Met-Lys-双C肽人胰岛素原基因的构建表达及分离纯化

应用 Ｐ Ｃ Ｒ 定点突变方法构建编码 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ 双 Ｃ 肽人胰岛素原基因,并在大肠杆菌中以包含体方式获得表达 表达产物经还原、重组、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 分离纯化,获得 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ 双 Ｃ 肽人胰岛素原,经胰蛋白酶与羧肽酶 Ｂ的酶解, Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔ Ｍ Ｑ 阴离子交换柱层析分离制备得人胰岛素,其放免活性、受体结合活性均与猪胰岛素相同      

大熊猫乳酸脱氢酶同工酶H_4的分离纯化和某些性质的研究

采用８－（６－氨己基）－氨基－５＇－ＡＭＰＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析法和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析法从大熊猫心肌中分离纯化出了乳酸脱氢酶同工酶Ｈ４．纯化的大熊猫ＬＤＨ－Ｈ４,比活为４４５Ｕ／ｍｇ蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＰＡＧＥ,等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其亚基分子量为３６０００,等电点为５．４５．经测定大熊猫ＬＤＨ－Ｈ亚基Ｎ端被封闭,Ｃ端氨基酸残基经测定为Ｌｅｕ．氨基酸组成分析表明每个亚基含有５个Ｃｙｓ,９个Ｍｅｔ．     

蛇毒蛋白C激活物的初步研究

目的：研究蝮蛇毒蛋白Ｃ激活物的分离纯化与理化性质。方法：经ＤＥ５２－纤维素、ＣＭ－Ｓｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０、Ｇ－７５柱层析,从安徽芜湖产蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｈａｌｙｓ）蛇毒中纯化一种均一的蛋白Ｃ激活物（ＰＣＡ）。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量约为１５５０００Ｄａ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测定等电点为４．８。它能使人血浆的ＫＰＴＴ明显延长,显示出强烈的抗凝活性。通过中和试验与显色肽定量实验表明,     

马氏钳蝎毒素中多肽BmK4112的分离纯化和一级结？…

对马氏钳蝎粗毒中多肽进行分离纯人级鉴定。应用凝胶过滤、离子交换和ＨＰＬＣ的反相色谱方法分离纯化样品。应用二疏基苏醇（ＤＴＴ）还原,碘乙酸保护法对纯化样品进行修饰,修饰样品经酶解后应用Ｅｄｒｎａｎ降解法,并结合ＥＳＩ－ＭＳ法和串联质谱法（ＭＳ－ＭＳ）分析肽的序列。比较修饰前后的质谱,测定分子中的二硫链数目。分离纯化工获得多肽ＢｍＫ４１１２,其一级结构为ＴＰＹＰＶ ＮＣＫＴＤ ＲＤＣＶＭ ＣＧＬＧＩ     

鸭肫平滑肌肌球蛋白经α－糜蛋白酶轻微酶解及其Mg~（2＋）－ATP酶性质的改变

用α－糜蛋白酶对鸭肫平滑肌肌球蛋白进行有限酶解,使肌球蛋白重链的电泳双带变成单带。酶解后肌球蛋白与正常肌球蛋白相比,肌动蛋白激活的磷酸化肌球蛋白的Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活力在低Ｍｇ２＋离子浓度时反而较高。从酶解后肌球蛋白溶液中只分离到１个４．２ｋｄ的小肽段。氨基酸组成测定及荧光胺末端标记实验提示,该小肽段酶切自平滑肌肌球蛋白重链ＳＭ１的Ｃ末端。     

鸭肫平滑肌肌球蛋白经α—糜蛋白酶轻微酶解及其Mg^2＋—ATP酶…

用α－糜蛋白酶对鸭肫平滑肌肌球蛋白进行有限酶解,使肌球蛋白重链的电泳双带变成单带。酶解后肌球蛋白与正常肌球蛋白相比,肌动蛋白激活的磷酸化肌球蛋白的Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ活力在低Ｍｇ＾２＋离子浓度时反而较高。从酶解后肌球蛋白溶液中只分离到１个４．２ｋｄ的小肽段。氨基酶组成测定及荧光胺末端标记实验提示,该小肽段酶氏自平滑肌肌球蛋白重链ＳＭ１的Ｃ末端。     

