新疆花椰菜花叶病毒(63-3毒株)的初步研究

1963年在新疆石河子的甘兰留种植株分离到的病毒(63—3),鉴定为花椰菜花叶病毒的一个毒株：致死温度75—80℃,体外存活期7一14_天,稀释限点1：3000一5000,寄主范围限于十字花科植物。甘兰上初呈明脉,后期病状隐蔽;花椰菜上是明脉;大白菜和萝卜上是明脉和枯纹。病毒是球状,直径50毫微米。挑蚜和甘蓝蚜可传病。 63—3(花椰菜花叶病毒),和新疆的孤丁一号(芜菁花叶病毒),新疆的萝卜环斑病毒(萝卜花叶病毒)的抗血清之间无反应,三者之间也没有相互保护作用。     

侵染菠菜的芜菁花叶病毒鉴定

菠菜病毒分离物Ta-1可侵染甘蓝等8科25种植物,但不侵染心叶烟。病汁液和芜菁花叶病毒抗血清呈阳性反应。光学显微镜下观察到受病毒侵染的细胞内有不定形内含体。从超薄切片见到细胞质中有风轮状内含体存在。电镜观察其粒子形态为均一的线状病毒,大小为700—760×10—12.5nm。部分提纯病毒紫外吸收呈典型核蛋白吸收曲线。SDS—PAGE法测得病毒外壳蛋白亚基分子量为35,500。     

菜豆黄色花叶病毒(BYMV)—新疆苜蓿分离株的鉴定

从新疆苜蓿黄斑花叶病株上分离到病毒分离物M-4,该分离物能引起多种豆科值物系统花叶,并在藜科植物上产生局部褪绿斑,易经汁液摩擦接种和蚜虫传毒,不经菜豆种子传毒。病毒致死温度60—65℃,体外保毒期4—5天,稀释限点10~(-3)—10~(-4)。病毒粒体线状,长约660—740nm,宽15nm;在感病的寄主叶片细胞中,电镜观察到风轮状、带状和环状内含体。免疫电镜法测定,该分离物与菜豆黄色花叶病毒(BYMV)抗血清有血清反应。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸自动分析仪分析分别测得该病毒的衣壳蛋白亚基分子量为16,200道尔顿,氨基酸残基数128个。鉴定结果认为,分离物M-4是BYMV的一个株系。     

青鱼肾脏(正常和患出血病)的组织学与超微结构的初步观察

本文报道了正常和患出血病的6～7月龄青鱼(Mylopharyngodon piceus)肾脏组织学光镜和电镜观察结果。在光镜下,青鱼的正常肾脏结构与草鱼等淡水鱼类极为相似。当青鱼患出血病时,肾脏的管腔上皮细胞变形,细胞核萎缩。此时,通过电镜观察,可以在细胞质内的线粒体中观察到大的空泡,同时在造血组织的包涵体中能清楚地看到病毒颗粒。病毒颗粒呈球形,直径为50—56毫微米,颗粒中央并具有一电子密度较高、直径为25—30毫微米的核心,在核心周围包有约16毫微米的外膜。     

齿兰环斑病毒的鉴定及其抗血清的制备与应用

根据病毒生物学特性、粒体形态和血清学性质等初步确定从在厦门地区种植的表现为褪绿、褐色坏死斑症状的卡特兰(Cattleya)病株上分离的一个病毒分离物为齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspotvirus,ORSV)。通过摩擦接种6科27种(或品种)指示植物,结果其中4科8种(或品种)表现症状,与烟草花叶病毒不同;理化性质试验表明稀释限点为5×10-5,致死温度为92℃～94℃,体外存活期超过3个月。提纯病毒为长约300nm,宽约18nm杆状粒体。SDS-PAGE电泳分析表明其外壳蛋白分子量约为17kDa。该分离物与ORSV抗血清具有强阳性反应、而与TMV抗血清反应微弱,认为该病毒为ORSV分离物。用纯化病毒免疫家兔,成功地制备出特异性抗血清,并通过Dot-ELISA法对厦门地区种植的兰花病株进行了检测研究。     

齿兰环斑病毒的鉴定及其抗血清的制备与应用

根据病毒生物学特性、粒体形态和血清学性质等初步确定从在厦门地区种植的表现为褪绿、褐色坏死斑症状的卡特兰(Cattleya)病株上分离的一个病毒分离物为齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV).通过摩擦接种6科27种(或品种)指示植物,结果其中4科8种(或品种)表现症状,与烟草花叶病毒不同;理化性质试验表明稀释限点为5×10-5,致死温度为92℃～94℃,体外存活期超过3个月.提纯病毒为长约300nm,宽约18nm杆状粒体.SDS-PAGE电泳分析表明其外壳蛋白分子量约为17kDa.该分离物与ORSV抗血清具有强阳性反应、而与TMV抗血清反应微弱,认为该病毒为ORSV分离物.用纯化病毒免疫家兔,成功地制备出特异性抗血清,并通过Dot-ELISA法对厦门地区种植的兰花病株进行了检测研究.     

