Nisin生物合成有关基因的遗传分析

乳链菌肽（ｎｉｓｉｎ）是某些乳酸乳球菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）产生的细菌素,是目前发现的各种细菌素中最重要的一种。因其具有较大经济价值而研究最为深入。有关它的理化性质及其应用已有文献报道［１,３］。细菌素这类抗菌物质都是多肽或蛋白质,有分子量小,且结构复杂的特点。Ｋｌｅａｎｈａｍｍｅｒ等［４］依据细菌素的分子量大小,热稳定性及修饰氨基酸等因素,把乳酸菌产生的抗菌蛋白质分为三类：（１）热稳定的小肽（２）热敏感的大蛋白质（３）修饰性多肽。它们的生物合成方式有核糖体合成和非核糖体合成两种。ｎｉｓｉｎ属于修饰性多肽细菌素,羊毛硫细菌素（Ｌａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）的一种,由核糖体合成。对它的研究已从初期的理化性质深入到分子遗传学水平。本文重点介绍ｎｉｓｉｎ的生物合成有关基因的遗传分析     

聚球藻7942高效泌氨突变种的获得及其泌氨、谷氨酰胺合成酶活性、光合和生长

将含有Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣＣ７１２０反义ｇｌｎＡ基因片段的穿梭表达质粒ｐＤＣ－ＡＴＧＳ转化单细胞蓝藻聚球藻Ｓｙｎｅ－ｃｈｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐ．ＰＣＣ７９４２,通过同源重组,外源ＤＮＡ定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Ｓｙｎｅｃhｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｐ．７９４２突变种。将此突变种固定化在聚氨脂泡沫中后,定量测定其谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）活性。结果表明,固定化后的突变藻培养９ｄ后泌氨活性比自由生活的野生藻高１５６倍,ＧＳ活性降低７３．６％;其生长速度与同条件下野生藻相近,７７Ｋ荧光光谱表明突变种固定化后光系统Ⅱ活性提高４４％。     

结核分支杆菌耐链霉素分子机制的研究进展

链霉素（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ,ＳＭ）是一线抗结核药物,本文概要地介绍了结核分支杆菌耐链霉素的分子机制。最近的研究认为大多数结核分支杆菌分离株耐ＳＭ是由于核糖体蛋白Ｓ１２编码基因（ｒｐｓＬ）和（或）１６ＳｒＲＮＡ编码基因（ｒｒｓ）突变所致,少数菌株的耐药机制尚需进一步研究     

白细胞介素—2第17和20位残基在结构功能中的重要性研究

用基因定位突变法,将白细胞介素－２分子中１７Ｌｅｕ和２０Ａｓｐ进行一系列突变,并测定各突变体生物活性与空间结构的变化。分析结果表明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ时,ＩＬ－２的空间结构无明显变化,生物活性却显著下降;２０Ａｓｐ突变的为Ｌｅｕ,以及１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ对调后,均导致ＩＬ－２的空间结构发生变化,并严重影响其生物活性,上述结果说明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ后对活性的影响并非由空间结构变化所引起,而与     

尿激酶原变体（Ser^175—His^187—mscu—PA）的构建及性质

尿激酶原，即单链尿激酶（ｓｃｕ－ＰＡ）是双链尿激酶（ｔｃｕ－ＰＡ）的前体，属于丝氨酸蛋白酶家族，但其内在酶活性高于一般的丝氨酸蛋白酶原。广泛存在于丝氨酸蛋白酶原家族中的Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｓｅｒ酶原三要素在尿激酶原中仅存Ａｓｐ，为了恢复该结构，降低尿激酶原的内在酶活性，利用寡核苷酸介导的定点突变方法，将尿激酶原基因中的特定核苷酸改变，使Ａｌａ＾１７５突变为Ｓｅｒ＾１７５，同时Ｔｙｒ＾１８７突变为Ｈｉｓ     