抗吗啡活性肽的分离纯化及一级结构测定

报道了一种新的具有抗吗啡镇痛活性的肽的分离纯化,并进行部分一级结构测定．狗脑先经醋酸提取,冷冻成干粉,然后上ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０和Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ．Ｆ柱,最后经ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化,鉴定纯度后,测定其抗吗啡镇痛活性,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测得其分子量为８．９ｋＤ．氨基酸序列分析测得该肽的Ｎ端序列为：Ｖ－Ｉ－Ｓ－Ｖ－Ａ－Ｄ－Ｗ－Ｔ－Ｑ－Ｉ－Ｆ－Ｔ－Ｍ－Ｒ－Ｙ－Ｆ－Ｉ－Ｔ－Ｇ－Ｙ－Ｈ－Ｑ－Ｄ－Ｙ－Ｘ－Ｇ－Ｌ－Ｈ－Ｉ－Ｇ．经部分一级结构同源序列检索,未见与此有同源的蛋白质的报道,暂命名该肽为ＣＣ４肽     

人神经生长抑制因子β结构域的高效表达及性质研究

神经生长抑制因子（ Ｇ Ｉ Ｆ）是一种特异存在于哺乳动物脑中的金属硫蛋白（ｍ ｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ, Ｍ Ｔ）类似物,又称 Ｍ Ｔ Ⅲ．它与 Ｍ Ｔ 有相同的结合 Ｚｎ（Ⅱ）, Ｃｄ（Ⅱ）, Ｃｕ（Ⅰ）等金属的能力,但与 Ｍ Ｔ 不同的是它能够抑制神经细胞的生长,并发现在患 Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ（ Ａ Ｄ 症）病人的大脑中 Ｇ Ｉ Ｆ蛋白量和ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的量均显著下降,研究证明 Ｇ Ｉ Ｆ对神经细胞的抑制活性主要存在于其 β结构域中．为进一步研究 β结构域结构和功能的关系,将 β结构域的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆入融合表达载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ ４ Ｔ １ 中, Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱导并高效表达了 β结构域蛋白,通过氨基酸组成和质谱的测定,证明得到了目的蛋白．利用金属重组的方法,分别得到了结合 Ｃｄ 和 Ｚｎ 的 Ｇ Ｉ Ｆ 的 β结构域,并测定了其巯基和金属含量对蛋白量的比值,证明所得 Ｇ Ｉ Ｆ β与 Ｍ Ｔ β在结合金属能力上十分相似．用紫外光谱学的研究表明, Ｃｄ Ｍ Ｔ 的 β结构域在２５０ ｎｍ 处比 Ｃｄ Ｇ Ｉ Ｆ 的 β结构域有一明显肩峰,从而表明二者的金属—巯基结合簇的结构有明显不同,而这种结构上的差异有可能导致二者在功能上的不同．     

竹叶青蛇毒血小板聚集剂的分离纯化及生化特性

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ阴离子交换柱层析及Ｓｕｐｅｒｏｓｅ－１２凝胶过滤,从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为６８０００左右．等电点为４．３．测定了它的氨基酸组成,对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂．     

大肠杆菌表达的重组细胞色素P—450nor的分离纯化

用ＤＥ－５２纤维素柱色谱法和ＦＰＬＣ法分离纯化了大肠杆菌表达的重组缣孢菌色素Ｐ－４５０ｎｏｒ，经梯度洗脱ＭｏｎｏＱ纯化后的ｆＲ．Ｐ－４５０ｎｏｒ为单一色谱峰，比活达５５．２０Ｕ／ｍｇ、纯化倍数约为１１００倍，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测为单一谱带。     

