蛋白质溶液可逆热变性及其与肽链构象关系的研究

用微量扫描量热技术及远紫外圆二色谱研究了蛋白质水溶液的浓度和ｐＨ对蛋白质热变性可逆性的影响及其与在热变性时肽链构象的关系。结果表明,当蛋白质溶液的浓度为０．０４％、ｐＨ为３时可实现完全可逆的热变性,然而蛋白质溶液宏观上的热变性并不意味着微观上蛋白质分子肽链的完全伸展。     

L-乳酸脱氢酶热变性的热力学研究

用差示扫描量热法对L-乳酸脱氢酶的热变性进行了研究(温度扫描范围为290—390K,酶蛋白溶液浓度为0.28—0.72mg蛋白/mg溶液)。实验观察到当酶溶液浓度在0.62—0.72mg蛋白/mg溶液范围内有一个吸热转变,酶溶液浓度小于0.62mg蛋白/mg溶液时有两个未完全分开的吸热转变。 这个酶的量热焓与范德霍夫焓的比远大于1,而接近于2,这表明乳酸脱氢酶的变性过程不是一个简单的两态转变,从热力学和吸热峰的形状、大小分析,可以推断乳酸脱氢酶分子是由两个以弱相互作用相连结的合作结构区组成,而每一个结构区是由两个相互作用很强的亚基组成。也就是说乳酸脱氨酶的变性过程包括两个半独立的合作结构区的转变,每一个结构区的转变都近似一个两态转变,ΔHeal与ΔHvh的比值是随着两个半独立部分相互作用的增强,即蛋白浓度的增加而减小。随着蛋白浓度的减小,蛋白质周围水分子增多,酶分子中两个半独立部分的相对独立性增强,这可由热谱图上一个吸热转变变成两个半独立的转变得到证实。     

热耐受机制

热耐受机制郭兴中（第二军医大学病理生理教研室,上海２００４３３）关键词热休克蛋白,翻译,前体ｍＲＮＡ剪接对有机体在细胞水平上对不利环境反应的研究多数集中在热休克反应,它以热休克基因的表达,热休克蛋白（Ｈｓｐｓ）合成的短暂、迅速、大量增加及正常基因表达...     

生物膜曲度形成机制的探讨

细胞及其内部的细胞器均是由生物膜包被的。很多膜结构的特异形状是由膜的不同曲度引起的。诱导膜曲度的因子非常多,但往往都使用相似的原理。本文总结了生物膜曲度形成的几种主要机制,包括脂质成分组成的影响、细胞骨架的牵引、蛋白质的疏水性插入,以及蛋白形成脚手架维持曲度等。另外,有些蛋白质虽然本身不诱导曲度,却可以感应膜的曲度。这些曲度的形成机制在细胞生命活动中经常会交互综合产生作用,以确保细胞器塑形、囊泡发生及细胞自噬等重要过程的正常进行。     

热休克反应中蛋白质合成抑制的机制

热休克反应中蛋白质合成抑制的机制郭兴中徐仁宝（第二军医大学病理生理学教研室,上海２００４３３）关键词热休克反应翻译剪接生物体在不利环境如热休克等各种应激情况下,细胞内分子水平的反应主要是热休克蛋白基因的大量、快速、短暂地表达,因而产生大量热休克蛋白（...     

两种微量热技术定量检测蛋白质与化合物相互作用的特色比较及相互验证

分子互作技术通过检测蛋白质和其他物质相互作用的特性,如亲和力常数等探究分子间相互作用的机制。其中,等温滴定微量热技术(isothermal titration calorimetry,ITC)和微量热泳动技术(micro scale thermophoresis,MST)在分子互作定量检测中广泛应用。本文以一种磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,P1)和药物分子盐酸特拉唑嗪(terazosin hydrochloride,TZ)之间的相互作用检测为例,运用ITC和MST技术顺利获得实验结果并可相互验证,同时对两种检测技术的优势和不足进行了深入探讨,为不同条件下检测方法的选择提供了新的思路。     

荧光热漂移实验体外检测核小体的解聚

核小体是真核生物染色质的基本组成单元。核小体的解聚可以动态调控诸如DNA复制、转录、重组等以DNA为模板的生物学过程。特定荧光探针分子与蛋白质疏水残基结合后可被激发荧光信号。荧光热漂移（fluorescence thermal shift,FTS）是一种利用该原理检测温度上升时蛋白质变性过程的方法。本文以Widom 601序列为DNA模板,盐透析法体外装配核小体;分别在实时荧光定量PCR仪的VIC和TAMRA通道激发下,利用FTS检测了核小体在Tris-NaCl（TN）缓冲液和HEPES缓冲液中的解聚状态。研究结果发现,DNA对照序列在TN缓冲液中产生的背景噪声较大,VIC通道激发下组蛋白八聚体产生的荧光信号相对较强。FTS检测核小体的结果显示,随着温度的上升核小体的解聚过程分为2个阶段,～71℃和～84℃是核小体解聚速度最快的温度范围,而75℃～80℃是降解速度较慢的阶段。基于FTS基本原理,本研究发展了一种新颖的可用于检测核小体结构稳定性的方法,为核小体与染色质结构相关问题的研究奠定了一定的技术基础。     

