基于多种微生物的毒性检测MTOXPlate冻干板制备及优化

[目的]制备基于多种微生物的生物毒性检测MTOXPlate冻干板,从而简化操作程序,使其能更灵敏、方便、快速地进行生物毒性测试.[方法]采用真空冷冻干燥法将指示微生物固定在微孔板中.以存活率为指标,利用荧光分光光度法确定冻干保护剂的组成.通过分析毒性响应灵敏度对检测条件进行优化.[结果]MTOXPlate的冻干保护剂组成为8％海藻糖、2％葡萄糖、2％甘露醇、1％谷氨酸钠.在此组成下,11株菌株的平均存活率最高,可达89.41％.复活介质与测试样品同时加入,在缩短了测试时间的同时也提高了检测灵敏度.该冻干板具有良好的灵敏度和重现性,能较好地满足污染物生物毒性测试的需要.[结论]MTOXPlate冻干板可作为一种新型的生物毒性测试技术,在生态毒理检测领域推广应用.     

益生菌冷冻干燥高活性保护机制研究进展

摄取足量益生菌有助于维持肠道微生物群落的稳态,对维持人体肠道健康具有重要意义。然而,在工业化应用中,益生菌抗逆能力较弱且对储存条件要求高,导致益生菌产品对运输和活性维持条件要求较高,这些产业需求对高活力益生菌的制备工艺提出了挑战。干燥处理常应用于保持益生菌活性和稳定性,其中冷冻干燥技术应用最广泛,但冻干过程中益生菌会受到各类环境压力的刺激,引起细胞损伤甚至死亡。因此,可以显著提高益生菌存活率的冻干保护剂成为目前益生菌工业应用的研究热点。本文从益生菌常用及新发现的冻干保护剂种类及其作用机制进行了系统归纳,对菌株冻干后细胞存活率的影响因素进行全面综述,并对冻干保护剂研究方向进行了展望,旨在为高活力益生菌冻干菌粉的研制提供理论支持。     

冻干神经生长因子活性稳定性试验研究

用不同的物质作保护剂冻干纯化鼠神经生长因子,经检定以人血白蛋白作为赋形剂和保护剂冻干神经生长因子制品外观洁白细腻,结构强度良好,生物活性符合要求,残存水分低于３％。采用留样观察法检测其稳定性,将制品放置４℃～８℃,在０、０．５、１、２、３、６、９、１２、１８、２４、２５个月分别测定其各自的活性。结果表明神经生长因子冻干制品在４℃～８℃保存,２５个月仍然保持原有生物活性     

冷冻水产品生产过程中微生物的监控

水产品的种类及其丰富,而水产品携带的微生物也同样丰富。在我国70%以上的不合格冷冻水产品都是由于微生物超标造成的。微生物的超标不但带来了资源浪费,还严重影响了人们的健康和生命。本文从水产品的微生物携带种类及防控等方面论述冷冻水产品生产过程中的微生物监控,希望把更营养、更丰富、更健康的冷冻水产品带上人们的餐桌。     

活菌制剂冻干保护剂的研究进展

冷冻干燥技术广泛应用于细菌性活疫苗生产和菌种保藏等方面。细菌细胞在冷冻干燥过程中会出现损伤,甚至死亡。通过添加适合的冻干保护剂可以最大程度减小细胞损伤,保持活菌制剂的活力和性能。就冻干过程对细菌的损伤机制、冻干保护剂的作用机理以及保护剂的筛选方法等方面进行了阐述,对活菌制剂保护剂的筛选有所启示。     

海藻糖对双歧杆菌DM8504菌株冷冻干燥保护效果的研究

本文就海藻糖对ＤＭ８５０４双歧杆菌的冻干保护效果进行了研究,考察了海藻糖浓度、保护剂溶液与菌泥混合时间对ＤＭ８５０４冻干存活率的影响,结果证实该保护剂对ＤＭ８５０４双歧杆菌有良好的冻干保护效果,优于其它保护剂。     

水痘疫苗冻干保护剂的改进

明胶是水痘减毒活疫苗中常用的冻干赋形剂组分,是源于动物组织的大分子蛋白质。由于明胶可能引起疫苗接种后的不良反应,且与某些民族的宗教信仰相冲突,近年来WHO建议减少和避免明胶在病毒疫苗中的使用[1]。我国目前在疫苗冻干保护剂方面的研究与国外还有相当大的差距,明胶作为病毒性疫苗的冻干保护剂组分仍然广泛使用,但目前国内还没有相应的药用辅料标准,因此必须尽快建立相应的质量标准;同时还应对疫苗中明胶含量、分布情况、以及对病毒的稳定性研究和替代物等方面进行全面的研究,以便将来在疫苗生产中取消明胶的添加。本文主要对常规使用的冻干保护剂1和不含明胶的冻干保护剂2进行对比,以便筛选出更适合的水痘疫苗保护剂。     