CD3ε和PMA对fas基因转录调控作用的研究

研究了ＣＤ３ε和ＰＭＡ对细胞凋亡基因ｆａｓ的转录调控作用．根据已知的人ｆａｓ基因５＇上游序列设计引物,用ＰＣＲ法从人胸腺细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ｆａｓ５＇上游长为４４６ｂｐ的启动子片段．将此片段定向克隆到以虫荧光素酶为报告基因的真核细胞表达载体ｐＸＰ２中．经限制性内切酶酶切鉴定及序列测定分析表明此重组表达质粒ＤＮＡ的结构和序列正确．用此质粒（ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ）瞬时转染人ＪｕｒｋａｔＴ淋巴细胞,分析报告基因的表达水平．结果表明ｆａｓ基因上游－５０６到－６０的区域有弱启动子活性,约是阴性对照的１．５倍．抗ＣＤ３ε抗体和ＰＭＡ处理均可增强ｆａｓ启动子的活性,促进报告基因的表达,其虫荧光素酶活性分别是未经处理的ｐＸＰ２－ｆａｓｕｐ转染细胞的１．７倍和３．３倍,但二者没有协同作用．ＰＫＣ的抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ＰＴＫ的抑制剂ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ可抑制ＰＭＡ诱导的ｆａｓ基因转录,使虫荧光素酶基因的表达降至未用ＰＭＡ处理的水平．但ＰＴＫ的另一种抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可与ＰＭＡ发挥协同作用,上调ｆａｓ基因的转录,使虫荧光素酶活性增加到５倍．这些结果为阐明ＣＤ３ε及ＰＭＡ介导Ｔ淋巴细胞激活和凋亡的分子机制     

乳酸链球菌nisk基因与细菌性双成分调节子的研究

本研究通过对乳酸链球菌亚种Ｎ８的Ｎｉｓｉｎｚ结构基因下游基因区的分子克隆、序列分析和ＯＲＦ的检测,揭示出一个属于细菌性双成份调节子系统的基因,ｎｉｓＫ,其起始区略与ｎｉｓＲ末端重叠,并发现ＮｉｓＲ和ｎｉｓＫ同被转录一个多顺反子ｍＲＮＡ。在ｎｉｓＫ编码区后,有一个ρ非依赖性终止子。     

非同位素PCR－SSCP方法的初步临床应用

单链构象多态性检测法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）是近年发展起来的一项检测人类基因组突变的新技术。然而,在该技术中需要使用放射性同位素标记的核苷酸或引物,从而限制了其广泛临床研究及诊断方面的应用。本文报告一种改进的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法,该方法不用同位素标记引物,而直接在溴乙啶染色的聚丙烯酰胺凝胶上显示ＳＳＣＰ。用该方法对５５例平滑肌肉瘤ｐ５３基因第７外显子突变的检测表明,３８％的瘤组织ＤＮＡ存在异常的ＳＳＣＰ。其中１０例有ＨａｅⅢ和ＭｓｐＩ酶切位点的突变（１８％）,１９例有突变型ｐ５３蛋白的过度表达（９例同时有异常ＳＳＣＰ改变）。而ｐ５３质粒ＤＮＡ,平滑肌瘤及Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者基因组ＤＮＡ无ｐ５３基因第７外显子扩增片段的异常ＳＳＣＰ改变。同时,还使用该方法对临床诊断的２０例Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病患者和８例健康对照进行了β－淀粉样蛋白前体基因第１６和１７外显子的扩增及分析,均未发现有异常ＳＳＣＰ改变及ＥｃｏＲＩ,ＢｃｌＩ酶切位点的突变。本研究结果提示,该非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可靠、敏感、简便、快速,具有潜在的推广价值。     