芝麻病毒病害研究：Ⅱ.芝麻黄花叶病病原鉴定

继对芝麻矮化坏死病源研究之后,又对普遍发生的芝麻黄花叶病害分离物(YMo—I)进行了系统鉴定。该分离物普遍存在于各芝麻主产区,普通年份发病率为1～5％。YMo—I侵染芝麻引起叶片褪绿及黄绿相间花叶。摩擦接种能够侵染4科12种(品种)植物。局部侵染苋色藜、昆诺藜;系统侵染大豆、花生、望江南、克氏烟等。该病毒能够由桃蚜、花生蚜、大豆蚜以非持久性方式进行传播。ELISA检测其病株种子带毒率为0.5％,但尚未发现种生病苗。病毒在组织汁液中存活期3天;钝化温度55～60℃,稀释限点4×10~(-3)。提纯病毒为弯曲线状粒体,大小约为13×730nm。并有极易凝聚的趋势。病组织中诱导大量典型PVY第一亚组的风轮形和卷筒状细胞质内含体和少数多边形结晶核内含体。血清学上该病毒与花生条纹病毒(PStV)、西瓜花叶病毒—2(MMV—2)密切相关,与花生斑驳病毒、大豆花叶病毒弱相关;与芜菁花叶病毒不相关。但它不侵染WMV—2的寄主—黄瓜,并且该病害田间的发生流行与芝麻、花生的间作方式以及PStV在花生田间的流行密切相关。根据上述结果,YMo—I分离株被鉴定为花生条纹病毒的一芝麻分离株。     

芝麻病毒病病原研究——Ⅰ.芝麻矮化坏死病害的鉴定

在湖北武昌芝麻上分离到的矮化坏死分离物(DNe-I)侵染芝麻引起严重矮化,叶片皱缩坏死。它能够摩擦接种侵染7科14种植物。在苋色藜、千日红上引起局部坏死斑,侵染油菜和百日菊引起系统花叶和黄化。DNe-I能够被桃蚜、花生蚜以非持久性方式进行传播。病毒体外稳定性状:存活期4天,钝化温度60～65℃,稀释限点4×10~(-4)。提纯病毒为线状粒体,长度为770nm。病毒外壳蛋自为单一亚基组成,分子量为30,700±600D。制备抗血清微量沉淀法测定其效价为1:256。在油菜病组织中,观察到风轮状及长直片层叠聚体类型的胞质内含体。在血清学性质上,该分离物与芜菁花叶病毒密切相关,与花生轻斑驳病毒和花生斑驳病毒弱相关,与大豆花叶病毒和西瓜花叶病毒不相关。基于上述性质,DNe-I被鉴定为芜菁花叶病毒。这是国内芜菁花叶病毒自然侵染芝麻的首次报道。     

芝麻花叶病的病毒病原鉴定

从患芝麻花叶病的病叶中提纯了一种线条状病毒颗粒,长700～800nm,宽13nm。经汁液摩擦接种可感染心叶烟、大豆,甜菜等9种植物,不感染西瓜,苋色藜、豇豆等。主要传毒介体是发生在芝麻田的桃蚜。病土、病种均不传病。该病毒与西瓜花叶病毒、芜菁花叶病毒及马铃薯Y病毒的抗血清无反应。超薄切片中可见到风轮形和纸卷形的圆柱状内含体以及结晶状内含体。结晶状内含体分布在细胞质和叶绿体中,其它内含体均见于细胞质中。同时,细胞质中还可见到大量聚集的线状病毒颗粒。初步认为此病毒可能是马铃薯Y病毒群中的一个新成员,暂称为芝麻花叶病毒。国内外均未见报道。     

引起番茄坏死病的黄瓜花叶病毒TN分离物的研究

从南京郊区田间番茄坏死病株中分离出黄瓜花叶病毒ＴＮ分离物,经人工接种１０科３９种植物,能侵染其中的８科２６种,接种番茄,辣椒和普通烟都引起坏死症状。ＴＮ分离物的失毒温度为５０℃,稀释限点５×１０￣（－３）－５×１０￣（－４）,体外存活期１－２天。蚜虫以非持久性方式传毒,经免疫双扩散测定,ＴＮ分离物与黄瓜花叶病毒抗血清呈阳性反应。用差速离心提纯的病毒粒子经电镜观察为廿面体,直径为２８ｎｍ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析病毒外壳蛋白为单一组份,分子量２７５００Ｄ。病毒核酸组份分析发现,该病毒分离物含有ＣＭＶ基因组核酸和一个低分子量的卫星ＲＮＡ。以上结果同已报道的引起番茄坏死的带卫星ＲＮＡ的黄瓜花叶病毒株系一致（Ｋｅａｒｎｅｙ,Ｃ．Ｍ．１９９０;Ｊｏｒｄａ,Ｃ．１９９２）。本文还讨论了该病害的发生和流行。     

