皮质激素受体的结构和功能

近年来已克隆出人、大鼠和小鼠糖皮质激素受体的cDNA,并利用定点突变等技术分析了受体结构和功能的关系。还利用小鼠乳腺瘤病毒、人金属硫蛋白II_A基因等详细研究了受体和DNA的相互作用,对糖皮质激素的诱导蛋白也进行了深入研究。     

噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选

淋巴毒素 (lymphotoxin , LT) 通过 TNFR1 受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性 . 对 LT 的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素 (rhLT) R46 , S106 , L130 三点随机突变组合文库和 S106 ～ F110 区域随机突变体库 . 噬菌体库与固相化 TNFR1 受体进行亲和筛选,富集了能与 TNFR1 受体结合的 rhLT 突变体 . 随机挑选 20 个单克隆噬菌体进行 ELISA 受体结合鉴定,其中 80 ％的克隆与 TNFR1 受体特异性结合,有 4 个克隆与 TNFR1 受体的结合能力高于野生型序列的 rhLT. 将这 4 个结合力高的突变体克隆于 pET32a(+) 载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与 TNFR1 受体的结合活性和对 L929 细胞的杀伤活性,发现 3 个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中 C199 克隆与 TNFR1 的结合活性比野生型序列的 rhLT 提高了近 30 ％,且其对 L929 细胞的杀伤活性提高了近 90%. 应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具 .     

克隆了激活激素前体的酶

筑波大学应用生物化学系教授村上和雄和生物科学系讲师中山和久等小组从小鼠下垂体细胞AxT-20株克隆出脑下垂体特异表达的加工激素前体的酶、PC_3。如果合成这种酶的阻碍剂和诱导剂,就能开发出与激素有关疾病的特异治疗药。一般说来,激素以前体的方式从基因中转译过来。在输往细胞的过程中,经特异于碱性氨基酸对(Lys-Arg、Arg-Arg)的蛋白酶降解,成为活性型激素。已知酵母中有这种加工酶(kex2),最近发现人体中有与kex2非常相同的酶。但是,这种新酶分布在体内的很多细胞内。村上用按触媒部分氨基酸序列制成的DNA探针克隆了PC3。提取cDNA的AxT-20株细胞有降解多种激     

酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B相互作用的蛋白质

应用酵母双杂交技术研究与人孕酮受体B（hPRB）发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用的调控机制。应用酵母双杂交系统3,以hPRB不同结构域为诱饵,筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用X—α—Gal等实验提供的信息,筛除假阳性克隆。最终以AF1-DBD结构域作为诱饵最终筛出了1个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这个克隆所编码的蛋白为PIAS3（活化的STAT3的蛋白抑制剂）。结果表明,孕激素受体可以和PIAS3发生相互作用,它们的相互作用有可能参与乳腺癌的生长调控。     

克隆破骨细胞特异的人组织蛋白酶K

明海大学口腔解剖学教授久米川正好、前助手手(?)健一和日本汽巴嘉基国际研究所生物有机化学研究部小组负责人小久保利雄、稻冈哲也等小组克隆了新的组织蛋白(半胱氨酸蛋白分解酶)——人组织蛋白酶K。上月将DNA序列输入到欧洲分子生物学研究所(EMBL)的数据库。组织蛋白酶K在破骨细胞中特异地表达,其表达量有可能在进行骨吸收的酶中是最高的。如果能开发特异性高的抑制剂,就能发展成骨质疏松症的治疗药。     

猪β2-AR基因重组质粒的快速筛选

为建立一种高效快速鉴定重组质粒的实验方法,将猪β2-肾上腺素能受体（β2-AR）基因与pET-32C重组,构建β2-AR基因表达载体pET32CAR,以T7启动子引物和猪β2-肾上腺素能受体基因特异性引物为PCR引物,挑取重组质粒转化单菌落直接进行PCR,产物经电泳发现,5个候选克隆中有3个克隆扩增出了一条约2kb的特异性条带,并且插入方向正确,随机选取其中1个克隆用限制性酶切鉴定以及DNA测序验证PCR筛选的正确性,研究结果表明;在采用PCR方法对重组克隆进行鉴定时,可以直接使用细菌菌落参与反应,而无须提取克隆的DNA,与传统的实验方法相比,筛选的时间缩短至3-4h,大大提高了重组DNA的筛选效率。     

β3—肾上腺素能受体研究的进展

克隆成功了人,大鼠和小鼠的β３－肾上素能受体。β３ＡＲ属于βＡＲ的亚型之一;但它的分布和药理学作用与已知的两种βＡＲ有所不同。该受体的一个错义突变可能与肥胖病和糖尿病的发生与发展有关。     

短肽库中VEGF受体拮抗剂的筛选及生物学活性鉴定

为获得可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (s VEGFR,soluble VEGF receptor)的拮抗剂 ,以固相化可溶性 VEGF受体 s Flt- 1和 s KDR通过生物淘选筛选噬菌体十二肽库 .采用 ELISA及竞争性 ELISA筛选阳性克隆 ,12 5I- VEGF竞争性放射免疫吸附实验进一步鉴定阳性克隆的体外结合活性 .经过 3～ 4轮生物淘选的短肽库有明显富集 .初筛后约 3%的噬菌体克隆可同时结合相应的可溶性受体及人脐静脉内皮细胞 .其中 6个克隆与内皮细胞的结合 ,可以部分地被变性复性处理的原核表达血管内皮细胞生长因子 (VEGF)竞争抑制 .4个噬菌体克隆可竞争性抑制 12 5I- VEGF与可溶性受体的体外结合反应 .两个 KDR阳性克隆 K2 37与 K93可在体外抑制内皮细胞的增殖 .克隆K2 37与 F90可抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管形成 .阳性克隆可作为血管内皮细胞生长因子受体拮抗剂 ,具有良好的应用前景 .     

第一个阿片受体克隆成功

谢国玺博士最近从人胎盘中克隆出一个具有阿片结合活性的受体,这是第一个克隆成功的阿片受体。阿片受体的存在最早是于70年代初基于药理学实验提出的,以后许多实验室又对阿片受体的生化特性做了大量的研究,并纯化出一些不同分子量的阿片受体,进一步证实了阿片受体的存在。尽管这些实验室一直在致力于阿片受体的     

利用IVF废弃胚胎为核移植受体构建人体细胞克隆胚胎

目的：探讨利用IVF废弃胚胎构建人体细胞克隆胚胎的发育潜能及其在人治疗性克隆应用的可能性。方法：收集2008年7-12月在广州医学院第三附属医院进行体外受精-胚胎移植周期中的多精受精胚胎和MII期体外受精失败卵母细胞,运用显微操作技术构建人体细胞克隆胚胎,观察胚胎发育情况。结果：多精受精胚胎为核移植受体的克隆胚胎能够发育到8-细胞期,受精失败MII期卵母细胞为核移植受体的克隆胚胎能够激活,但不能够卵裂。两种IVF废弃的胚胎构建的人体细胞克隆胚胎在去核成功率,注核成功率上无显著差异（P＆gt;0.05）,但卵裂率和8细胞率上具有显著差异（P＆lt;0.05）。结论：多精受精胚胎比MII期体外受精失败卵母细胞更适合作为人核移植受体细胞。