灯盏花产黄酮内生放线菌筛选及产黄酮能力的初步研究

通过黄酮类物质特异颜色反应和可见分光光度法,筛选产黄酮的灯盏花内生放线菌,研究灯盏花产黄酮内生放线菌在PDA、高氏1号和淀粉3种培养基上的产黄酮能力。结果表明:59株灯盏花内生放线菌中,8株菌的镁粉+浓盐酸、氯化铝、浓氨水3种颜色反应均成阳性,能够产生黄酮。形态学观察初步鉴定这8株菌均为链霉菌属(Streptomyces)。3种培养基中,在PDA培养基上灯盏花产黄酮内生放线菌的菌丝体生物量、黄酮含量和产量较高。8株灯盏花产黄酮内生放线菌中,菌株RA′1-7生长较好,菌株ELA′3-2和RA2-1菌丝体黄酮含量较高,菌株ELA′3-2菌丝体黄酮产量较高。     

川楝内生放线菌多样性及抗菌活性筛选

【目的】探究药用植物川楝内生放线菌多样性,从中挖掘出新的放线菌菌株,发现新的潜在农业生防和医药先导化合物。【方法】从四川境内的资阳、遂宁以及重庆万州采集川楝的根、茎、叶、果、皮,采用纯培养方法,用4种培养基共分离获得148株放线菌。通过形态学观察筛选出60株放线菌进行RFLP分析,选出代表菌株进行16S r RNA基因序列分析。以3株细菌和6株病原真菌作为指示菌株,检测初筛出的60株菌株的抗菌活性以及聚酮合酶(PKSⅠ、PKSⅡ)基因、非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因和卤化酶(Halo)基因。【结果】基于16S r RNA-RFLP分析,60株放线菌被分成10簇,筛选出25株代表菌株分别属于7个属,包括Streptomyces、Micromonospora、Planotetraspora、Streptosporangium、Nocardiopsis、Prauseria、Microbispora,其中链霉菌占73.3%。供试的川楝内生放线菌对细菌、真菌有不同程度的抗菌活性;其中含有4类化合物合成基因的菌株占10%-55%。【结论】药用植物川楝内生放线菌具有丰富的多样性,且不同地区不同部位川楝组织中放线菌的种群存在差异;分离菌株广谱的抗菌活性证明,川楝内生放线菌在次生代谢产物合成方面具有巨大潜力,这为进一步的药物开发提供了丰富的菌种资源。     

灯台树内生放线菌

放线菌一直是用于生产抗生素最多的微生物类群,临床和农牧业上应用的抗生素有60%以上就是由放线菌生产的[1],但随着从来源于普通土壤环境的放线菌中筛选到新化合物几率的不断下降,人们已经逐步将注意力转向了一些生活在特殊生境的微生物[2]。由于植物内生菌在植物体内经过与植物宿主的长期协同进化,使植物内生菌能够产生结构新颖、功能     

植物内生放线菌研究进展

植物内生菌主要包括细菌、真菌和放线菌。放线菌的次生代谢产物,如抗生素、有机酸、生物碱等,在抗癌药物、新型抗生素、植物促生剂、生物农药、纳米新材料等领域取得了一系列研究成果。内生放线菌在生态农业、食品工业、制药工业和环境治理等方面扮演重要角色。本文简要概述了目前植物内生放线菌的研究成果,讨论了存在的问题和发展方向。     

红树林内生放线菌

随着从来源于普通环境土壤微生物中分离、筛选新化合物几率的不断下降,人们已经逐步将注意力转向了特殊生态环境的微生物。红树植物生长于海岸潮间带,其独特的生存环境赋予它丰富的微生物资源,尤其是内生菌资源,其丰     

内生拮抗放线菌

正植物内生菌是一种潜在的重要微生物资源,它能促进宿主植物生长、增强植物抗逆性及增强其抗病虫害能力等,具有开发成植物生长促进剂和生物农药的巨大潜力[1-2]。相对于植物内生真菌和其他内生细菌的广泛深入研究,有关植物内生放线菌生物学作用及其活性物质的研究相对滞后,仍然有许多领域值得进一步深入研究。随着各生物学领域的不断发展,近年来国内相关研究较活跃[3-6],植物内生放线菌更多独特的生物学特性将会被发现,也将作为新兴的     