不同冷冻保护剂对早期卵裂期小鼠胚胎冷冻后成活率和发育的影响

为了评价利用不同冷冻保护剂冷冻早期卵裂期胚胎的效果,用小鼠为实验动物,采用慢速冷冻、快速融解的冷冻技术,比较丙二醇、二甲基亚砜和甘油作冷冻保护剂对小鼠2-细胞、4-细胞、8-细胞胚胎冷冻后胚胎存活率和囊胚形成率的影响。发现以丙二醇和蔗糖为冷冻保护剂冷冻4-细胞、8-细胞胚胎,解冻后胚胎成活率和囊胚形成率显著高于以二甲基亚砜或甘油为冷冻保护剂。结果表明,丙二醇是一种冷冻早期卵裂期小鼠胚胎有效的冷冻保护剂。     

病毒活疫苗冻干保护剂筛选研究

为提高冻干病毒性活疫苗的成品滴度和稳定性及提高疫苗生产的出品率,本研究通过对多种保护剂成分如明胶、山梨醇、蔗糖、乳糖、右旋糖苷、精氨酸等及其配比的大量反复筛选试验,已初步选定了数种可供选择并进一步优化完善的冻干保护剂配方。与现行冻干保护剂相比,其疫苗出品率在相同投入下可提高三倍。     

生态制品的冻干及保护剂的应用

生态制品的冻干及保护剂的应用卫生部上海生物制品研究所上海２０００５２姚祖华李亦德生态制品主要由活微生物组成,用于制备生态制品的微生物通常有：双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、酵母菌、大肠杆菌、腊样芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌、类杆菌等。生态制品按其剂型可分为液体型...     

保加利亚乳杆菌冻干保护剂的优化

目的 研究4种常用冻干保护剂的添加量.方法 以保加利亚乳杆菌为出发菌株,以其冻干菌粉活菌数为指标,通过正交试验优化4种常用冻干保护剂的添加量.结果 保加利亚乳杆菌的最佳冻干保护剂配比为乳糖∶谷氨酸钠∶抗坏血酸∶脱脂奶粉=3∶1∶2∶7,其中脱脂奶粉对菌体保护效果极显著(P＜0.01),乳糖对菌体保护效果显著(P＜0.05).结论 通过对保加利亚乳杆菌的4种常用冻干保护剂的添加量进行优化,为保加利亚乳杆菌的冻干工艺提供基础.     

卤虫脱壳卵的液氮冷冻保存研究

作者以甘油、ＤＭＳＯ、葡萄糖和蔗糖为冷冻保护剂对卤虫脱壳卵进行了液氮冷冻保存研究．各保护剂对短期吸水发育的胚胎有一定的冷冻保护作用,在本实验条件范围内,高浓度保护剂较低浓度保护剂好,双重保护剂（甘油＋ＤＭＳＯ、葡萄糖＋蔗糖）冷冻保护作用较单一保护剂效果好。饱和ＮａＣｌ溶液对各发育时期的胚胎均有较好的冷冻保护作用,但对后期胚胎的冷冻保护作用较弱。作者认为胚胎内冰晶的形成是卤虫脱壳卵冷冻致死的主要原因。冷冻保护剂对卤虫脱壳卵的冷冻保护作用可能与它们的脱水作用有关。     

“白色农业（微生物农业）”与农业可持续发展

介绍了白色农业(微生物农业)的含义、特点、应用领域及发展白色农业(微生物农业)的优势。阐明了白色农业(微生物农业)在改造农业产业结构、提高农产品品质和改善农业生态环境方面的作用,以及“白色农业(微生物农业)”在微生物饲料、微生物肥料、微生物农药、微生物食品、微生物能源和微生物生态环境保护剂等方面取得的研究成果。     

