芽四糖淀粉酶产生菌的筛选与发酵条件的研究

从290个土样中分离到1380株细菌,加上本所其他课题组提供的细菌共1870株,其中有707株能分解淀粉,经过复筛、纸层析鉴定有3株菌的淀粉酶酶解液中主要产物是麦芽四糖,进一步用β－淀粉酶水解为麦芽糖,用萄葡糖淀粉酶水解为萄葡糖,确证为麦芽四糖。其中最优菌株为537．1,其酶解产物中麦芽四糖占90％,而其他两株菌的酶解产物中除麦芽四糖外,还有较多的麦芽糖及麦芽三糖,因此选择了537．1作为形成麦芽四糖淀粉酶的优良菌株,经鉴定,该菌属于产碱菌(Alcaligenessp．)。菌株537．1产酶的较好条件为t培养基中麦芽糖1．5％,蛋白胨0．5％,起始pH7—7．5,在27—28℃振荡培养48h。株537．1培养液可以酶解谷类、薯类和野生植物淀粉生成麦芽四糖。     

黑曲霉突变株葡萄糖淀粉酶的底物特异性

黑曲霉(Aspergillus niger)突变株T-21葡萄糖淀粉酶(GAI)仅能水解多种淀粉及麦芽低聚糖生成唯一产物β-葡萄糖,其水解麦芽糖及麦芽三糖的速度分别为200和570mg葡萄糖·h~(-1)·mg~(-1).GAI水解α-1,4键的速度比水解α-1.6键快100多倍.除了马铃薯淀粉外,对其它淀粉及麦芽低聚糖几乎都能100%地水解,但不能水解环状糊精,其水解各麦芽低聚糖的最先产物都比原底物少一个葡萄糖单位,说明GAI为一外切型淀粉酶.GAI对麦芽糖、麦芽三糖、可溶性淀粉、糯米淀粉、糊精及糖原的Km值分别1.92mmol/L、0.38mmol/L、0.053%、0.045%、0.059%、及0.076%,V_(max)分别为590、1370、1270、1520、1120和1220mg葡萄糖·h~(-1)·mg~(-1).D-葡萄糖酸-δ-内酯及麦芽糖醇对此酶分别具有反竞争性抑制和混合性抑制.     

黑曲霉突变株葡萄糖淀粉酶的底物特异性

黑曲霉(Aspergillus niger)突变株T-21葡萄糖淀粉酶(GAI)仅能水解多种淀粉及麦芽低聚糖生成唯一产物β-葡萄糖,其水解麦芽糖及麦芽三糖的速度分别为200和570mg葡萄糖·h^(-1)·mg^(-1).GAI水解α-1,4键的速度比水解α-1.6键快100多倍.除了马铃薯淀粉外,对其它淀粉及麦芽低聚糖几乎都能100%地水解,但不能水解环状糊精,其水解各麦芽低聚糖的最先产物都比原底物少一个葡萄糖单位,说明GAI为一外切型淀粉酶.GAI对麦芽糖、麦芽三糖、可溶性淀粉、糯米淀粉、糊精及糖原的Km值分别1.92mmol/L、0.38mmol/L、0.053%、0.045%、0.059%、及0.076%,V_(max)分别为590、1370、1270、1520、1120和1220mg葡萄糖·h^(-1)·mg^(-1).D-葡萄糖酸-δ-内酯及麦芽糖醇对此酶分别具有反竞争性抑制和混合性抑制.     

