不同提取工艺对家蝇幼虫蛋白粗提液抗菌活性的影响

利用不同条件提取诱导过的家蝇Musca domestica 3龄幼虫的总蛋白,并用平板扩散法测定所得蛋白粗提液的抗菌活性。结果表明,收集幼虫时的处死温度、沸水浴时间及提取液的pH值均对家蝇幼虫粗提液的抗菌活性有明显的影响。     

家蝇幼虫营养保健果冻的研制

家蝇Musca domestica L幼虫营养丰富,体内含有多种具有特异生物活性物质,有很好的开发利用价值。以家蝇幼虫为原料,运用正交试验设计对家蝇幼虫营养保健果冻的加工工艺进行研究。结果表明:35%的家蝇幼虫粗提液,15%的白砂糖,0.18%的柠檬酸和1.4%的卡拉胶的工艺参数,可生产具有良好感官和食用品质的家蝇幼虫营养保健果冻;家蝇幼虫粗提液的护色剂使用0.02%抗坏血酸与0.02%柠檬酸,果冻防腐剂使用0.04%山梨酸钾。     

储藏时间对大豆分离蛋白结构及凝胶性质的影响

探究了储藏期下大豆分离蛋白凝胶性质的变化规律,对不同储藏时间的大豆蛋白分别进行了羰基含量、表面疏水性、凝胶质构性质的测定,并采用红外光谱对大豆蛋白二级结构进行了测定。结果表明：随着储藏时间的延长,大豆蛋白的羰基含量逐渐上升,表面疏水性逐渐下降,蛋白二级结构含量改变,大豆蛋白凝胶强度和凝胶硬度整体呈下降趋势,这表明储藏期内大豆蛋白发生了氧化反应,导致大豆蛋白结构发生改变,最终使其凝胶性质下降。     

人参皂苷粗提液对西洋参早期生长的化感效应

以西洋参幼苗为受体,采用玻璃砂培养方法研究不同浓度(25、50、100 mg·L-1)的人参皂苷粗提液对西洋参早期生长及生理代谢的影响,并用透射电镜观察幼苗根尖在处理过程中亚显微结构的变化.结果发现:(1)在不同浓度人参皂苷粗提液处理下,西洋参幼苗早期生长的各项生理指标均表现出不同程度的低促高抑现象.(2)各处理对西洋参幼根及幼苗的生物量无显著影响,但中高浓度处理对根长的抑制作用明显大于苗高.(3)中高浓度均对根系活力具有显著抑制作用(P<0.05);在高浓度下幼苗叶片中超氧阴离子自由基(O?2-)的产生速率和丙二醛(MDA)含量均显著增加,叶片及幼根中相对电导率也有明显增加,而叶片可溶性蛋白和叶绿素(Chl)合成受到轻微的促进作用,Chl含量随处理时间的延长虽呈逐渐下降趋势,但仍高于对照.(4)高浓度处理的幼苗根尖细胞的核膜膨胀、核仁变形,液泡膜解体,不能完成正常的生命活动.研究表明,不同浓度的人参皂苷粗提液对西洋参早期生长具有化感效应,且对受体地下部分的影响明显大于地上部分.     

杠柳根皮乙醇粗提液对菜青虫的拒食作用及其防治效果

测定了杠柳 (PeriplocasepiumBunge .)其根皮乙醇粗提液对菜青虫Pierisrapae (L .)的拒食活性 ,并进行了乙醇粗取液及其与氯氰菊酯混用防治菜青虫药效试验。生测结果表明 ,乙醇粗提液对菜青虫 4龄和 5龄幼虫具有较强的拒食活性 ,2 4h拒食中浓度分别为 1 3 2 0 8mg L和 1 1 96 3mg L ,且对拒食后试虫生长发育有严重的影响。药效试验结果显示 ,乙醇粗提液 1 0 0倍液及其混配制剂 1 0 0 0倍液对菜青虫具有较好的防治效果。温室处理后 5d ,杠柳乙醇粗提液 1 0 0倍液、混剂 1 0 0 0倍液的防虫效果与 1 0 %氯氰菊酯 1 0 0 0倍液效果相当 ;田间处理后 5d ,杠柳粗提液防虫效果虽然较差 ,但保叶效果仍达 60 %以上 ,而混剂的防虫和保叶效果均与氯氰菊酯效果相当。     

枯萎菌毒素粗提液对4种陆地棉外植体愈伤组织诱导率的影响

将培养5d的4种陆地棉栽培品种军棉1号,泗棉2号,2234及中棉12号无菌苗,取其根,下胚轴及子叶接种在含不同浓度枯萎菌毒素粗提液的培养基上,每隔3d观察统计其成活率,统计至33d。结果表明：陆地棉外植体愈伤组织的诱导率与枯萎菌毒素浓度呈负相关,而不同的外植体对枯萎菌毒素浓度的敏感程度有所差异。     

