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1.
β-银环蛇神经毒素阻遏神经肌肉接头递质释放的作用机理,可能与它结合于一种突触前的电压依赖的K~+通道有关。本文报告了从大鼠膈肌膜组分中用去垢剂TritonX-100增溶抽提β-银环蛇毒素结合蛋白的结果。这种结合蛋白抽提液的比结合活性为200-400fmol/mg蛋白,比膜制备物的比结合活力提高约一倍。抽提得率为50%-70%。抽提液与~(125)I标记的β-银环蛇毒素的结合可被曼巴蛇神经毒素(dendrotoxin)完全抑制,其IC_(50)约8×10~(-8)mol/L。但另一种β型神经毒素,β-蝮蛇神经毒素(β-agkistrodotokin)却完全不能抑制这种结合。这提示,β-蝮蛇毒素与β-银环蛇毒素具有不同的作用位点。 相似文献
2.
α—银环蛇毒素基因的合成与表达 总被引:6,自引:1,他引:5
结合国内外的研究现状,以α-银环蛇毒素为例来探讨蛇神经毒素基因在大肠杆菌表达体系中的表达情况及其规模生产的可行性。首先根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列,推导出其DNA序列并设计成部分互补的4条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成,纯化这4条寡核苷酸片段,通过片段退火,切口补平,连接,克隆,测序鉴定获得了α-银环蛇毒素基因,然后将a-银环蛇毒素基因克隆至pGEX-2T质粒中分别转化DH5α和 相似文献
3.
β—银环蛇毒素A链cDNA的克隆和表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从银环蛇毒腺中抽提总RNA,RT-PCR扩增编码β-银环蛇毒素A链的cDNA,克隆并测定了全序列。一个新的cDNA得以克隆,其编码一个27个氨基酸的信号肽和一个120个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白和其他β-银环蛇毒素A链一样,具有13个位置固定的半胱氨酸,而且和这些A链具有很高的同源性。此外,以同样的引物,从眼镜蛇毒腺总RN中。克隆到编码眼镜蛇PLA2前体的cDNA。将β-银环蛇毒素A链和眼镜蛇P 相似文献
4.
本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量14kD;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。 相似文献
5.
本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量14kD;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。 相似文献
6.
丙型肝炎病毒基因组部份NS5区蛋白基因在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组NS5区A段和部份B段蛋白。NS5A蛋白溶于水,可经过GST亲和层析柱纯化;NS5B蛋白不溶于水,经PBS-Triton X-100洗涤,尿素溶解后,通过离子交换柱纯化。经SDS-PAGE和Westemblot分析,NS5A蛋白除在57kD左右有条带外,还有不同程度的降解产物;NS5B蛋白主要在58kD左右有条带出现。为查明表达蛋白抗体在病人血清中的分布,取9 相似文献
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电鳐(Torpedocalifornica)的电器官是一种富含突触的组织.将这种电器官的粗制膜悬液与同位素125I标记的β-蝮蛇神经毒素进行结合实验,结果表明这种电器官中存在相对含量较高的毒素结合位点,Bmax为1150fmol/mg,KD为2.8×10-8mol/L.响尾蛇神经毒素和β-银环蛇神经毒素对其结合作用的抑制实验显示,前者与β-蝮蛇神经毒素有共同的结合位点,后者的作用位点则不同.提示β-蝮蛇神经毒素结合位点可能涉及一种新的参与突触前递质释放机制的功能蛋白 相似文献
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抗生物素蛋白结合蛋白的发现及分离纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道了在日本血吸虫感染的兔血清及日本血吸虫卵中,存在一种能与抗生物素蛋白(又称亲和素)专一性结合的蛋白质,称为抗生物素蛋白结合蛋白。该蛋白质与亲和素的结合与生物素及亲和素的糖链部分无关,并能在高PH、高浓度盐及去污剂等条件下与亲和素结合。利用DEA-52离子交换柱及偶联有亲和素的Sepharose4B亲和层析柱,从日本血吸虫感染的兔血清中,分离纯化了该蛋白质。提纯的亲和素结合蛋白在SDS-PA 相似文献
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猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
采用硫酸铵分级分离,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-纤维素离子交换层析以及5'-AMP-Sepharose 4B亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的NADH-细胞色素b5还原酶,提纯倍数为750-800。总回收率为40%左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,A273/A460比值为5.8.在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为32kd。NADH和2,6- 相似文献
10.
α-银环蛇毒素基因的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
与传统的捕蛇或养蛇提毒的方法相比,利用基因工程方法生产蛇神经毒素具有明显的潜在优势。本研究结合国内外的研究现状,以α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)为例子来探讨蛇神经毒素基因在大肠杆菌表达体系中的表达情况及其规模生产的可行性。首先根据文献报道α-银环蛇毒素的氨基酸序列,推导出其DNA序列并设计成部分互补的4条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化其寡核苷酸片段,通过片段退火、切口补平、连接、克隆、测序鉴定获得了α-银环蛇毒素基因;然后将α-银环蛇毒素基因克隆至pGEX-2T质粒中分别转化大肠杆菌DH5(和JM109进行表达分析,融合蛋白约占细菌总蛋白的30%~40%,其中部分为可溶性表达,部分以包含体的形式表达;对可溶性表达的条件进行了优化。最后以天然纯化的α-银环蛇毒素作为对照,分析融合方式表达的重组α-银环蛇毒素的活性,ELISA结果显示其与天然的α-银环蛇毒素比较具有相似的抗原性。 相似文献
11.