仔猪副伤寒活疫苗中耐热保护剂应用相关参数的研究

【目的】研究并确定耐热保护剂在仔猪副伤寒活疫苗中应用的各参数,为制备细菌耐热保护剂活疫苗提供参考。【方法】将耐热保护剂与制苗菌液等体积混合,分别采用3种常用冻干曲线(1、2、3)进行冻干,抽样检测确定耐热保护剂配套冻干曲线。在确定合适冻干曲线的基础上,进一步研究耐热保护剂与不同菌龄菌液(发酵培养12、15、18和21 h)、不同浓度菌液(菌液终浓度分别为3×1010、5×1010和7×1010 CFU/m L)、不同感作时间(分别作用0、24和48 h)、耐热保护剂的不同保存时间(2-8°C分别保存0、10、20、30和40 d),以及不同分装量(2、3和4 m L)等多种不同参数对疫苗质量的影响。【结果】配套冻干曲线研究表明,曲线2冻干的产品性状、活菌存活率与耐老化指标效果最好;菌龄研究表明,37°C发酵培养18 h(位于对数生长末期或稳定前期),其冻干菌存活率达78%-81%,优于其它时间;配苗试验表明,菌液适宜终浓度为3×1010-5×1010 CFU/m L;最适感作时间为2-8°C感作24 h,冻干菌存活率可达85.3%-90.5%;耐热保护剂保存期试验表明,2-8°C保存40 d与0 d(配制当日)的保护剂冻干效果基本一致;配苗分装量试验表明,7 m L西林瓶中分装3 m L或4 m L,其冻干菌存活率与2 m L基本一致,但耐老化试验中活菌存活率比2 m L略高。【结论】收获发酵培养18 h的菌液、配苗终浓度采用3×1010-5×1010 CFU/m L,使用2-8°C保存40 d内的耐热保护剂,让保护剂与制苗用菌液2-8°C感作24 h,采用3-4 m L进行定量分装,按曲线2冻干为制备仔猪副伤寒耐热保护剂活疫苗的适合参数。     

德氏乳杆菌DM8909冻干工艺及产品稳定性研究

益生菌制剂的生产 ,除菌种的遗传特征影响其产品稳定性因素外 ,发酵、分离、冻干、分装等多个生产环节都会影响其产品稳定性。本文介绍德氏乳杆菌 DM890 9菌株冻干保护剂的筛选及产品稳定性及菌种稳定性的研究。1　材料与方法1 .1　菌种　德氏乳杆菌 DM890 9( L actobacillus de-brueckii subsp.lactis) ,由大连医科大学微生态学研究所提供。1 .2　设备　离心机采用日立公司生产的 CR- 2 2连续流式离心机 ;冷冻干燥设备采用美国 FTS sys-tems公司生产的 Dura- stopμp型冷冻干燥机。1 .3　保护剂　脱脂奶粉、谷氨酸钠、海藻糖、乳糖等…     

四种冷冻保护剂对小鼠2-细胞胚胎渗透性和毒性作用的比较

作为胚胎冷冻保存的基础性研究,冷冻保护剂的渗透性和毒性研究非常重要.本试验选用1,2-丙二醇、甘油、乙二醇和二甲基亚砜4种常用冷冻保护剂,对小鼠2-细胞胚胎进行渗透性和毒性研究.结果显示:1.5 mol/L的1,2-丙二醇、乙二醇和二甲基亚砜冷冻保护剂对2-细胞胚胎的渗透性显著高于甘油保护剂;4种冷冻保护剂对细胞膜的完整性没有影响;1.5 mol/L的乙二醇、1,2-丙二醇和甘油保护剂处理后的2-细胞胚胎的囊胚发育率和孵化率与对照组胚胎比较差异不显著(P>0.05),但显著高于二甲基亚砜处理后的2-细胞囊胚发育率和孵化率(P<0.01).结果表明:在4种冷冻保护剂中,乙二醇和1,2-丙二醇适合于小鼠2-细胞胚胎冷冻保存     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F（ab）2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18 F(ab′)2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18 F(ab′)2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(＜3%)、复溶时间(＜10 s)、纯度(＞95%)及稳定性没有影响.研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18 F(ab′)2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据.     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F(ab′)2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18 F(ab′)2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18 F(ab′)2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(＜3%)、复溶时间(＜10 s)、纯度(＞95%)及稳定性没有影响.研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18 F(ab′)2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据.     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F(ab')_2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18F(ab')2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18F(ab')2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(<3%)、复溶时间(<10s)、纯度(>95%)及稳定性没有影响。研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18F(ab')2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据。     

冻干前处理对双歧杆菌存活率影响的探讨

目的探索提高双歧杆菌菌体存活率的方法。方法分别考察冻干前处理的三种因素(菌泥暴露于空气中的时间、保护剂的温度以及混合时间)对青春双歧杆菌菌体存活率的影响。结果菌泥直接暴露于空气中,对双歧杆菌的存活有较大的影响,生产过程应尽量缩短暴露于空气中的时间;预先冷却到5~10℃的保护剂比常温的保护剂的保护效果更好;适当延长保护剂的混合时间,让保护剂充分渗入菌体内,能显著提高双歧杆菌的冻干存活率。结论冻干前处理对青春双歧杆菌存活有显著影响,缩短菌泥暴露于空气中的时间、保护剂预先冷却、适当延长混合时间可以有效保持菌体的存活率。