人白细胞介素－2第20位残基局部空间结构稳定位对活性的影响

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法,将人白细胞介素－２（ＩＬ－２）第２０位Ａｓｐ分别突变为Ａｒｇ、Ｌｙｓ．和Ａｓｎ,比较第２０位残基碱性基因对ＩＬ－２活力的影响,结果２０Ａｓｐ突变为碱性残基时,ＩＬ－２活性急剧下降,但突变为Ａｒｇ时所导致的活性下降较突变为Ｌｙｓ严重３０００倍以上,从空间结构变化上对这２个碱性残基造成的如此大的活性差异进行了分析,发现２０Ａｒｇ突变后对。１２１Ｔｒｐ的微环境有极为显著的影响。结果提示２０Ａｓｐ在与β亚基作用的同时,其局部空间结构的稳定对维持ＩＬ－２的生物学活性也有重要作用。     

人胰岛素在甲醇酵母Pichia pastoris中的分泌表达

将猪胰岛素前体基因和在其５’端引入９个氨基酸的间隔肽序列的ＰＩＰ基因插入到Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ的分泌表达质粒ｐＰＩＣ９中,得到分泌表达质粒ｐｐＩＣ９／ＰＩＰ和ｐＰＣ９／ｓｐ－ＰＩＰ７并用以转化ｐａｓｔｏｒｉｓ ＧＳ１１５。用点杂交筛选,获得高拷贝转化Ｐ３９（－ｓｐ）和Ｓ５１（＋ｓｐ）。     

60Co－γ射线诱变钝顶螺旋藻的研究

用不同剂量的＾６０Ｃｏ－γ射线诱变钝顶螺旋藻Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ出发株（Ｓｐ）ＩＳ－９００１０,筛选获得两株抗高光抑制突变株（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０和（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１,然后比较出发株和突变株的一般形态和生理生化特性。出发株和突变株的一般形态有较大的差异,与出发株相比,两个突变株藻丝体显著主烃短,螺旋数目大大减小。出发株是对高光敏感的品系,而突变株表现明显的抗高光抑制,     

人乙型肝炎病毒前表面抗原（preS）基因的突变及其在家蚕细胞中影响 …

为探讨人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前表面抗原（ｐｒｅＳ）基因的表达调控机理,以实现高效表达,利用ＰＣＲ方法在克隆的ｐｒｅＳ基因的第２、３位密码子引入同义突变。消除存在于５端编码区保守的反向重复序列,将ｐｒｅＳ基因及其突变形式（ＭｐｒｅＳ）分别重组到转移载体ｐＢＭ０３０,获得ｐＢＭ－ｐｒｅＳ和ｐＢＭ－ＭｐｒｅＳ。将ｐＢＭ－ｐｒｅＳ和ｐＢＭ－ＭｐｒｅＳ分别与野生型家蚕核型多角体病毒（ｂｍＮＰＶ）ＤＮＡ共转     

白细胞介素－2第17和20位残基在结构功能中的重要性研究

用基因定位突变法,将白细胞介素－２（ＩＬ－２）分子中１７Ｌｅｕ和２０Ａｓｐ进行一系列突变,并测定各突变体生物活性与空间结构的变化。分析结果表明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ时,ＩＬ－２的空间结构无明显变化。生物活性却显著下降;２０Ａｓｐ突变为Ｌｅｕ,以及１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ对调后,均导致ＩＬ－２的空间结构发生变化,并严重影响其生物活性。上述结果说明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ后对活性的影响并非由空间结构变化所引起,而与残基本身性质有关：１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ这两个重要的残基,必须位于各自特定的空间位置,才能发挥其生物作用。     

重组人肿瘤坏死因子α和白细胞介素6融合基因的构建和表达

本文利用ＰＣＲ技术和基因定位突变技术,将编码人肿瘤坏死因子α（ｈＴＮＦα）和白细胞介素６（ｈＩＬ－６）成熟肽的基因通过中间接头连接成编码单一蛋白的基因,构建了融合蛋白表达载体ｐＢＩＴ,并在大肠杆菌中得到了表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的电泳胶薄层扫描显示,融合蛋白的表达量是菌体总蛋白量的２０％,其分子量约为３７ｋＤ。活性检测证实,融合蛋白既有ＴＮＦ活性,又有ＩＬ－６活性。     

