影响多粘菌素B对绿脓杆菌杀菌效力的主要环境因素的研究

本文通过改变温度,水活度,气体条件和营养含量等影响绿脓杆菌生长的主要环境因素,测定多粘菌素B对绿脓杆菌的最小杀菌浓度(MBC)。结果表明环境因素导致或显著影响绿脓杆菌对抗生素的生态耐受性。实验表明多粘菌素B对绿脓杆菌的杀菌效力,除药物对细菌特有的药理学作用外,还取决于细菌的生长环境。结合冷休克率试验表明,环境影响细菌群体处于分裂状态的菌数。若分裂状态菌数下降表明生长速度减慢。提示了多粘菌素B对绿脓杆菌的效力指数,定量分析可以作为其综合效力作用的表现。以同步培养法确定在单个细胞周期中的抗生素敏感阶段。同时以冷休克率试验资料证明细菌处于分裂状态和幼龄期是其敏感阶段。初步阐述了生长速度缓慢与药物的生态耐受性密切相关。     

测定绿脓杆菌冷休克率方法的研究

本研究基于某些革兰氏阴性杆菌当处于不同生长阶段时对冷敏感性表现不同的现象,建立了绿脓杆菌冷休克率的测定技术,可用于测定群体绿脓杆菌的生长情况。应用该技术,实验群体绿脓杆菌生长各期的肉汤培养物,观察冷休克率变化规律,对照群体细菌生长曲线可见两者有一定程度吻合,同时也有差别,后者主要在于细菌冷休克率峰值出现早于细菌活菌数峰值,而当细菌达到稳定期时,其数量居高不下而后才逐渐降低,此时,冷休克率的降低则迅速而明显,可清楚地表明细菌生长状态,较早地预示群体细菌生长势头。对实验动物及少量烧伤病人创面标本检测的结果表明冷休克率测定有助于检出生长的优势菌群,此点将在机会致病菌的微生物病原性确定方面有一定的应用前景。     

绿脓杆菌群集生长效应

本文通过群集的绿脓杆菌在高盐、酸性培养基上生长试验,抗金黄色葡萄球菌的拮抗试验及冷休克试验,证明了绿脓杆菌群集生长效应。主要表现为群集的绿脓杆菌可以在含10～20%NaCl 的培养基上生长;pH4环境中也可生长。同样条件下,对照几乎均为阴性。分散成单个细胞分布的绿脓杆菌对冷反应敏感,群集则有抗冷休克作用。实验条件下,密集的金黄色葡萄球菌生长对分散的绿脓杆菌有拮抗作用,群集则可抵抗这种作用而生长。讨论中初步分析了群集生长效应的机理和对细菌种群在自然生境中的稳定作用。     

烫伤创面绿脓杆菌定植动态的实验研究

本文从细菌以多细胞生理活动观点出发,以认识定植稳定过程为目的。进行了实验大白鼠烫伤创面绿脓杆菌定植与抗定植动态观察。通过用铁浸染色法对细菌群体结构定量化研究,用糖包被负染法对群体结构内部结构观察,对粘附在组织表面细菌数量的测定,反映结构与粘附力的关系。进一步结合电镜观察及细菌生长状态的分析,证明了烫伤创面上绿脓杆菌群体结构的形成是细菌分裂繁殖所致。通过群体结构,糖包被,粘附力及生长状态的动态观察,表现出与定植的稳定程度呈平行关系,显示其重要性。联系抗定植力研究,表明定植与抗定植的一致性。最后分析了定植三个主要条件,和稳定性定植的三要素。     

测定绿脓杆菌分裂指数反映生长势头的初步研究

本文以细胞生物学理论为基础,细菌细胞发育周期形态和群体细菌分裂相数量的变化为依据,研究了测定绿脓杆菌DI方法。建立了数学模型,分析了生长过程中DI动态。结果表明,DI可较准确地反映细菌生长势头。实验采用同龄细菌选择和同步培养技术,免疫荧光染色,显微镜下直接观察分裂相细菌,并计算其占总菌数的比例。在对数期前DI已上升,开始后迅速达高峰,接近稳定期时已下降到较低水平。与生长速度比较,两者动态基本一致,但DI高峰较早出现77分钟。认为DI与生长速度关系密切,是与细菌生命活动物质交换的三流学说相伴随的一种特殊信息流。     