制革醛鞣固体废弃物的酶法资源化利用

为建立毛皮制革产生固体废弃物的清洁化、资源化利用工艺,采用JW酶制剂对兔毛皮甲醛鞣制固废进行酶解处理,并对酶解产物的工农业用途进行评估。结果表明,固废中的皮块能够被JW-4酶制剂完全水解。皮块水解后回收的毛纤维经检测其长度优于刀剪工艺,断裂强度、伸长率与原始纤维相当。酶解液中含大量小分子的多肽和氨基酸,氨基酸浓度为5.23%,游离甲醛含量为37.34 mg/kg,重金属含量低于氨基酸肥料标准;将酶解液培养小麦种子后,能够促进小麦提前1 d生根,培养6 d的植株鲜重要优于对照。用清洁产品处理制革固废,不仅避免二次污染,还可对固废进行资源化利用。     

巨大芽孢杆菌淀粉酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达

以λ噬菌体为载体,采用鸟枪法由B.megaterium基因组克隆得到了1个淀粉酶基因,并已被亚克隆到E.coli和B.subtilis中,其表达水平较B.megaterium高250倍。克隆株产生的淀粉酶对直链淀粉的早期水解产物主要为麦芽三糖和麦芽糖,随着水解时间的延长,又将它们转变为葡萄糖。同时能以麦芽三糖为底物水解为麦芽糖和葡萄糖。受体菌的平行提取物无上述水解活性。因而该酶被确定为糖化型α-淀粉酶。SDS-凝胶电泳法确定酶分子量为58000道尔顿。     

粘虫营养的研究——成虫对于糖类的取食和利用

本工作中用一系列同浓度的不同糖液及不同浓度的同种糖液喂养羽化后一天的粘虫蛾,见到它们对于糖的种类和浓度均有明显的辨识能力。对于糖液的取食量均比对清水的大,表明糖类对成虫均有诱食的味觉刺激:而其效应的大小,在单糖中的顺序为:果糖>(或≥)葡萄糖>半乳糖≥木糖>(或≥)甘露糖≥山梨糖>鼠李糖;在二糖中为:麦芽糖>蔗糖≥海藻糖>纤维二糖>乳糖;在三糖中为:棉籽糖>松三糖。对蔗糖溶液的味觉阈值为2×10^-4M左右,对葡萄糖的可能为2×10^-2M左右。根据成虫取食糖液后以肠道内含物进行纸上层析的结果,见到消化糖类的酶类有α葡糖苷酶、β葡糖苷酶、β果糖苷酶、α半乳糖苷酶,而无β半乳糖苷酶和淀粉酶。消化道对糖液的消化和吸收以及糖液通过消化道均相当迅速。嗉囊是糖类贮存和水解的主要场所,其中的消化酶可能是由涎腺分泌或从中肠分泌后通过前胃而分批向前流入的。中肠是吸收消化产物的主要部分,所吸收的糖类在体内大部分转变成脂肪贮存。成虫羽化后以清水饲养到第3天时脂肪含量占干重13%左右,而以20%蔗糖溶液饲养的却高达64%左右。用0.2M和0.4M的糖液分别连续饲养配对的雌雄成虫直到雌蛾死亡,见到每对蛾对果糖、葡萄糖、麦芽糖和蔗糖的取食量较大,半乳糖次之,甘露糖与乳糖较小;取食糖液的体积不随糖液浓度的增加而增加;产卵量以取食麦芽糖的最大,乳糖的最小。从产卵量来看,半乳糖和甘露糖一经吸收后其营养效应与葡萄糖大致相同。糖液中的水分对于成虫也显示有一定的营养效应。     

低聚异麦芽糖的产业化研究

异麦芽低聚糖是以淀粉为原料 ,通过酶的水介、葡萄糖基转移反应而生成的含α- 1.6糖苷健的异麦芽糖、泮糖、异麦芽三糖等分枝低聚糖的淀粉糖 ,是一种适合于廉价大量生产的双歧因子 ,其糖浆性质接近高麦芽糖浆 ,以其无作用量较大可达到 90 g/ kg,故可用于各种食品 ,作为甜味剂来制造具有整肠功能的保健食品。通常异麦芽糖制品中 ,各种分枝低聚糖含量要求达到5 0 %以上 ,其中主要功能性异麦芽糖低聚糖 (异麦芽糖、泮糖与异麦芽三糖 )的含量要求占总平均的 35 %以上 ,为了提高产品中异麦芽低聚糖的含量 ,本公司在日本、无锡轻大、上海市工业微…     