新疆伊犁地区侵染蚕豆和三叶草的豌豆花叶病毒的鉴定

从伊犁地区采集的蚕豆花叶病和三叶草花叶病植株获得的病毒分离物,经接种子鉴别寄主,可系统侵染蚕豆、三叶草、豌豆,局部侵染苋色藜和菜豆。可通过蚕豆蚜进行非持久性传播,不通过种子传播。电镜下,病毒粒体呈线条状,平均长度为756nm。在汁液中的热钝化温度是55℃。体外存活期3天。在感病蚕豆叶超簿切片中,可观察到风轮状内含体。血清反应结果证明,该病毒与马铃薯Y病毒、菜豆黄色花叶病毒和菜豆普通花叶病毒有一定相关性。根据上述特性认为,从伊黎地区蚕豆花叶和三叶草花叶植株得到的病毒分离物,为豌豆花叶病毒(PMV)。     

马赛病毒上海分离株的分离和全基因组分析

马赛病毒是一种感染棘阿米巴的大型双链DNA病毒,在世界各地都有这类病毒的分离报道。本研究从上海地区环境土壤样品中分离了一株马赛病毒。该病毒可以高效地感染棘阿米巴,病毒颗粒呈典型的二十面体结构,直径大约在0.25μm,基因组为368kb。病毒基因组DNA序列分析结果表明,该病毒属马赛病毒科的A系马赛病毒,与欧洲、澳大利亚等地报道的病毒株相似度极高。通过与分离自全球不同地区的另外四株马赛病毒比较发现大部分病毒基因都处于负选择,说明马赛病毒的核心基因非常保守并且足以支持病毒在不同地区的适应性。     

分目扇舟蛾颗粒体病毒DNA与杨扇舟蛾颗粒病毒DNA限制性内切酶酶解图谱的比较

现已发现分目扇舟蛾颗粒体病毒与杨扇舟蛾颗粒体病毒可发生交叉感染,本文用限制性內切酶EcoR-I酶切,在琼脂糖凝胶上分目扇舟蛾粒体病毒DNA呈现出22条片段带谱;杨扇舟蛾颗粒体病毒DNA呈现出15条片段带谱.以λDNA作参照,求得分目扇舟蛾颗粒体病毒DNA的分子量为90×10~6d;杨扇舟蛾颗粒体病毒DNA的分子量为58×10~6d。结果表明分目扇舟蛾颗粒体病毒与杨扇舟蛾颗粒体病毒是不同的病毒株。     

新疆石河子地区印度麻花叶病植株病毒分离物的鉴定

1984年,从新疆石河子农学院实验站印度麻花叶病植株上,分离到一株病毒分离物Sc-1,经汁液摩擦接种试验表明,它可以侵染10种豆科植物和2种藜科植物。在印度麻、蚕豆、豌豆、箭舌豌豆、扁豆、山藜豆、田菁和红三叶草上引起系统花叶,在豇豆上产生局部枯斑和系统花叶,在苋色藜、昆诺藜上表现为系统黄斑。失毒温度为55～60℃,稀释限点10~(-3)～10~(-4),体外保毒期3～4天。可经汁液和蚜虫传播,不通过种子传毒。病毒粒体为线条状,大小为13～15×750nm。光学显微镜检查可见,病叶表皮细胞内形成不定形的内含体。电镜下可见风轮状、环状内含体。分离物Sc-1与菜豆黄色花叶病毒(BYMV)抗血清呈阳性反应。我们将Sc-1归为菜豆黄色花叶病毒(BYMV),且为豇豆株系。     

枣刺蛾颗粒体病毒的初步研究

从枣刺蛾(Iragoides conjuncta Walker)幼虫虫尸中分离到一株颗粒体病毒,颗粒体为椭圆形、卵圆形,约200—250×300—400毫微米,颗粒体在2％NaOH溶液中降解,能游离释放出杆状病毒粒子,病毒粒子两端圆滑,多数微弯,约150—200×30—35毫微米。室内感染3龄幼虫的LC_(50)为1×10~(-4·36),野外用3000—5000倍病虫尸匀浆液喷洒,枣刺蛾幼虫下降可达86—100％,杀虫效果比化学农药马拉硫磷好。此株病毒对扁刺蛾、褐边绿刺蛾、枣尺蠖、家蚕、柞蚕和瓢虫无致病性,该病毒的分离获得为枣刺蛾的综合防治提供了一种安全有效的新方法。     