胰岛素原C肽作用机制

Ｃ肽是胰岛素原中连接ＡＢ两条链的连接肽。在胰岛 β细胞分泌颗粒中 ,胰岛素原经蛋白酶裂解 ,形成等摩尔由ＡＢ链组成的胰岛素和Ｃ肽 ,然后分泌并进入血液。Ｃ肽的种族差异很大 ,其中人Ｃ肽含 31个氨基酸。在胰岛素原分子中Ｃ肽对胰岛素原分子的折叠、二硫键的正确配对等分子结构的形成起重要作用 ,而血液中游离Ｃ肽的生理功能却一直不清楚。近来的研究发现 ,给予Ｉ型糖尿病大鼠超生理剂量的人Ｃ肽配伍胰岛素治疗 ,能防止血管、神经机能障碍[1] ,长期 (3个月 )给予胰岛素配伍Ｃ肽 ,可使Ｉ型糖尿病病人减少尿白蛋白排泄率 ,改善肾功能和自主…     

杜仲皮中抗真菌蛋白的分离和特性研究

从杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ）皮中分离纯化到一种新的抗真菌蛋白（ＥｕｃｏｍｍｉａＡｎｔｉｆｕｎｇａｌＰｒｏｔｅｉｎ）,简称ＥＡＦＰ。将切碎的杜仲树皮用ＮａＣｌ溶液在组织捣碎器中高速匀浆提取,经硫酸铁沉淀、ＣＭ一ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ离子交换层析和Ｂｉｏ一ｇｅｌ一ｐ一１０凝胶层析纯化。如此纯化而得的ＥＡＦＰ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶片上显示一条分子量为５．０ｋＤ的单一带。反相ＨＰＬＣ显示４样品是纯的。等电聚焦电泳测得其ｐＩ值大于１１．０。经还原和氨酰羧甲基化处理,用ＨＰＬＣ层析证明ＥＡＦＰ为单链。用酚一硫酸法未测出其含糖。ＥＡＦＰ是简单单链蛋白。氨基酸组成分析结果表明它宫含Ａｒｇ、Ｃｙｓ和Ｇｌｙ,不含Ｍｅｔ,Ｌｙｓ,Ｔｒｐ,Ｈｉｓ和Ｐｈｅ。未经热变性或ＳＤＳ处理的ＥＡＦＰ与考马氏亮蓝试剂不发生显色反应。手工Ｅｄｍａｎ降解法测得Ｎ一端３个氨基酸残基的顺序为Ｇｌｙ一Ａｓｐ一Ａｌａ。用羧肽酶Ａ和Ｂ酶解ＥＡＦＰ测得其Ｃ一末端为Ｖａｌ．０．３ｍｇ／ｍＬ蛋白明显抑制木霉、小麦赤霉菌、烟草黑茎病菌和棉花枯萎病菌菌丝的生长。蛋白在沸水中保温３０ｍｉｎ活性不变。     

反相高效液相色谱法制备HMC毒素纯品

本文采用反相高效液相色谱纯化制备了从玉米小斑病病菌Ｃ小种（ＨｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｒｉｕｍｍａｙｄｉｓＲａｃｅＣ）分离出来的毒素ＴｏｘｉｎＩ,经ＮＭＲ的结构分析证实此制备物纯度较高,达到结构分析要求。用氯仿提取含有ＨＭＣ的毒素培养滤液,经过多次ＴＬＣ展层层析（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝９：１）,刮取具有侵染活性的部分（Ｒ_ｆ＝０．４）溶解在小体积甲醇中备用。色谱柱为Ｗａｔｅｒｓ（制备型２５０ｍｍ×１０ｍｍ）填料为ＹＷＧ－Ｃ１８反相柱,粒度１０ｕｍ,流动相选用甲醇：水５５：４５     

用日立L－8500氨基酸分析仪测定明胶中的蛋氨酸、蛋氨酸砜及蛋氨酸亚砜

明胶中微量的蛋氨酸（Ｍｅｔ）、蛋氨酸砜（ＭｅｔｓｏＮ）以及蛋氨酸亚砜（ＭｅｔｓｏＸ）的含量测定是研究感光材料的科研人员十分关心的问题,多年来没有一个较好的测定方法。本文介绍了利用Ｌ－８５００氨基酸分析仪在测定明胶中其他氨基酸的同时准确地测定Ｍｅｔ、ＭｅｔｓｏＮ及ＭｅｔｓｏＸ的含量,方法简便、快速、准确。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