坚强芽孢杆菌三个淀粉酶基因的克隆和表达

以pUC18为载体,用鸟枪法从产淀粉水解酶的坚强芽孢杆菌725菌株中得到三个产淀粉水解酶的重组质粒,在大肠杆菌中表达。用高压液相色谱分析了三个表达的酶的淀粉水解产物,其中pBA135和pBA150表达的酶的淀粉水解产物主要是麦芽糖,具β-淀粉酶的性质。pBA140表达的酶的淀粉水解主要产物除麦芽糖外还有一糖,三糖和四糖。pBA135编码的酶有较好的热稳定性,60℃保温30min,活性保留70％以上,最适反应温度55-60℃。而在同样条件下pBA150编码的酶仅保留37％的酶活,最适反应温度50℃。     

产生L-谷氨酸的棒状杆菌新种

从北京某食品厂的淀粉废浆水中分离出一株革兰氏染色阳性、无芽孢的产L-谷氨酸细菌。生物素是必需生长因素,硫胺素或某些氨基酸有促进生长的作用,能耐较高浓度的尿素,除由葡萄糖、果糖、甘露糖、麦芽糖、蔗糖及商藻糖产酸外,还能由肌醇、糊精及木糖产酸,但均不产气。通气培养在含葡萄糖和尿素或铵盐的适宜培养基中,能积累大量L一谷氨酸,经鉴定认为是一新种,定名为北京棒状杆菌A S 1.299(Corynebacterium pekinensen. Sp. A S 1.299)。     

大曲来源淀粉利用型乳酸菌的筛选及其淀粉利用特性

【背景】乳酸菌是面包、馒头等发酵食品中的重要功能微生物,对改善质地和风味均具有重要作用。淀粉利用能力高的乳酸菌,因其能够在生面粉中更好地定殖而具有重要的应用价值。【目的】筛选获得淀粉水解型乳酸菌并研究其淀粉利用特性。【方法】以浓香型白酒大曲为筛选源,采用淀粉基质碳源对大曲中乳酸菌进行定向富集,结合淀粉发酵能力筛选高淀粉利用能力菌株,并对筛选得到的优良菌株展开淀粉酶表达及其酶活力研究。【结果】以贮存3-6个月的大曲为优秀筛选源,以生面糊传代富集方法可较快筛选出具有良好淀粉利用能力的乳杆菌,主要物种为植物乳杆菌和类食品乳杆菌。对其中一株具有淀粉利用能力的类食品乳杆菌LBM12001的淀粉水解特征和淀粉酶活力展开研究,该菌株淀粉水解能力达10 g/L,并且其在面糊中具有良好的定殖能力;酶活力测定表明,其α-淀粉酶和麦芽糖淀粉酶为胞外酶;麦芽糖淀粉酶水解淀粉的最适pH值为3.5,比酶活为1 240 U/mg。【结论】建立起从我国传统白酒发酵大曲中高效筛选淀粉水解型乳酸菌的富集筛选方法,以及菌株的水解能力评价方法,获得的胞外麦芽糖淀粉酶分泌型乳杆菌在酸面团、馒头等需进行生面粉发酵食品的生产中具有重要应用前景。     

寡糖的荧光标记高效液相色谱分析

 利用氨化还原的方法把高量子产率的荧光标记物——α-萘胺,接到异麦芽糖寡糖的还原端。用硅胶薄层色谱、荧光光谱及快原子轰击质谱证实反应物的完全性及其结构。高效液相色谱用Micropak si5硅胶柱,以乙腈-水(含0.05％三乙胺)为梯度洗脱液可使含有二到九个糖残基的异麦芽糖寡糖的α-萘胺衍生物全部分离。本法对异麦芽糖二糖的荧光检测灵敏测度为2.35Pmol。     

菊粉酶水解菊芋浸汁反应条件研究

利用产紫青霉（PenicillumP.)F-7产生的胞外菊粉酶对菊芋浸汁进行了水解试验,37℃水解10h,得到含低聚寡糖74.7%(占总糖含量）的水解液;同时进行了菊粉酶水解的各项条件试验,摸索出了最适水解条件;pH5.0,温度为37℃,反应时间为10h,有Mn^2 存在（0.001M)。     

