双歧杆菌的耐药性与质粒

目的：研究双歧杆菌的耐药性与质粒的关系。方法 对１７株５种来自微生态制剂的双歧杆菌进行抗生素药敏试验和质粒检测,利用溴化乙锭消除其质粒;比较质粒消除前后耐药性的改变。结果１７株双歧杆菌对氨基糖式类和多肽类抗生素呈强抗性;除１株短型双歧杆菌Ｂ１５７存有２．７Ｋｂ和５．６Ｋｂ两种质粒外,其余菌株均未质粒,消除后持粒的Ｂ１５７株菌对抗生素的敏感性并未改变。结论 此１７株双歧杆菌的耐药性与质粒无直接相关性     

双歧杆菌耐药性与质粒

随着微生态学理论与实践的不断发展,人们对维持正常菌群的生态平衡的重要性的认识越来越深刻［１］。根据微生态学的有关理论,多种活菌制剂已经被开发出来,在临床被用于恢复人体的正常菌群,用来治疗各种因素导致的肠道菌群失调［２］。现就与双歧杆菌活菌制剂研制和临...     

益生芽隐杆菌对抗生素的敏感性及其质粒的检测

采用滤纸片抑菌圈法测定３０株益生芽直菌对１５种抗生素的敏感性。结果９０％菌抗磺胺嘧啶,对其余抗生素大部分菌株敏感。用改良碱裂解法提取３０株菌质粒,只有６１２９菌株含有一个大约４．３ｋｂ的质粒,质粒消除南粒与磺胺嘧啶抗性无关。     

益生芽孢杆菌对抗生素的敏感性及其质粒的检测

采用滤纸片抑菌圈法测定３０株益生芽孢杆菌对１５种抗生素的敏感性。结果９０％菌株抗磺胺嘧啶,对其余抗生素大部分菌株敏感。用改良碱裂解法提取３０株菌质粒,只有６１２９菌株含有一个大约４３ｋｂ的质粒,质粒消除实验证明该质粒与磺胺嘧啶抗性无关。     

双歧杆菌对抗菌素的敏感性

对双歧杆菌属的５０个菌株采用培养液稀释法进行了１０种抗菌素敏感性试验。实验菌株分离自婴儿、成人和各种动物的肠道粪便,厌氧消化器中的污水发酵液等不同来源,以及收集到的国外已定名的菌种共代表至少１３个种。经试验,所有的菌株都抗多粘菌素（ＭＩＣ＝１００～３２００Ｕ／ｍｌ）、链霉素（ＭＩＣ＝８０～１２８０Ｕ／ｍｌ）、新霉素（ＭＩＣ＝４０～３２０Ｕ／ｍｌ）。大多数菌株抗４０～６４０Ｕ／ｍｌ的卡那霉素,较抗庆大霉素。所有的菌株都对红霉素（ＭＩＣ＝０．２～０．８Ｕ／ｍｌ）、万古霉素（ＭＩＣ＝０．２～６．４Ｕ／ｍｌ）和氯     

B-animalisV9质粒检测及抗生素敏感性试验

本实验对动物双歧杆菌Vg（B．animalisvg）菌株进行质粒检测及抗生素敏感性测试。结果表明,Baninalis V9菌株无质粒检出。该菌株对针对G＋菌的抗生素,如青霉素类（青霉素G、氨苄青霉素）和大环内酯类（氯霉素、红霉素）表现出高度敏感;对抑制细菌蛋白质合成的广谱（G＋、G-）抗生素（四环素、利福平、痢特灵）表现出中度敏感;对G-菌的抗生素,如氨基糖苷类（庆大霉素、链霉素）、喹诺酮类（诺氟沙星）及内酰胺类（卡那霉素、丁胺卡那霉素）表现出耐药性;而对广谱抗生素磺胺甲基异嗯唑也表现为耐药。     

抗生素对双歧杆菌影响的观察

本文观察了双歧杆菌对临床常用抗生素的敏感性及其Ｌ型形成和抗生素对动物体内双歧杆菌的影响,发现双歧杆菌对多种抗生素耐药或易形成Ｌ型。动物口服双歧杆菌同时给抗生素,６天后其粪便中仍有大量双歧杆菌或双歧杆菌Ｌ型存在,表明双歧杆菌可通过多种机制逃避抗生素的作用,在机体肠道内长期存在。     