邳州银杏内生放线菌分离、筛选及活性菌株鉴定

【目的】从银杏中分离、筛选得到具有抑菌作用的内生放线菌,为放线菌在生物防治上的应用提供新的菌种资源。【方法】采用组织贴片培养法进行分离,生长对峙法进行筛选。【结果】从银杏的根、茎、叶中分离得到98株、50株、8株内生放线菌(共计156株),47株放线菌具有拮抗植物病原真菌活性。菌株KLBMP 5501抗菌活性最好且具有广谱性,基于形态特征、培养特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列的相似性分析等多项分类特征表明,菌株KLBMP 5501是一株浅紫链霉菌(Streptomyces violascens)。【结论】筛选得到了具有应用潜力的高活性菌株,并进行了菌种鉴定。     

植物内生放线菌多样性研究进展

植物内生放线菌作为植物内生菌资源的一大类,具有丰富的多样性,其次级代谢产物也十分丰富,而且还具有各种生物学活性。通过了解植物内生放线菌资源的多样性,可以对其产生的生物活性物质进行筛选和分析,从而筛选出具有良好药理活性的物质应用于临床。从植物内生放线菌宿主植物、组织分布、种类和数量以及活性基因4个方面综述了植物内生放线菌的多样性资源,介绍植物内生放线菌新的微生物物种,总结了植物内生放线菌目前研究中存在的问题及展望。     

产甾体皂甙华重楼内生真菌、放线菌的分离与筛选

目的:研究重楼内生菌的次生代谢产物的医用价值。方法:从产自四川彭州的华重楼(Paris polyphylla vat．chinensis Franch)地下块茎中分离、筛选内生菌,采用PDA液体培养基26℃发酵培养;发酵液分别经泡沫反应、Salkowski反应、Liberman反应及以薯蓣皂甙元为标准对照的薄层层析分析。结果:表明其中编号为SNUF-1的真菌和编号为SNUA-1、SNUA-2的放线菌菌株均能分泌甾体皂甙或其类似化合物。结论:华重楼内生菌发酵液具有产生宿主药用活性的成份。     

滑桃树内生链霉菌5B发酵产物中的一个新吡唑生物碱

从表面消毒的滑桃树(Trewia nudiflora Linn.)根部分离得到一株内生链霉菌5B,经10升固体YMG培养3周后,从发酵产物中分离得到一个新吡唑类生物碱.该生物碱通过理化性质、NMR及HRMS等波谱数据鉴定为5,6-dihydro-2-isopropyl-4H-pyrrolo[1,2-b]pyrazole.     

滑桃树茎皮的化学成分

从大戟科植物滑桃树的茎皮中分离得到七个化合物,通过波谱分析或与已知化合物进行薄层层析对比,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、胡萝卜甙(2)、蒲公英赛酮(3)、苔色酸乙酯(4)、苔色酸乙酯和甲酯混合物(4和5)、麦角甾-5α,8α-二环氧-22E,24R-6,22-二烯-3β-醇(6)和(2S,3S,4R,12E,2’R)-2-(2’-羟基-二十二碳酰胺基)二十碳-1,3,4-三羟基-12-烯(7)。其中化合物4、5、6和7为首次从该种植物中分离得到。     

从滑桃树种壳中分离到具抗细菌活性的新木脂素(英文)

Five neolignans including four new ones were obtained from the seed endotheliums of Trewia nudiflora L. Their structures were determined to be 9‘-methyl americanol A(1), 9‘-methyl isoamericanol A(2), 9‘-ethyl americanol A(3), 9‘-butyl americanol A(4), and americanin (5). Two acetylated products 3,4-diacetyl americanin (5a) and 3,4,9-triacetyl americanin (5b) had been prepared from compound 5. All of these compounds were investigated on antibacterial assays when carbenicillin sodium, streptomycin sulfate and rifampicin were used as positive controls. Compounds 4 and 5 exhibited antibacterial activities against gram-positive bacterium Staphylococcus aureus and gram-negative bacterium Mycobacterium tuberculosis at the minimum inhibitory concentrations (MIC) of 50μg/mL and 100μg/mE respectively, but 5a and 5b did not exhibit antibacterial activity at 200μg/disk.     