绿脓杆菌定值,定位,定性检测技术研究

为建立组织内细菌的定植、定位及定性检测方法,实验专用对绿脓杆菌定性、定量培养的DPA培养基,解决了同时定性、定量培养的难题,实验结果表明,同一标本有多个同种细菌生长可判定细菌定植。方法简单、可靠、重复性好。     

绿脓杆菌定值、定位、定性检测技术研究*

为建立组织内细菌的定植、定位及定性检测方法,实验专用对绿脓杆菌定性、定量培养的DPA培养基,解决了同时定性、定量培养的难题,实验结果表明,同一标本有多个同种细菌生长可判定细菌定植。方法简单、可靠、重复性好。     

科学家揭开细菌低温存活之谜

细菌具有强大的环境适应能力,能够在低温条件下存活.有研究表明一种名为"冷休克蛋白"的蛋白质与微生物对冷环境的适应及多种细胞功能有关,是细菌低温存活的关键,但它发挥作用的机制一直是个谜.小分子冷休克蛋白(cold shock protein.,Csps)是微生物在适应低温生长条件下,细胞诱导合成的一系列分子量为7ku左右的蛋白质.冷休克蛋白首先在大肠杆菌中被发现.     

结核分枝杆菌GroEL1蛋白过表达的生理效应分析

为研究结核分枝杆菌热休克蛋白GroEL1在耻垢分枝杆菌中过表达所引发的生理效应,本实验采用透射电子显微镜观察细菌个体形态,并绘制细菌群体生长曲线;药敏试验检测重组耻垢分枝杆菌的药物耐受性;细菌攻毒BALB/c小鼠以检测细菌在体内的存活能力;通过病理切片观察细菌毒力。结果显示,GroEL过表达细菌菌体内核糖体数量显著增加,细菌生长分裂能力及群体适应能力提高,但对常用的一线、二线抗结核药物耐受性无影响。GroEL1过表达有助于延长细菌在宿主体内的生存周期,增强细菌毒力。结果提示,结核分枝杆菌GroEL1蛋白过表达会对细菌体内、体外生长产生明显影响。     

盐胁迫浓度与大麦幼苗生长分裂和遗传损伤的相关性研究

研究盐胁迫浓度与大麦幼苗生长分裂的关系, 实验结果表明:大麦幼苗生长在一定浓度的NaCl 溶液中时, 幼苗生长抑制、叶绿素含量降低, 有丝分裂指数下降, 根尖分生区细胞中具有微核和染色体畸变的细胞明显增多。统计分析结果显示:幼苗的分裂指数、遗传损伤与盐浓度间有很好的线性关系, 有丝分裂指数与处理浓度间呈负相关(p < 0.01), 微核率、染色体畸变率两项指标与处理浓度间呈正相关(p < 0.01)。研究结果表明:大麦幼根有丝分裂指数、微核率及染色体畸变率可以作为监测环境NaCl 的定量指标。     

高产磷酯酶C菌株筛选及其抗血小板功能的研究

在湖北省、湖南省、江苏省、山东省、广东省156个点采土样1268份,利用卵黄琼脂的LB培养基初筛获得产生乳白色晕圈的菌株648株;再用卵黄琼脂滤纸圆片检测获得产生乳白色晕圈和透明圈菌株266株;这些菌株用卵黄琼脂杯蝶法筛选出产生大于13．0mm乳白色晕圈及少量透明圈共73株,经过菌生物量、卵黄杯碟法和抗兔血小板聚集率的测定,从73株菌中筛选出15株,菌号为：183,198,247,424,587,596,692,744,754—1,791—2,779,970,998,1107,1182;将此15菌株经菌生物量、卵黄琼脂杯碟法、NPPC法和抗人血小板聚集率的测定,从中选出754—1,779,970,1107四株菌进行分类鉴定和已知菌CW—W—90—3菌对照比较的研究。     