一株双歧杆菌质粒聚合酶基因的PCR扩增和鉴定

目的PCR扩增人双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因。方法用改良型MRS双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离长双歧杆菌,PCR扩增长双歧杆菌质粒聚合酶(Bifidobacterium plasmid polymerase,BPP)基因,对BPP基因检测阳性的PCR产物通过序列分析,进行鉴定。结果人长双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因PCR扩增后,经1.0%琼脂糖凝胶电泳,测得BPP基因的相对分子质量约为1.9 kb。通过BLAST序列比对分析与GenBank中相应基因同源性为96%。结论成功克隆了1株双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因,为构建与双歧杆菌宿主质粒相适应的载体奠定了基础。     

双歧杆菌质粒聚合酶基因表达系统的构建及其鉴定

目的构建可以在双歧杆菌表达外源性基因的系统。方法PCR扩增双歧杆菌质粒聚合酶基因（BPP）并连接至质粒pBS—T以形成重组质粒pBS—BPP。PCR扩增双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的启动子及分泌性信号肽DNA序列（ara）并连接至质粒pBAD—A以形成重组质粒pBAD—ara,然后将增强绿色荧光蛋白（eGFP）基因连接至质粒pBAD—ara以形成重组质粒pBAD—ara—GFP。采用基因重组技术重组含有ara、BPP、eGFP基因序列并可将外源性基因分泌表达于菌体外及锚定表达于细胞壁的质粒pBS—BPP—ara—GFP,激光共聚焦显微镜下观察含有pBS—BPP—ara—GFP质粒及对照质粒的E．coli,验证eGFP定位表达情况。结果所构建的表达系统可以在E．coli中表达eGFP基因。结论通过基因重组方法成功构建了双歧杆菌表达系统,其可将外源基因分泌表达于菌体外。     

一株携带质粒的人两歧双歧杆菌的分离与鉴定

目的:分离携带天然质粒的人双歧杆菌.方法:用自制的改良型Blb双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离双歧杆菌,对初步质粒检测阳性的单菌落通过糖发酵试验、(G C)mol%测定和16S rDNA序列分析,进行菌株鉴定.结果:筛选到一株携带天然质粒的人双歧杆菌,编号B200304,在1.0%琼脂糖凝胶上,测得质粒的相对分子质量约为22 kb.通过对该菌株的形态学观察和糖发酵试验等生理生化特征研究,证明该菌株为两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum);HPLC法测得其(G C)mol%为55.6,16SrDNA序列分析进一步证实该菌株为两歧双歧杆菌.结论:分离得到一株携带天然质粒的人两歧双歧杆菌新菌株.     

灭活双歧杆菌调整小鼠抗生素相关性菌群失调

目的：观察灭活的双歧杆菌及其耗尽培养上清液（SCS）对小鼠肠道生理菌群的影响。方法：应用腹腔注射青霉素造成肠菌群失调动物模型,分别以灭活的双歧杆菌菌液,耗尽培养上清液以及活菌菌液对菌群失调小鼠进行灌胃治疗。结果：活菌组、死菌组及SCS组同自然恢复组的肠道生理菌群相比差异均有显著性,死菌组与SCS组相比,差异也有显著性。结论：灭活的双歧杆菌及其SCS对小鼠肠道菌群失调的恢复具有调整作用,尤其对双歧杆菌和乳酸杆菌有更明显的扶持作用。     

双歧杆菌双元蛋白酸奶中特定菌含量及酸度的检测

目的 :检测双歧杆菌双元蛋白酸奶中发酵前后以及在贮藏期间的双歧杆菌和乳酸菌活菌数及酸度的变化。方法 :应用改良MRS琼脂平板法检测含菌量 ,应用吉尔涅尔度表示酸度 (°T)。结果 :双歧杆菌双元蛋白酸奶中双歧杆菌含量为 3 1× 10 7CFU/ml,乳酸菌含量为 4 1× 10 8CFU/ml;°T为 6 5± 5。随着贮藏进程的延长 ,特定菌的含量随贮藏期进程而下降 ,第 4～ 5天下降明显 ;°T随贮藏期延长而逐渐上升 ,保质期内°T为 75～ 110之间。结论 :双歧双元蛋白酸奶符合酸奶国家GB2 74 6～ 1999标准。     