不同纤维素原料超临界水解的研究

分别以稻草秸秆、经预处理的稻草秸秆、脱脂棉、微晶纤维素和定性滤纸为原材料,利用间歇式的超临界反应设备,在400℃的盐浴中进行木质纤维素的超临界水解,采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法对产物中的还原糖进行测定,研究反应时间对不同纤维素原料水解产糖的影响。结果表明:在超临界条件下,不同原料在较短的时间内还原糖含量均出现峰值,随着反应时间的延长还原糖产量呈现下降的趋势;稻秆、预处理后的稻秆、脱脂棉、微晶纤维素和定性滤纸的最大产糖量分别为7.42、9.05、12.55、18.01和14.24 g/L;与此对应的最佳反应时间分别为3.5、4、3、3、4 min;对应的最大还原糖产率分别为14.84%、18.10%、25.10%、36.02%、28.48%。     

基于超滤膜辅助的糖蛋白全O-连接糖链的富集和MALDI-TOF/TOF质谱结构解析

哺乳动物中约有50%以上的蛋白质都发生了糖基化修饰.连接在丝氨酸或苏氨酸上的O-连接糖链是常见的蛋白质糖基化修饰方式之一,其主要功能是维持与其连接的蛋白质部分的空间构象,保护其免受蛋白酶水解及覆盖某些抗原决定簇.糖链结构的解析有助于更清楚地认识糖蛋白及其功能.本研究建立了一种基于超滤膜辅助(FASP)富集细胞、血清和尿液中糖蛋白全O-连接糖链的方法,根据糖蛋白与其糖链结构之间的分子质量差异,利用10 KD超滤膜富集蛋白质样品中由β消除反应释放的全O-连接糖链,将糖链甲基化修饰后再使用MALDI-TOF/TOF-MS进行解析,同时利用二级质谱进行结构确认.通过上述方法可从标准糖蛋白mucin、细胞、血清和尿液样本中分别鉴定到83、29、33和85种O-连接糖链结构,利用该方法可以从复杂样品中富集和解析糖蛋白全O-连接糖链,实现快速、高效、高通量地解析糖蛋白O-连接糖链的目的.     

红曲霉葡萄糖淀粉酶的底物特异性

红曲霉（Monascus sp.）As 3.3491的葡萄糖淀粉酶具有多型性,其中的两个主要组分 E3和 E4得到了凝胶电泳均一的样品。比较了它们的底物特异性,同时与粗酶液和未分纯的 E3+4作了比较。从酶对底物的分解限度来看,粗酶液能100%的分解可溶性淀粉、直链淀粉、支链淀粉、糖原、玉米淀粉、马铃薯淀粉、麦芽糖和麦芽三糖,也能分解茁霉多糖（Pullulan）（35.8%）,潘糖（Panose6-α-葡糖基麦芽糖）（27.3%）、异麦芽糖（9.6%）、右旋糖酐（5%）、龙胆二糖（1.9%）。纯北的 E3和 E4仅能100%地分解糖原,麦芽糖和麦芽三糖,对其他底物的分解限度则有不同程度的降低,E3,E4和 E3+4之间没有明显差别,可以看出粗酶液中有能分解α-1,6-糖苷键的酶存在。各种酶样品均不能分解环状糊精（α,β和γ）,纤维二糖、龙胆二糖和（?）糖。比较了各种酶样品对不同底物包括不同平均链长的糊精的反应初速度,在用同样的百分浓度下,对麦芽糖、麦芽三糖、支链淀粉,可溶性淀粉等的反应初速度高,而对直链淀粉的反应初速度要低得多,这与它没有分枝,非还原性末端较少有关。对不同平均链长的小分子糊精的反应初速度随着链长的增加而增加。而对异麦芽糖的水解速度仅相当于麦芽糖的1%左右,E3,E4和 E3+4之间无明显的差别。用麦芽糖和可溶性淀粉为底物,比较了 E3和 E4的 Km 值和 Vmax值。两种酶对麦芽糖的Km 值均为1.38×10-1（%）,对于可溶性淀粉的 Km 值均为1.05（%）,Vmax也基本相同。E3和 E4对可溶性淀粉的水解产物均为β-葡萄糖,两种酶均能催化葡萄糖合成少量寡糖。     