家蝇幼虫体内一种抗菌蛋白的分离纯化

30%H2O2诱导家蝇幼虫90min,继续饲喂24h后利用硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25 和Sephadex G-75两步凝胶过滤、CM-Sepharose Fast Flow弱阳离子交换的纯化方法,得到一种电泳纯的抗菌蛋白,经过VDS凝胶扫描得到其分子量为28kDa,命名为AP28。抑菌活性分析表明,AP28对实验中涉及的大多数革兰氏阳性菌和阴性菌都有明显的抑制作用。     

蛋白酪氨酸激酶NOK／STYK1胞内区的表达与纯化

目的：酪氨酸蛋白激酶NOK／STYKl具有很强的促肿瘤形成和转移能力,被认为是很有前途的肿瘤治疗靶点。由于NOK含有一个跨膜区,且富含疏水性氨基酸,其表达和纯化非常困难,直接影响了对其功能及相关分子机理的深入研究。本研究目的是获得可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白ANOK（AA：49—422）,为后续抗体的制备和功能研究奠定重要基础。方法：含有△NOK基因的原核表达载体,转入E-coliBL21中,IPTG诱导蛋白表达,通过亲和层析获得可溶的△NOK融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切后,凝胶过滤层析分离标签蛋白获得z~NOK蛋白。同时,我们还通过Bac-to-Bac系统获得含有ANOK基因的杆状病毒,感染sO细胞,尝试在真核细胞中表达目的蛋白。结果：通过在sf9昆虫细胞和大肠杆菌表达系统中盐浓度等各种条件的摸索,首次获得了可溶的且纯度较高的NOK胞内区融合蛋白（ANOK—GST）和一定量去除标签的ANOK蛋白。本研究中与大肠杆菌相比,昆虫细胞并不适合△NOK的纯化。结论：我们建立了一套优化的NOK蛋白表达和纯化体系,从而为后续抗体制备和各种体内外生化实验等功能研究奠定基础,为研究NOK在肿瘤中的作用和药物筛选创造条件。同时丰富了整个RTKs家族作用机制的探索,进一步促进了以RTKs为靶点的治疗手段在临床上的应用。     

凝胶过滤与镍柱亲和纯化金葡菌a-溶血素重组蛋白的生物学特性比较

以在宿主菌株BL21(DE3)中成功表达的重组金黄色葡萄球菌a-溶血素蛋白为研究对象, 分析比较通过凝胶过滤层析(Gel filtration chromatography)和镍柱亲和层析纯化试剂盒(Ni-NTA spin columns)纯化所得到的重组蛋白的蛋白含量和生物特性方面的差异。SDS-PAGE分析检测纯化产物, Bradford法测定蛋白含量, 兔红细胞测定半数溶血效价。结果显示这2种方法得到的纯化产物在53 kD处均呈现单一清晰带, 达电泳级纯度。与此同时, 凝胶过滤对目的蛋白的纯化率为14.04%, 蛋白含量为0.337 mg/mL, 溶血活性为1519 HU/mg; 镍柱亲和层析的纯化率为17.5%, 蛋白含量为0.35 mg/mL, 溶血活性为1463 HU/mg。由此可见, 凝胶过滤得到的纯化产物在蛋白含量和蛋白活性方面丝毫不亚于镍柱亲和层析纯化试剂盒。     

从野皂荚提胶后的副产物中制备分离蛋白

采用碱提酸沉法从野皂荚提胶后的副产物中制备分离蛋白,研究了制备工艺条件对分离蛋白得率的影响。结果表明:当料液比1∶10~1∶12(m/V)、提取液pH8.0~9.0、浸提温度45~50℃、浸提两次、每次浸提45 m in时,分离蛋白得率可达78.45%。研究结果可为野皂荚提胶副产物中蛋白的综合利用奠定了基础。     

A single-step gel-filtration method for the isolation of procollagens from cell culture conditioned medium

Procollagens are the major proteins secreted into the conditioned medium of cultured arterial smooth muscle cells. Methods for the isolation and quantification of these macromolecules have traditionally required preliminary salt precipitation of procollagens from the conditioned medium followed by cellulose ion-exchange chromatography. The method described here exploits the elongated conformation of soluble procollagens and allows the direct recovery of procollagens from culture medium by a single gel-filtration chromatographic step under nondissociating conditions. Procollagens are isolated in high yield and show minimal processing by procollagen N- or C-terminal peptidase activity. This method results in rapid recovery of highly purified procollagens, free of most proteoglycans of other products of smooth muscle cell metabolism.     

家蝇幼虫抗菌相关蛋白/多肽的诱导及抗菌活性分析

对家蝇Musca domestica 3龄幼虫进行针刺、带菌针刺、热激和超声4种处理,并于处理后不同时间分别收集提取家蝇幼虫体内耐热总蛋白,比浊法测定其抗菌活性,经逐步回归分析确定抗菌相关蛋白/多肽。结果表明,4种处理均能诱导家蝇幼虫产生抗菌物质,其中表观分子量为22 kD的蛋白对藤黄微球菌和大肠杆菌均有抗菌作用,50 kD,13 kD,26 kD,7 kD的蛋白抗菌活性具有专一性。还发现一种37 kD的蛋白对抗菌活性有负作用,推测它可能是促进细胞生长的物质。     