喜树种子内生放线菌的分离鉴定及抗菌活性物质初分离

【目的】探究含有抗肿瘤活性喜树碱的喜树(Camptotheca acuminata Decne.)种子中内生放线菌的多样性,以及从内生放线菌中寻找新型活性化合物产生菌。【方法】利用放线菌富集培养基分离喜树种子内生放线菌,并根据菌落形态及16S rRNA基因序列同源性分析进行菌种鉴定;以及利用与病原微生物共培养方法检测分离菌株的抗菌活性。【结果】从上海交通大学校园的喜树种子中共分离到33株内生疑似放线菌,经基于16S rRNA基因序列分析的分子鉴定,确定其中21株属于链霉菌,1株属于拟诺卡氏菌,另有3株由于序列相似性低于95%而无法分类;8株因未能克隆16S rRNA基因序列而未确定分类。这11株疑似内生放线菌是否是新放线菌(种)类群,有待后续深入研究。初步的抗细菌、真菌活性检测发现,分离到的内生放线菌中42.42%以上对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)有很强的抑制菌核形成的作用,54.54%内生菌有较强抑制芽孢杆菌生长的作用。并且挑选其中具有代表性的菌株Streptomyces sp.CXSZ1进行代谢产物的分析,初步发现其代谢产物中含有抗细菌活性成分。【结论】喜树种子内生放线菌的分离、鉴定及生物活性物质分离鉴定的研究工作,一方面可以为揭示喜树等高等植物种子内生菌的起源、演化等提供有价值的信息,同时也为新结构、新活性化合物发掘提供实验材料。     

四川阿坝不同生境绿绒蒿内生放线菌多样性

【背景】目前国内外对绿绒蒿内生放线菌的研究较为鲜见,利用可培养和免培养的方法可以丰富绿绒蒿内生放线菌资源。【目的】药用植物绿绒蒿生长于高海拔地区,而四川阿坝州生态环境适合绿绒蒿的生长,本研究旨在探究绿绒蒿内生放线菌的多样性及群落结构。【方法】从阿坝州6个不同地理位置采集的药用植物绿绒蒿,经严格的表面消毒后,用可培养和PCR-DGGE技术相结合的方法对其内生放线菌进行分析。【结果】可培养方法分析表明不同器官放线菌数量为根叶茎花;16S r DNA限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)分析将供试菌株分为7个遗传群,系统发育分析表明,绿绒蒿内生放线菌可分为3簇遗传群落,链霉菌属(Streptomyces)为优势菌群,占总数的50%,还包括北里孢菌属(Kitasatospora)和厄氏菌属(Oerskovia),其中茎分离的放线菌多样性最好。不同地理位置的绿绒蒿经过PCR-DGGE技术分析表明,采样点松潘尕力台的根、茎、叶多样性指数最好,红原安曲乡的花多样性指数最好,而同一地理位置绿绒蒿内部组织之间总体来看茎和花的多样性指数最好,通过测序条带系统发育发现绿绒蒿内生放线菌可分为8簇遗传群落,红球菌属(Rhodococcus)为优势菌群,占总数的70%,还包括棒杆菌属(Corynebacterium)、诺卡氏菌属(Nocardia)、微球菌属(Micrococcus)、栖霉菌属(Mycetocola)、微杆菌属(Microbacterium)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)和链霉菌属(Streptomyces)。【结论】绿绒蒿根、茎、叶、花组织中具有丰富的多样性,能够为以后活性物质和药用功效的研究奠定基础。     

Study on the communities of endophytic fungi and endophytic actinomycetes from rice and their antipathogenic activities in vitro

The populations of endophytic fungi and actinomycetes from four rice cultivars in the Panyu district (Site 1) and Wushan district (Site 2) in Guangdong province, South China, were studied. The preponderant endophytic fungi and actinomycetes isolated belonged to Fusarium and Streptomyces respectively. The incidence of Streptomycetes griseofuscus ranged from 36.1 to 69% out of all the different rice cultivars from the two sites. It is the commonest population of endophytic actinomycetes, and constituted the greatest part of all the antagonistic communities. The distributions of endophytic fungi and actinomycetes in roots and leaves were different, endophytic fungi from leaves were diverse, some were organ-specific. More diverse endophytic actinomycetes were isolated from roots than from leaves. The endophytic fungi isolated from rice in Site 2 were more diverse than that in Site 1. The diversity of the endophytic actinomycetes, however, was less than that in Site 1. Acid soil in Site 2 is ideal for the growth and colonization of fungi while the alkaline soil in Site 1 is better for the growth and colonization of actinomycetes. The results suggested that differences in the chemical composition of soil could influence the endophytic microbial communities of rice plants. The endophytic fungi and actinomycetes isolated from poor-growing seedlings and susceptible rice cultivars were more abundant than that the disease-resistant counterparts. In the dual culture and activity detection of the metabolites, 41.2% of all the isolated endophytic fungi showed antagonism to rice pathogens. Fifty percent of all the isolated endophytic actinomycetes were antagonistic to those pathogens. The percentage of Streptomyces griseofuscus and hygroscopicus reached 55.4 and 21.4% of all the active actinomycetes. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