坚强芽孢杆菌β-淀粉酶基因的核苷酸序列分析

淀粉水解酶广泛用于淀粉加工业中,何秉旺等在选育产耐热β-淀粉酶菌株中得到一株坚强芽孢杆菌（Bacillusfirmus）725,该菌株产生的淀粉酶有较好的热稳定性,水解淀粉的主要产物为麦芽糖。自然菌株产生的淀粉酶往往是多种淀粉酶的混合,为进一步研究该菌株产生的淀粉酶的性质和在工业上应用的可能性,分离了三个淀粉酶基因,在大肠杆菌中克隆和表达[1]。其中重组质粒pBA150产生的淀粉酶的淀粉水解产物主要是麦芽糖［1］。Β-淀粉酶（EC.3．2.1．2）水解淀粉的主要产物是麦芽糖,工业上可用于生产高麦芽糖浆,近年来又有β-淀粉酶用于啤酒工业的报道[2]。本文报道重组质粒pBA150的β-淀粉酶基因的序列分析及推导出的氨基酸序列同己知β-淀粉酶的氨基酸序列比较。     

对“唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”实验条件的初探

中学《生理卫生》教材安排的这项实验是验证唾液淀粉酶在温度37℃左右、中性溶液中将淀粉分解成麦芽糖。利用淀粉遇碘变成蓝色这一特定颜色,来观察酶促反应是否发生。如果淀粉被水解成麦芽糖,则加碘液无颜色反应;如果淀粉没有破水解,则加碘变成蓝色。由于教科书中实验指导部分没有明确指出使用哪类淀     

霉菌α-半乳糖苷酶分解棉子糖的初步研究——Ⅰ.菌株的分离筛选

甜菜含棉子糖较多。棉子糖占糖蜜总糖量的比数虽较小,但却导致蔗糖结晶难以析出而产生大量废糖蜜,造成废糖蜜含蔗糖量高达45—50%。所以,棉子糖是甜菜制糖工艺中重要有害物质之一。对此曾采用过化学处理方法,但因工艺复杂,成本较高,尚难消除其不良作用。棉子糖被蔗糖酶分解产生蜜二糖和果糖;被α-半乳糖苷酶分解产生半乳糖和蔗糖。若用     

产碱菌麦芽四糖淀粉酶水解淀粉的特性

产碱菌麦芽四糖淀粉酶水解不同来源淀粉的产物组成有差异:G4占81.5％～98.8％,G_3占0％～9.6％,G_2占0％～5.9％。不同淀粉的水解速度在4170～9036mgGlch~-(1)·mg~(-1)之间。对可溶性淀粉的水解产物为6-型。麦芽四糖淀粉酶能被小麦、玉米及马铃薯的生淀粉吸附,其吸附率分别为60.2％、50.0％及52.2％,相对水解率分别为4.5％、2.7％及0％,水解生淀粉的主要产物为G_4。     

能量补充对红细胞膜通透性的影响

本文报道利用亚硝酸钠(NaNo_2)穿透红细胞膜与血红蛋白(Hb)作用生成高铁血红蛋白(MetHb),测定MetHb可作为红细胞膜通透性的指标,研究在红细胞悬液中补充葡萄糖,萄葡糖-6-磷酸(G-6-P),3-磷酸甘油(3-PG),ATP后红细胞膜通透性的变化。萄葡糖,G-6-P,ATP均可不同程度地提高通透性,而3-PG有一定的抑制作用,可改善由血卟啉衍生物或γ-线(1000 rad)照射小鼠后引起的红血球通透性增加的作用,使恢复到接近正常水平。