菜白蝶的一种新病毒I.病毒的分离、鉴定

从菜白蝶罹病死亡的幼虫里,分离到两种昆虫病毒。一种足巳知的颗粒体病毒;另一种是无波诎膜的非包涵体病毒,病毒外壳呈典型的六角形,廿面对称体,粒子直径大小约25亳微米,衣壳山许多壳粒(Capsomer)构成,完整和空壳病毒粒于的外周有12个壳粒围绕,壳粒中空。一些病毒粒子有着明显的核心(Core),核心球形,直径大小约15毫微米。 提纯的病毒经0 01％吖啶橙(Acridine orange)染色,在荧光显徽镜下观察呈红色荧光。它能够单独感染,使菜白蝶幼虫致病,有很高的毒性。试验证明这株非包涵体病毒为菜白蝶的一种新病毒。     

应用菜粉蝶颗粒体病毒单克隆抗体对不同株病毒进行抗原分析

应用杂交瘤技术,以大菜粉蝶颗粒体病毒(pbGV)、菜粉蝶颗粒体病毒北京分离株(prGV-801)、武汉分离株(prGVw1-78)和济南分离株(prGV-J)等4株病毒为抗原,获得9株杂交瘤细胞(Fr1～9)。ELISA测定细胞培养上清抗体效价最高达8000,腹水效价最高达450000。9株杂交瘤细胞所分泌的抗体,各呈现株或组特异性,其中pr1～4分别与4个毒株起反应,pr5～8可与2～3个毒株起反应,而Pr9则与所有4个毒株均起反应。据此,认为这4个毒株有抗原性差异。不同毒株间抗原性的差异不仅存在于病毒粒子上,而且也存在于颗粒体蛋白上。讨论了昆虫病毒单克隆抗体在鉴别病毒抗原性差异,生物防治和流行病学研究中的意义。     

北京苜蓿花叶病毒H-10分离物的研究I．病毒的生物学测定、提纯及其理化性质

从苜蓿上经单斑分离得到H-10分离物,经生物学鉴定和电镜下形态、大小的观察以及理化性质的分析,确认为苜蓿花叶病毒(AMV)。在芸豆和豇豆上只产生局部坏死斑而无系统病状。致死温度50--55℃,l 0分钟,体外存活(室温下)12-24小时,稀释限点2×10-3一10-3,蚜虫传,等电点4．60。提纯制品在电镜下呈现五种颗粒,其宽度大致相等,约18—20nm, 但长度分别为58、45、37、29nm,第五种最小颗粒近球形,直径为18—20nm。病毒经分析超离心后出现四个主峰,其沉降常数分别为97S、87S、77S和675;经3％凝胶电泳后虽可检出16个组分,但其中四个组分是主要的。初步认为这四个组分即B M、T6和Ta。     

花椰菜花叶病毒及其作为载体的应用

除了Ti质粒以外,植物DNA病毒也是潜在的植物基因工程载体,目前已发现的植物DNA病毒仅十几个,分属子花椰菜花叶病毒组(Caulimovirus)和双联体病毒组(Geminiv irus)花椰菜花叶病毒组由于其DNA为双链,可直接从纯化的病毒粒子中得到,更为分子生物学家所关注。对该组病毒的代表--花梆菜叶病毒(Cauliflower Mosaic Virus CaMV)的病毒学,生理学已有了较深入的研究,近十几年来对其遗传背景研究也有了引人注目的进展。Hohn小组成功地以该病毒为载体,克隆了256bP的二氢叶酸还原酶基因,并在植物中表达成功。CaMV还为植物基因工程提供了强的启动子。     

侵染西番莲属(Passiflora)植物的五个黄瓜花叶病毒分离物的特性比较

从紫果西番莲（Ｐａｓｉｆｌｏｒａｅｄｕｌｉｓ）、杂交种西番莲（Ｐ．ｅｄｕｌｉｓＸＰ．ｅｄｕｌｉｓｖａｒ．ｆｌａｖｉｃａｒｐａ）、黄果西番莲（Ｐ．ｅｄｕｌｉｓｖａｒ．ｆｌａｖｉｃａｒｐａ）、转心莲（Ｐ．ｃａｅｒｕｌｅａ）及龙珠果（Ｐ．ｆｏｅｔｉｄａ）分离到的５个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物（ＰＥ、ＰＥ２、ＰＥｆ、ＰＣ、ＰＦ）所作的生物学性质、理化特性和血清学关系的比较研究结果表明,５个分离物在寄主反应及血清学性质上存在不同,而在病毒粒体形态、体外抗性、蚜虫传毒和病毒外壳蛋白分子量方面无明显差异。根据５个分离物的寄主反应和血清学关系,可将其区分为ＣＭＶ的两个亚组,其中ＰＥ、ＰＥ２、ＰＣ和ＰＦ属ＣＭＶ亚组Ｉ,ＰＥｆ属ＣＭＶ亚组Ｉ。