药用植物内生放线菌的生物活性及菌株D62的代谢产物分析

利用琼脂移块法及WST-8法分别对分离自西双版纳药用植物的165株内生放线菌进行了抗菌、抗肿瘤活性测定。结果显示,超过42%的菌株对病原菌表现出拮抗活性,且对病原真菌的总体拮抗活性明显强于土壤放线菌;78%的菌株表现出抗肿瘤活性,且大部分菌株(54.5%)具有强抗肿瘤活性。选取其中对真菌及肿瘤细胞均有高抑制活性的菌株D62,并对其次生代谢产物进行了进一步的研究,共分离得6个化合物,分别是Antimycin A4a(1),Antimycin A7a(2)、Antimycin A2a(3)、Antimycin A1a(4)、10-hydroxy-10-methyl-dodec-2-en-1,4-olide(5)及6-(2-(4-aminophenyl)-2-oxoethyl)-3,5-dimethyl-tetrahydropyran-2-one(6),其中化合物6为新化合物。以上结果表明药用植物内生放线菌作为一类新的微生物资源具有很好的开发潜力。     

连翘和水茄内生放线菌的多样性、活性及生物合成基因的PCR筛查

从采自成都地区的中药植物连翘Forsythia suspense和水茄Solanum torvum的根部分离到14株内生放线菌。活性筛选表明,10株菌的发酵粗提物具有不同程度的抗肿瘤活性,占全部菌株的71%;3株菌具有抗细菌活性,其中菌株A263具有较强的细胞毒活性和广谱抗细菌活性。基于16S rRNA基因部分序列的相似性分析表明,菌株A275属于克里贝拉菌属Kribbella,其余13株属于链霉菌属Streptomyces。多种生物合成基因的筛查实验表明,5株菌同时具有PKS-I、PKS-II、NRPS型基因,其中A255和A263还具有3,5-AHBA合酶基因,但仅A275具有oxyB基因。结果可以推测,链霉菌是这2种中药植物根部的优势内生放线菌,生物合成基因的PCR筛查能极大地弥补传统活性筛选模型的不足,内生放线菌具有产生丰富生物活性化合物的巨大潜力。     

东乡野生稻内生放线菌分离及菌株S123次级代谢产物分析

【目的】从东乡野生稻(Oryza rufipogon)中分离和鉴定内生放线菌,对其进行抗菌活性筛选,并分析高抗菌活性菌株S123的次级代谢产物。【方法】采用S培养基对东乡野生稻内生放线菌进行分离、纯化,并构建16S rRNA基因序列系统发育进化树进行菌株鉴定。以琼脂扩散法和菌丝生长速率法进行抗菌活性筛选,同时设计简并引物检测菌株I型聚酮合酶(PKS-I)基因。对具广谱抗菌活性的菌株S123进行分批大量发酵,运用多种色谱方法对发酵产物进行分离、纯化,利用MS和NMR分析鉴定化合物的结构。【结果】从东乡野生稻中共分离到11株内生放线菌,分别属于链霉菌属(8株)和假诺卡氏属(3株)。其中有8株具有抗菌活性,8株呈现I型PKS阳性。从高抑菌活性菌株S123中分离到化合物Nigericin和17-O-demethylgeldanamycin,其中Nigericin对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及水稻纹枯病菌均有抑制活性。【结论】对东乡野生稻内生放线菌进行了分离、鉴定和抗菌活性筛选,并从中分到两种与I型PKS基因相关活性的化合物Nigericin和17-O-demethylgeldanamycin,为研究东乡野生稻内生放线菌的多样性和次级代谢产物的分离提供依据。     

放线菌环二肽类活性天然产物生物合成研究进展

环二肽(cyclodipeptide,CDP)是一类由2个α-氨基酸缩合而成的最小环肽分子,也可称为二酮哌嗪类化合物(diketopiperazines,DKPs)。CDP具有稳定的DKP环状骨架结构,活性广泛而显著,药用前景良好,发掘意义重大。放线菌是重要的CDP生产菌,同时具有非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase, NRPS)与环二肽合酶(cyclodipeptide synthase, CDPS)两种DKP骨架合成催化酶,并从中发现多种骨架结构修饰酶,研究开发价值巨大。本文系统介绍了放线菌CDP类活性化合物的DKP骨架合成途径及其结构修饰机制两方面的研究工作,以期为新型CDP类天然产物的发掘、新颖CDP分子生物合成机制的阐明及合成生物学设计与应用等领域的研究与实践提供参考。