一个新的蛋白质剪切系统及其剪切条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
将含麦芽糖结合蛋白-内蛋白子-几丁质结合区(简称MYB)基因的重组质粒pMYB129转入E.coli2426,在LB培养基中发酵,IPTG低温诱导表达,菌体超声破碎,离心,上清液经直链淀粉糖亲和层析,获得SDS-PAGE电泳纯的前体蛋白MYB.MYB中内蛋白子的N端可被还原剂CySH、DTT、β-巯基乙醇等诱导发生剪切反应.结果表明,三种还原剂中以DTT为最佳.同时对剪切过程中温度、pH值等影响进行了研究 相似文献
12.
层粘连蛋白受体单克隆抗体抗原性质的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
层粘连蛋白受体在癌细胞转移中具有重要作用,LN-R的单克隆抗体对于癌转移的基础研究及诊治应用都具有重要意义,本文旨在确定来自人肺巨细胞癌细胞LN-R的一种单克隆抗体的抗原性质,经纯化的McB1能与完整细胞表面、细胞质膜提取物及纯化的LN-R制品特异性结合,实验证明经亲和层析纯化的LN-R制品中含有膜糖脂,用SDS-PAGE及转移电泳将其所复合的膜脂去除后,仍具有与McB1结合的活性,表明此McB1 相似文献
13.
蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定 总被引:10,自引:0,他引:10
以新鲜蚯蚓为原料,经过保温抽提、乙醇沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析、Lysine-Sepharose4B亲和层析以及SDS-PAGE制备电泳等纯化步骤,得到一种纯度达95%以上的蝗蚓纤溶酶,该酶具有强烈的溶解纤维蛋白折作用及蛋白酶活性,平板法测得其比活性为900UK单位/毫克蛋白,TAME法测得其比活性为25000单位/毫克蛋白,酶学性质研究表明其最适反应温度为65 相似文献
14.
GD3合成酶是膜嵌合蛋白,定位于高尔基体,经过制作微粒体,Triton增溶、AH-Sepharose及GM3-Glassbeadse及GM3-Glassbeads亲和层析等步骤,二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌组织中的ST2被纯化了31597倍,得率为0.35%。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染色呈1条蛋白着色带,分子量为55kd。 相似文献
15.
本文测定了兔膈肌钙释放单位中骨骼肌型DHPRα1-亚单位和RyRs的mRNA与蛋白表达水平,探讨了兔膈肌钙释放单位的结构组成特征。采用RT-PCR、原位杂交和免疫组织化学技术,分别测定兔膈肌骨骼肌型DHPRα1-亚单位和RyR1、RyR2及RyR3的mRNA与蛋白表达。结果显示,兔膈肌可见较高水平的骨骼肌型α1-亚单位和RyR1mRNA与蛋白表达;较低水平的RyR3 mRNA与蛋白表达。表明兔膈肌 相似文献
16.
以表达重组α-银环蛇毒素的高效表达菌株BL21(PDZ04)为材料,研究重组α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)的分离纯化。采取亲和色谱和离子交换色谱的方法都得到了重组α-银环蛇毒素的纯品。参考文献报道的方法从天然的银环蛇毒干粉中分离纯化得到了天然α-银环蛇毒素的纯品。然后以天然α-银环蛇毒素为对照来检测重组α-银环蛇毒素的抗原性和毒性。ELISA结果显示其具有与天然α-银环蛇毒素相似的抗原性,以小鼠为动物模型,纯化的重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素相比,其腹腔注射的LD50也基本一致,约为0.22μg/g。结果表明利用基因工程的方法生产蛇神经毒素是可行的。 相似文献
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重组α-银环蛇毒素的纯化及活性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
以表达重组α-银环蛇毒素的高效表达菌株BL21(PDZ04)为材料,研究重组α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BgTx)的分离纯化.采取亲和色谱和离子交换色谱的方法都得到了重组α-银环蛇毒素的纯品.首先从天然的银环蛇毒干粉中分离纯化得到了天然α-银环蛇毒素的纯品.然后以天然α-银环蛇毒素为对照来检测重组α-银环蛇毒素的抗原性和毒性.ELISA结果显示其具有与天然α-银环蛇毒素相似的抗原性,以小鼠为动物模型,纯化的重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素相比,其腹腔注射的LD50也基本一致,约为0.22μg/g.结果表明利用基因工程的方法生产蛇神经毒素是可行的. 相似文献
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慈菇(Sagittaria safittifolia)α—半乳糖苷酶的纯化与性质 总被引:1,自引:0,他引:1
以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶,α-和β-半乳糖苷酶活力较高,经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConA-Sepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶,纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示了1条蛋白质带,在 相似文献
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化学合成虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅰ基因的克隆和表达 总被引:2,自引:0,他引:2
本文报道了全化学合成虎纹搏鸟蛛毒素-Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达,表达产物为N-端是谷胱甘肽硫转移酶的融合蛋白。经GSH-Sepharose 4B亲和层析纯化,凝血酶酶解融合蛋白,得到重组HWTX-Ⅰ(rHWTX-Ⅰ)。普和氨基酸顺序分析均表明rHWTX-Ⅰ系正确表达产物。还原复性的rHWTX-Ⅰ表现出与天然HWTX-Ⅰ生物学活性的一致性。 相似文献
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采用丙酮粉抽提,DEAE-Sephadex A-50、Sephacryl S-300、MonoQ柱层析,从银杏花粉中分离纯化出微管蛋白,其两个亚基的分子量分别为54kD和52kD纯化的微管蛋白可与鸡脑微管蛋白抗体发生免疫交叉反应。 相似文献