不同细菌对家蝇幼虫抗菌蛋白/肽的诱导效应

利用抑菌圈测量法和毛细管电泳研究、比较不同细菌对家蝇Musca domesticaL.幼虫抗菌蛋白/肽的诱导效应。结果表明,家蝇幼虫受细菌诱导后抗菌活性比对照都有不同程度的增加,同时不同细菌诱导表达样品对于相应的诱导菌均表现很高的抗菌活性。毛细管电泳图谱表明鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium50013诱导后抗菌蛋白/肽表达强度增加了50倍,其它细菌诱导后抗菌蛋白/肽表达强度增加了1～40倍。与G+细菌相比,G-细菌具有更强的诱导效应。结论:家蝇幼虫对不同的细菌刺激有特异性反应,即不同细菌诱导抗菌蛋白/肽的强度、种类和数量都不一致。     

Plate height determination for gradient elution chromatography of proteins

A method for determining the plate height HETP from the elution curve obtained by the linear gradient elution (LGE) ion-exchange chromatography (IEC) of proteins is presented. The method was developed on the basis of the numerical solutions of a chromatography model which considers the zone sharpening and the distribution coefficient as a function of the salt concentration. The plate height HETP is determined from the peak width and the salt concentration at which the peak is eluted in LGE. The method was applied to the experimental results with various ion-exchange chromatography media. A calculation example based onthe present method is presented to show how the chromatographic and operating parameters should be tuned to obtain a desired resolution. A simplified calculation procedure for the peak profile is also described. (c) 1995 John Wiley & Sons, Inc.     

台湾乳白蚁跟踪信息素粗提物活性与应用研究

台湾乳白蚁是我国为害最凶的一种白蚁。对它的防治早就引起国内外白蚁工作者的广泛重视。目前越来越多的做法是将“诱”与“杀”两个步骤合二为一。也有许多学者已将白蚁的跟踪信息素用于白蚁的诱集上作了研究。本文介绍了台湾乳白蚁跟踪信息素粗提物生物活性,包含信息素的提取、跟踪反应、引诱效应、感受距离测定,以及在台湾乳白蚁防治上的实际应用等。     

家蝇蛹甘露糖结合凝集素的结构及免疫调节作用

分析了一种分子量为24 kDa,具有免疫活性的新型家蝇蛹甘露糖结合凝集素(MBL-1)的结构,为深入研究其结构与功能之间的关系提供依据.首先通过凝胶电泳及Schiff's染色确定此新型家蝇蛹凝集素具有糖链结构.通过β-消除反应、红外光谱、原子力显微镜和蛋白N端测序仪对其结构进行分析.结果表明MBL-1是一种存在N-糖苷键,蛋白含量为97.20％、糖含量为2.55％,直径60～100 nm的椭球状蛋白单体,肽链N-端封闭.MTT实验证明MBL-1可以明显促进巨噬细胞的增殖且具有浓度依赖性,扫描电镜观察结果表明,MBL-1作用后的巨噬细胞形态呈现活化状态.可见,分离纯化出的MBL-1是一种具有明显的免疫调节活性的新型凝集素,为开发天然免疫增强剂和进一步分析其结构及其作用机制提供了参考.     

Extraction of chitin and chitosan from housefly,Musca domestica,pupa shells

Chitins and chitosans are some of the most abundant natural polysaccharide materials, and are used to increase innate immune response and disease resistance in humans and animals. In this work, chitin and chitosan from housefly, Musca domestica, pupa shells were obtained by treatment with HCl and NaOH. For chitin extraction, 2 N HCl and 1.25 N NaOH solutions were used to achieve decalcification and deproteinization, respectively. For chitosan extraction, 50% NaOH solution was used to achieve deacetylation. The yields of chitin and chitosan from pupa shells of M. domestica were 8.02% and 5.87%, respectively. The deacetylations of chitosan (from chitin C1 and C2) were 89.76% and 92.39%, respectively, after the first alkali treatment with 50% NaOH (w/w) solution at 105 °C for 3 h and 5 h, respectively. The viscosities of the chitosans (from chitin C1 and C2) were 33.6 and 19.2 cP, respectively.     

稀碱法提取食用蝇蛆蛋白

对蝇蛆粉充分脱脂后采用稀碱法提取蝇蛆蛋白。结果表明,液料比、浸提温度、碱浓度对提取得率有显著影响(P<0.01),提取时间对提取得率影响差异不显著。蛋白提取的最佳条件为:液料比20mL/g,浸提温度80℃,浸提时间2h,碱浓度1%(w/v)。在此条件下,所得蝇蛆蛋白粉蛋白氮含量为11.14%,蛋白得率为57.53%,提取效率为69.84%。对最优条件下得到的蝇蛆蛋白粉进行理化指标检测,并与速溶豆粉的企业标准以及脱脂乳粉的国家标准进行比较。结果表明,水分、灰分、脂肪、蛋白含量均已达到可食用级别的要求,重金属铅、汞、砷含量均低于限量要求,微生物检测不含致病菌和大肠杆菌,在最优提取条件下所得蝇蛆蛋白粉,综合指标已达可食用标准。