草鱼人工雌核发育的细胞学观察

运用组织学方法研究了用紫外线辐射处理后的鲤鱼精子诱导草鱼卵子雌核发育的细胞学过程。结果表明精核在卵子内主要有２种变种（１）始终保持固缩状态,不形成雄性原核;（２）形成雄性原核。冷休克处理可破坏卵子第二次成熟分裂的纺锤体。冷休克处理后,室温孵化期卵子内变化有２种（１）卵子内重新形成了纺锤体和纺锤丝,其中部分卵子可排出第二极体;（２）卵子内纺锤体或纺锤丝不恢复。     

微生物冷休克蛋白的生理功能及其潜在应用

冷休克反应是普遍存在于微生物体内的一种适应环境温度骤降的应答机制,而氨基酸序列高度保守的冷休克蛋白则是调控冷休克反应的重要因子。越来越多的研究表明,冷休克蛋白除了调控冷休克反应外,还参与调控了生物体多个性状,如宿主正常生长和分化、病原菌的侵袭力和致病性以及宿主对多种逆境（高渗透压、抗生素）的应答。综述了冷休克蛋白及其来源、其参与调控的生理性状和基于冷休克反应及冷休克蛋白的应用,以期为发酵条件优化、食品储藏、致病菌抑制以及作物性状改良等方面提供有益参考。     

858例血感染患者病原菌分布及耐药情况

目的:通过对某地区中心医院收集的临床血感染患者感染病原菌的分析,了解该地区血感染患者病原菌构成、分布及耐药特点,为临床治疗提供参考和指导。方法:收集2012年6月至2013年8月期间在某院就诊的858例血感染患者血液标本,采用BACTEC9050全自动血培养仪培养,采用VITEK 2 Compack系统和K-B琼脂纸片扩散法对阳性标本进行菌种鉴定和药敏检测。结果:血培养结果显示,在858份血培养标本中共检出阳性标本109份,每份标本都只检出一种病菌,总检出率为12.7%,革兰阳性菌占64.22%(70/109),革兰阴性菌占33.03%(36/109),真菌占0.35%%(3/109);药物敏感试验结果显示:葡萄球菌对青霉素、红霉素和复方新诺明耐药率40%;肠杆菌科细菌对氨苄西林和氯霉素耐药率40%;非发酵菌科细菌对氨苄西林,头孢他啶,头孢噻肟和氯霉素耐药率40%。结论:目前本地区临床血感染患者革兰阳性菌感染率高,以金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌为主,治疗可以首选糖肽类抗菌药物;革兰阴性菌以大肠杆菌和绿脓杆菌为主,对氨苄西林、氯霉素耐药率高,大肠杆菌对头孢类抗生素的耐受较绿脓杆菌低,两种细菌感染治疗可以考虑选择单环-内酰胺类抗生素。及时准确的血培养结果及药敏试验可为临床合理选择抗菌药物提供重要依据。     

乳酸乳球菌中冷休克蛋白基因的高效表达及其抗冻保护作用

[目的]微生物在适应外界环境急剧降温的条件下都会发生应激反应,产生一系列蛋白质被称为冷休克蛋白.冷休克蛋白对乳酸菌适应低温环境和增强抗冻能力方面发挥着重要作用.本文目的是为了研究乳酸乳球菌中冷休克蛋白CspC、CspD的作用.[方法]将冷休克蛋白CspC、CspD基因分别重组到质粒pNZ8148,转化乳酸乳球菌NZ9000后,加入Nisin诱导,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,比较重组菌与空白菌在30℃条件下菌体生长差异及反复冻融活菌数的差异.[结果]得出CspC、CspD的相对分子量分别为7.0、6.2 kDa.[结论]CspC使菌体更加迅速的恢复了生长;冷休克蛋白CspD增强了菌体的抗冻存活率(增加了30～40倍).     