菜豆炭疽菌有性态研究

在引起菜豆炭疽病的Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｌｉｎｄｅｍｕｔｈｉａｕｍ（Ｓａｃｃ．ｅｔ Ｍａｇｎ．）Ｂｒ．ｅｔ Ｃａｖ．大量培养物中,发现一个在低温培养保存中丧失产生分生孢子能力而仅产生子囊壳的菌系。对其形态学、培养特征、单子囊孢子培养的研究及与有关种的形态比较结果表明,这个源于分子孢子的子囊菌培养物是菜豆小丛壳Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｌｉｎｄｅｍｕｔｈｉａｎｕｍ Ｓｈｅａｒ。这个培养物经人工接     

层粘连蛋白受体单克隆抗体抗原性质的鉴定

层粘连蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）在癌细胞转移中具有重要作用。ＬＮ－Ｒ的单克隆抗体对于癌转移的基础研究及诊治应用都具有重要意义。本文旨在确定来自人肺巨细胞癌（ＰＧ）细胞ＬＮ－Ｒ的一种单克隆抗体（ＭｃＢ１）的抗原性质。经纯化的ＭｃＢ１能与完整细胞表面、细胞质膜提取物及纯化的ＬＮ－Ｒ制品特异性结合。实验证明经亲和层析纯化的ＬＮ－Ｒ制品中含有膜糖脂,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及转移电泳将其所复合的膜脂去除后,仍具有与ＭｃＢ１结合的活性,表明此ＭｃＢ１所针对的抗原与其复合的膜糖脂无关。将含ＬＮ－Ｒ的细胞膜提取物经ＰｒｏｎａｓｅＥ消化后,用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０分离出的糖肽具有与ＭｃＢ１结合的活性,而不含糖的肽则无此活性。含ＬＮ－Ｒ的细胞膜提取物经高碘酸氧化不同时间,其与ＭｃＢ１结合的活性随氧化时间的延长而逐渐减弱乃至完全丧失;而经还原性烷基化反应的ＬＮ－Ｒ仍保持了与ＭｃＢ１结合的活性。用衣霉素（ＴＭ）处理细胞,细胞则丧失了与ＭｃＢ１结合的能力。以上几方面的结果一致证明此ＭｃＢ１的抗原表位确为ＬＮ－Ｒ的糖链部分。     

金顶侧耳多糖PC—4的结构确定与抗肿瘤活性的研究

３％氯乙酸浸提过的金顶侧耳子实体中分离纯化另一水溶性多糖ＰＣ－４。该多糖分子量经为１８９ｋＤ。纸层析与气相层析分析表明其为单一聚糖。经高磺酸氧化,Ｓｍｉｔｈ降解,甲基化,层析,气质联机分析,核磁其振（Ｈ－ＮＭＲ,１３Ｃ－ＮＭＲ）谱及红外光谱测定等,可确定Ｃ－４的主链结构由β－（１→３）糖苷键相连的葡萄糖构成,部份残基Ｃ６,上带有分支。约每５个糖残基有两个侧链,侧链仅为１个葡萄糖残基。     

重组人a2b型干扰素的纯化与鉴定

采用单克隆抗体亲和层析一步纯化法对大肠杆菌表达的重组人ａ２ｂ型干扰素进行了纯化,然后利用凝胶过滤高压液相层析、ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和Ｎ端２５个氨基酸的序列测定等方法对纯化产品进行了鉴定。表明一步纯化的ＩＦＮ－ａ２ｂ达到９５％以上的统一计划,其比活性为２．５４×１０×８ｕ／ｍｇ．但重组ＩＦＮ－ａ２ｂ产品Ｎ端不均一,含有约３０％的去Ｍｅｔ分子和约７０％的带Ｍｅｔ分子。从蛋白质序列的水平上证实,本     

甲基单胞菌Methylomonassp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的…

Ｍｅｙｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌ ＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分,经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明的酶由