双歧杆菌防治鼠伤寒沙门菌感染的实验研究

目的　以小鼠为模型,研究双歧杆菌在体内对鼠伤寒沙门菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ,ＳＴＭ） 感染的防治作用。方法　分别用大剂量悉复欢、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ 、生理盐水（ＮＳ） 给三组小鼠灌胃,再用ＳＴＭ 攻击,观察小鼠经上述不同处理前后肠道双歧杆菌数量和ＳＴＭ 攻击后粪便ＳＴＭ 培养阳性率,阳性标本ＳＴＭ 分离值及小鼠ＳＴＭ 感染率;同时用双歧杆菌、悉复欢、双歧杆菌加悉复欢分别治疗ＳＴＭ 感染的小鼠,观察并比较疗效。结果　１． 大剂量悉复欢使用可使小鼠肠道内双歧杆菌明显降低,而双歧杆菌灌胃则肠道双歧杆菌明显增多。双歧杆菌灌胃的小鼠粪便ＳＴＭ培养阳性率、阳性粪便ＳＴＭ 值明显低于用大剂量悉复欢和ＮＳ 的小鼠,小鼠ＳＴＭ 感染发病率也明显较低。２． 对于ＳＴＭ 感染鼠,双歧杆菌与悉复欢联合治疗效果最好。结论　１． 双歧杆菌在体内对ＳＴＭ 有拮抗作用;能预防和减少ＳＴＭ 感染发生;２． 在ＳＴＭ 感染时,先用悉复欢,再用双歧杆菌可以达到预期疗效,双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染有辅助治疗作用。     

短小双歧杆菌对机体几种重要细胞因子诱生作用研究

本实验观察了热杀的短小双歧杆菌对小鼠ＴＮＦ—α、ＩＬ—１、ＩＬ—２等细胞因子的诱生活性的影响。结果表明,短小双歧杆菌腹腔注射后,小鼠ＴＮＦ—α、ＩＬ—１、ＩＬ—２诱生活性显著增强,本文结果提示,短小双歧杆菌可能通过其细胞壁免疫活性成分而发挥免疫调节作用。     

双歧杆菌与乳杆菌对大鼠肠菌群失调的调整作用的初步研究

本试验初步研究了双歧杆菌ＤＭ９２２７菌株及乳杆菌ＤＭ８１２１菌株对大鼠肠菌群失调的调整作用。将含有红霉素及链霉素的抗生素溶液给２０只大鼠灌胃,灌胃量为每种抗生素２００ｍｇ／ｋｇ／日,连续３天。然后将动物分为双歧杆菌及乳杆菌菌液灌胃组及ＰＢＳ灌胃对照组。     

嗜杀酿酒酵母毒素蛋白及其杀伤质粒的研究

Killer toxin from \%Saccharomyces cerevisiae\% SK was isolated by ultrafiltration of culture supernatants and purified by poly(ethylene glycol). The toxin migrates as one single protein band on SDS-PAGE and its molecular weight is 15kD. The SK toxin has the greatest lethal effect on the sensitive yeast strain in the lat lag phase. Extraction and purification of killer heretity factor(dsRNA) from SK found that M dsRNA plasmid and L dsRNA plasmid have different molecular lengths being 1.7kb and 4.0kb.     

双歧杆菌生长和代谢过程的研究

研究了双歧杆菌在两种培养基（牛乳培养基和肉汤培养基）中的生长和代谢的规律,测定了厌氧发酵过程中菌体生长及基质消耗曲线,探索了在发酵过程中流加碱调节ｐＨ值以提高产菌量的途径。     

对双歧杆菌DM9227株的实验研究——Ⅰ.双歧杆菌DM9227株的试管内生物拮抗作用的研究

本文对由健康婴儿分离的双歧杆菌DM9227株进行了试管内的生物拮抗试验。将双歧杆菌DM9227株分别与金黄色葡萄球菌、产毒性大肠杆菌及侵袭性大肠杆菌以一定的比例等量混合接种于PYG液体培养基中进行厌氧培养。试验证明双歧杆菌DM9227株能明显抑制上述3种细菌的生长繁殖,显示出较强的生物拮抗作用。拮抗机制可能与双歧杆菌DM9227株能产生一定量的醋酸和乳酸,降低培养基的pH,从而抑制该3种菌的生长有关。