香菇和侧耳属间原生质体的电融合研究

从培养在液体培养基中的香菇、美味侧耳和平菇的单核菌丝用酶法分离了原生质体。施加0.5MHz、500PV/cm的正弦波和μs、6000PV/cm方形脉冲的电场诱导下使其电融合。电融合后的融合子和原生质体在固体培养基上植板培养成菌落。在显微镜下检查融合子菌株菌丝的锁状联合选出从融合子长成的菌株。香菇和美味侧耳的融合菌株产生频率为61.53%,香菇和平菇的融合菌株产生频率为32.58%。根据融合菌株与亲本的拮抗作用和他们的过氧化物同工酶和酯酶同工酶的电泳酶谱与其亲本酶谱的不同,证实这些融合菌株是从融合的异核体生长成的。同时讨论了电融合方法和结果。     

柑桔原生质体电融合研究进展

柑桔原生质体电融合研究进展刘继红︵华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室武汉４３００７０︶柑桔是世界四大水果之一,也是我国南方最为重要的一种水果。由于柑桔是多年生木本植物,童期长,遗传上高度杂合,一些主栽品种雄性败育（如温州蜜柑）或／和雌性败育（如...     

黑曲霉原生质体电融合研究

以NTG和UV分别对生淀粉糖化酶菌株——野生型黑曲霉N 11,N一16(Aspergillusniger)进行诱变处理获Lys^-和Arg^-两类营养缺陷型。采用纤维素酶和蜗牛酶复合酶处理其菌丝并探讨了酶浓及菌龄等因素对原生质体形成和再生的影响。以BAEKON-2000型基因转移仪将上述营养缺陷型进行原生质体电融台处理。产生高融合率的最佳参数为：脉冲幅度4．5kV,脉冲数32,脉宽62．5μs,电激时间0.2s,距离3mm,周期数10。融合率可达60％。经连续传代7次获得4株稳定的融合子,经孢子体积,核DNA含量,生长速度测定证明上述融合子是种内杂合二倍体。以PFA处理得稳定的单倍体分离子。     

坛紫菜和条斑紫菜的原生质体电融合

用日本岛津公司生产的电融合装置(SSH－2),进行了坛紫菜和条斑紫菜的原生质体融合试验。探讨了不同的电刺激条件、融合缓冲液种类以及蛋白酶的前处理与细胞融台的关系。其结果是,高频电压30一35V,印加时间25—30s;脉冲电压300—350V,印加时间60μs,及添加3m mol／L Ca²⁺、Mg²⁺的融合缓冲液可使融台率达到21—31％。蛋白酶的前处理对细胞融合有明显的效果。融合细胞培养7天后产生细胞壁,4l天长成多细胞团。     

普通番茄叶肉原生质体和多毛番茄茎尖原生质体的电融合

普通番茄叶肉原生质体和多毛番茄茎尖原生质体在一交变电场中(正弦波;1mHz,200v/cm)可发生双向电泳而随机排列成串。再附加单个直流方波脉冲,可诱导相邻原生质体的融合,适宜的融合脉宽为40μs,电压幅度为3000v/cm。最高融合率可达57%。培养经电融合处理的原生质体,观察到了少数原生质体的第1次分裂。     

放线菌种间原生质体电融合育种

以龟裂链霉菌(S．Rimosus,Otc^r,Sm ^s)和灰色链霉菌(S．Griseus,Sm^r,Otc^s)为原始出发菌株,经NTG诱变处理,获得前者(Asp^-)和后者(cys^-)营养缺陷型突变株,制成10⁹个／m1等量原生质体混合液,在岛津细胞融合装置SSH—C¹¹融合槽(电极间距为0．5mm)内,以频率lMHz、强度800V／cm的高频交流电场作电介质,电泳15s形成原生质体珠串,旋即施加电场强度6 kV／cm、短时程20μs的直流高压方形电脉冲触发原生质体融合,在R₃再生培养基上选取34971个菌落,移植于双抗基本培养基,检出四个双抗原养型融合子。它们具有亲株的优良生物学特性,生长速度较快,产素能力大,抗菌活性高。生物显影结果表明,它还产生两个亲株所不具有的抗菌活性物质。     

水稻原生质体电融合时的参数选择（简报）

水稻（0862和台北309）原生质体电融合最佳条件是交流电场强度250V／cm,频率600kHz;高压直流脉冲幅值1．65kV／cm,脉冲持续时间50μs,脉冲间隔时间3．0S。融合率最高可达275％．在上述条件下,电场处理基本不影响原生质体的活力。     

虎杖原生质体分离纯化及电融合初步研究

以野生虎杖根状茎芽为外植体诱导虎杖愈伤组织,选取生长状况良好的愈伤组织作为原生质体分离材料,通过L16（44）正交试验对虎杖原生质体分离条件进行优化.结果表明：1.4%纤维素酶R-10,0.1%果胶酶,17%甘露醇的酶液,酶解时间7h,虎杖原生质体分离效果最好.在80r/min振荡分离后虎杖原生质体得率为46.2%.以800r/min的离心速度纯化,纯化的原生质体得率为43.8%,其中原生质体的成活率为75%.通过对虎杖原生质体进行融合,原生质体的融合率为20.2%.     