冷休克诱导肿瘤细胞凋亡的动力学特征

应用扫描电镜观察、末端DNA转移酶介导的脱氧UTP缺口末端标记技术（TUNEL）和流式细胞术研究低温冷休克诱导人乳癌细胞系（ZR－75－30）细胞凋亡,并对其细胞凋亡的动力学特征测定、分析。结果显示：－5℃、0℃、4℃冷休克均可诱导ZR－75－30细胞凋亡,但细胞凋亡进程受实验细胞预培养时间;冷休克温度、时间;细胞冷休克后恢复培养时间的影响,这些影响因素具有明显的动力学特征。经过对冷休克诱导ZR－75－30细胞凋亡的动力学特征分析、比较,优选出研究冷休克诱导肿瘤细胞凋亡的实验体系：即细胞经37℃细胞凋亡的动力学特征分析、比较, 优选出冷休克诱导肿瘤细胞凋亡的实验体系：即细胞经37℃预培养36h→冷休克（-5℃24h,0℃36h,4℃48h）→细胞冷休克后于37℃恢复培养18－24h→细胞凋亡检测→检测结果综合分析。应用该实验体系要使细胞凋亡率达50－60％,且重复性尚佳。优化体系的深入研究冷休克诱导细胞凋亡的信号传递及其分子机制提供实验模型。     

温度休克法诱导草履虫的同步分裂

运用细胞周期原理,采用温度休克法,对尾草履虫进行分裂周期同步化的研究,实验中草履虫经过3－5h的处理后,就能观察到大量不同阶段的无性生殖横分裂状态,并获得了大量处于分裂阶段的草履虫。运用这种技术取材容易,获取率稳定,可达61％,可为细胞生理学等领域的研究提供大量的同步分裂个体。     

温度休克法诱导草履虫的同步分裂

运用细胞周期原理,采用温度休克法,对尾草履虫进行分裂周期同步化的研究,实验中草履虫经过3～5 h的处理后,就能观察到大量不同阶段的无性生殖横分裂状态,并获得了大量处于分裂阶段的草履虫.运用这种技术取材容易,获取率稳定,可达61%,可为细胞生理学等领域的研究提供大量的同步分裂个体.     

人转移性胰腺癌细胞系(PU-pan-1)的建立及其生物学特性

PU-pan-1细胞系取材于胰腺癌病人肝转移结节,在体外传代一年余,计75代。该细胞系具有恶性肿瘤癌细胞系生长的特点,分裂指数为3.4％,群体倍增时间为82.9小时,集落形成率为46％,具有腺癌细胞形态及超微结构,染色体众数为64条。PU-pan-1能够在裸鼠再现原标本组织学类型,无支原体污染,能够长期冷冻保存,将为进一步研究胰腺癌的机理提供体外实验模型。     

环境中"活的非可培养(VBNC)"细菌的研究进展

1982年徐怀恕等通过对V.cholerae和E.coli存活规律的研究,首次发现并提出了细菌“活的非可培养”状态(Viable but non—culturable state,VBNC),即细菌处于不良环境条件下,其细胞通常缩成球形(最近许多研究中发现还有些细菌表现为体积增大,细胞伸长),用常规方法培养不能使其生长繁殖,但仍然具有代谢活性,在DNA合成抑制剂的作用下,添加一定量的营养物培养时,这些细胞虽然不能分裂,但仍可以伸长生长,证明其仍然存活,并非死亡。处于VBNC状态的细菌,在一定的条件下可以复苏,并具有潜在的致病性,如V.cholerae即通过这种形式实现越冬。至今已有多种细菌进入VBNC状态的报道,许多G^-菌及某些不形成芽胞的G^ 菌在不良环境条件下都可能进入该状态。这些细菌通过进入VBNC状态,得以渡过难关并存活下来,成为细菌的一种特殊存活形式。现在,细菌VBNC状态已作为微生物学的一个全新概念,受到极大的关注,它对传统的微生态学、食品安全、水质监测、菌种保藏及流行病学研究等均提出了新的挑战,也为人们应用基因工程菌的危险性评估提供了新的认识,本文对环境中VBNC细菌的研究进展进行了综述。