大脑皮层神经元上ATP激活的多电导单通道

用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌｌ—ａｔｔａｃｈｅｄ）和内面向外式（ｉｎｓｉｄｅ—ｏｕｔ）,在机械分离的新生大鼠的大脑皮层神经元上,记录到ＡＴＰ激活的单通道电流。按电流幅度可以分为三类,其电导分别为２０ｐＳ、３２ｐＳ和５８ｐＳ,各占全部开放事件数的１２％、６７％和２１％,其中３２ｐＳ为优势电导。三种电导状态之间可直接转换。３２ｐＳ和５８ｐＳ以及３２ｐＳ和２０ｐＳ之间的转换最为常见。结果表明：新生ＳＤ大鼠的大脑皮层神经元上存在ＡＴＰ激活的多电导单通道。     

真核生物核糖体合成的抗菌多肽

原核生物、植物、动物（包括脊椎动物和非脊椎动物）都可以产生由基因编码、核糖体合成的抗菌多肽［１］。已知的核糖体合成的抗菌多肽大部分是最近十几年中鉴定的。８０年代初,Ｓｔｅｉｎｅｒ［２］及Ｓａｌｓｔｅｄ等人［３］首次分离了昆虫的抗菌多肽ｃｅｃｒｏｐｉｎ和ｄｅｆｅｎｓｉｎｓ,从此人们开始关注这类抗菌多肽,研究了它们的遗传免疫性、寄主防御系统、膜蛋白的相互作用、蛋白的修饰和分泌等,从而将这些抗菌多肽研制开发成有应用价值的食品添加剂和药物。原核生物产生的抗菌多肽（ｎｉｓｉｎ）早已广泛应用于食品的防腐保鲜…     

乳链菌肽的特殊结构与功能

乳链菌肽的特殊结构与功能庄绪亮马桂荣（山东大学微生物技术国家重点实验室,济南２５０１００）关键词乳链菌肽细菌素羊毛硫氨酸乳链菌肽（ｎｉｓｉｎ）是目前研究最多的一种细菌素,它由某些乳酸链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃ－ｃｕｓｌａｃｔｉｓ）所产生,含有３４个...     

光合菌SDH2 hupT基因的突变与吸氢酶表达

利用三亲本杂交将自杀质粒ｐＳＥ８引入光合细菌Ｒｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＳＤＨ２０菌株,经过质粒上插入了ｋａｎ＾Ｒ基因的ｈｕｐＴ基因片段与受体基因组同源双交换,构建成ｈｕｐＴ插入突变株ＳＤＨＴ１和ＳＤＨＴ２。     

蛇毒蛋白Echistatin的C端突变基因的构建,表达及其活性研究

通过ＰＣＲ定点突变的技术,将蛇毒蛋白Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ基因的Ｃ端进行了突变（Ａｌａ４８→Ａｒｇ４８→,Ｔｈｒ４９→Ｖａｌ４９）,模拟纤维蛋白Ｎ端的四肽（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｖａｌ）,以期增加Ｅｃｓ（Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ）的活性,突变的基因重组到表达质粒ｐＪＣ２６４上,经ＩＰＴＧ诱导,以ＣｈｅＹ－Ｅｃｓ融合蛋白方式进行了表达,表达量占菌体总蛋白的１５￣２０％,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５初步纯化     

聚球藻7942高效泌氨突变种的获得及其泌氨,谷氨酰胺合成酶活性,光合和生

将含有Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣ７１２０反义ｇｌｎＡ基因片段的穿梭表达质粒ｐＤＣ－ＡＴＧＳ转化单细胞蓝藻聚球藻Ｓｙｎｅ－ｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７９４２,通过同源重组,外源ＤＮＡ定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．７９４２突变种。