香菇原生质体融合及融合子的鉴定

以香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）种内不同株一对亲和的单核菌丝（７４０２〈２〉和９１０１〈１２〉）为亲本,以碘乙酰胺失活７４０２〈２〉作为筛选标记,经过原生质体制备、ＰＥＧ融合及融合子再生等步骤,选育得融合子。融合子与双亲无拮抗性,在菌丝形态,核数目及可溶性蛋白质图谱、酯酶同工酶谱和过氧化物酶谱上均与双亲单核菌丝及担孢子杂交子有区别。将Ｋｎｏｗｌｔｏｎ等于１９８４年建立的一种分离高频再生衍生株的方法首次运用至食用菌中,使原生质体再生率提高２－３倍,为融合操作提供了方便。     

香菇野生菌株线粒体DNA多态性

利用PCR技术扩增了我国 7个省的 2 0个野生香菇菌株的线粒体DNA的 2个小区段 ,利用限制性酶切技术研究这 2个片段长度多型性 (RFLPs) ,结果显示 ,2 0个野生香菇菌株间的线粒体DNA在研究的区段上分为 2大类型 ,相似性为 70 % ,与栽培种相比存在较大的遗传差异。     

凤尾菇和香菇原生质体非对称融合

The protoplasts of auxotrophic mutant monokaryon of Pleurotus. Sajor-caju was used as recipient parenL the protoplasts of wild dikareon of Lentinus edodes were heat-inactivated and used as nuclear donor parent. The fusants of two parents showed some their individual characteristics and physiological difference between themselves. Thrugh protoplast re-isolation and reversion of one randomly selective fusant, two parents had been recovered and the donor parent achieved some new physiological characteristics su…     

营养条件对香菇生长发育的影响

本文报道香菇(Lentinus edodes)营养生长和生殖生长阶段对营养条件的要求。在基本培养基上添加0.2％水解乳蛋白和1毫克/升6-BA的结果,提高了菌丝体的生长速度和干重。单加6-BA的培养基上,菌落的生长比单加β-蜕皮激素的效果好。在低营养水平的木屑菌砖上追加2ppm 6-BA和3％葡萄糖液,促进了原基的分化和子实体的形成。在菇蕾基部追加不同比例的碳、氮溶液,鲜菇的重量增加,加C/N=30:1的营养液,菇的鲜重比对照提高73％。     

香菇原生质体分离诱变育种研究

通过ＵＶ处理香菇原生质体后得到的１０５株再生菌株与它们亲本菌株的菌丝生长速度,产量和出菇期进行了比较。约有３０％的再生菌株获得了较高的产量和较早出菇期的优良特性、多次继代培养证明,这些再生菌株获得的优良特性稳定。研究结果表明,香菇原生质体分离诱变是一种很有应用价值的食用菌菌种选育方法。     

中国香菇交配型和基因型的分析

自1987—1990,在长江以南九省(区)采集52个香菇品系,43株制作了孢子印用以检测交配型,又以检测A.B因子位点的等位基因方法测定了担孢子的基因型,保藏了以A_xB_x(或A_xB_y……)标记的标准单核菌丝体,这是建立中国香菇种质库的第一步,将为香菇杂交育种提供有效亲本。结果表明:每一菌株的四个交配型呈随机分配。具有四个交配型的菌株百分率是79%,有二个交配型的香菇菌株百分率是21%。有9个菌株的单核菌丝的基因型从A_1B_1……A_(18)B_(18)不同,A.B因子等位基因差异明显,这些菌株显示了A.B因子的很低的地区性重复频率。本项研究中建立了区分同宗A同宗B以及四个交配型的试验方法,遵循着核移动的规律,这个方法能够重复。     

香菇基因型及对蔗渣降解水平的研究

在江南一些地方采集九株野生香菇,分析担孢子基因型并测定A、B不亲和因子等位基因的数目及差异,保藏以A_xB_x(或A-yB_y)标记的单核菌丝体。实验结果表明,每一菌株的四个基因型呈随机分配。香菇A·B因子具有地区性,重复频率很低,等位基因差异明显。九个菌株的单核菌丝体的基因型从A_1B_1到A_(18)B_(18)不同。进一步对14个菌株(包括上述野生菌株)在蔗渣培养基上生长70天后对主要基质降解程度的测定表明,除个别菌株比较适合用蔗渣进行栽培外,其它菌株对蔗渣中纤维素、半纤维素和木质素的分解利用能力都较差。     

原生质体电融合构建酵母多倍体的研究

为考察将STA基因导入酿酒酵母的可能性和研究糖化酵母在不同核倍性下STA基因的表达效应,从酿酒酵母HU-TY-1A及糖化酵母5101-7C、5206-1B、5301-14D出发,通过原生质体电融合技术,构建了11株核倍性分别为2n、4n、5n及8n的酵母多倍体.所用电融合参数为:交变电场强度200v/cm,频率1MHz;电脉冲强度9kv/cm,宽度40μsec,脉冲数2个,间隔10sec,波形为方波.在糖化酵母单一亲株融合组合中,融合株检出采用菌落形态作为初检指标取得一定效果.其它融合组合则采用遗传标记检出更为可靠.所得融合率约为5×10~(-5)—1×10~(-3).所有融合株经15代以上传代培养,遗传稳定.