酵母双杂交筛选心脏cDNA文库中与人热激蛋白70相互作用的蛋白质

目的:利用酵母双杂交系统从人心肌cDNA文库中筛选与热激蛋白70(HSP70)相互作用的蛋白质。方法:从人心脏cDNA文库扩增Hsp70基因,克隆于pGBKT7载体上,酶切鉴定及序列分析,并检测pGBKT7-Hsp70酵母细胞AH109中的自激活活性;将构建的酵母表达诱饵质粒载体pGBKT7-Hsp70转化AH109酵母细胞,与转化有人心脏cDNA文库的酵母Yl87进行交配实验,筛选与HSP70相互作用的蛋白质,通过一对一的回复杂交实验排除假阳性,对阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。结果:构建了"诱饵"质粒栽体pGBKT7-Hsp70,并证明其在酵母双杂交系统中无自激活活性,筛选得到多个与Hsp70相互作用的阳性转化子,并最终得到HSP70的1个相互作用蛋白质HIP。结论:应用酵母双杂交系统筛选出与HSP70相互作用的1个蛋白质,它们的相互作用可能与HSP70发挥细胞分子伴侣作用有关。     

热适应形成中的神经化学机制:热适应兔脑室灌流液降低肛温的效应

侧脑室前角和导水管埋有导管的雄性灰兔39只,随机分为供液组和受液组。供液兔经热锻炼适应后在高温和常温下的脑室灌流液,给受液兔进行脑室灌流。结果发现:能使受液兔常温下灌流60min时的肛温降低,分别比灌流人工脑脊液对照低0.5℃和0.4℃;使高温下灌流60min时的肛温上升减慢,分别较对照低0.3℃和0.33℃,与供液兔自身热锻炼适应后所能提高的耐热能力相近。而未热锻炼和初次热应激供液兔的脑室灌流液,对受液兔的肛温无明显影响。这表明热适应后的脑室液中,出现了能诱发未热适应兔产生相似热适应效应的、降低肛温的神经活性物质——致热适应因子(heat acclimato-inducing factor)。从而揭示了在脑中枢的特定部位,存在促进热适应形成的神经化学机制;并讨论了该神经活性物质可能是一种多次。     

肝豆状核变性类似杂合丢失现象的报告及可能机制探讨

对39个家系45个病人及60例正常人的ATP7B基因的几个外显子采用8～10%的非变性丙稀酰胺胶进行SSCP分析, 并对异常者测序（放射自显影）, 发现一个家系的8号外显子上同时存在两个突变(C2250G和G2273T),患者属纯合子,其父为杂合子,母亲和妹妹为正常, 类似“杂合丢失现象”。提示在除了肿瘤之外的体细胞遗传病中,二次突变理论也可能是突变发生的机制之一。 Abstract：　 Screen for mutation in many exons with 45 Wilson disease patients in 39 Chinese families by SSCP and nucleotide sequence analysis by autoradiograph. There are two mutations in exon 8 of a patients family: C2250G and G2273T. Found in these two mutation points, the patients father is a heterozygote, patients mother and sister are normal sequences, and patient is a homozygous. It just like a loss of heterogyzosity in this family with Wilson disease. The patient and her parent sibship were confirmed by taternity test with microsatellite vWF SE33 AR and D9S112. The result suggested that Loss of heterozygosity (LOH) is probable mutate mechanism of hereditary disease besides tumor and cancer.     

脱血红素细胞色素c对DMPG膜的插入研究

气－液界面单分子层实验发现鸡心脱血红素细胞色素ｃ对ＤＭＰＧ单分子层表现出很强的插入能力,这种插入能力受亚相溶液离子强度的调节。通过傅里叶变换红外光谱对鸡心脱血红素细胞色素ｃ与ＤＭＰＧ脂质体的作用进行了进一步研究,对磷脂不同区域的红外光谱分析表明鸡心脱血红素细胞色素ｃ不仅与ＤＭＰＧ头部存在静电相互作用而且与其疏水部分也存在相互作用。     

蛋白质表面疏水性的研究

用Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｕｐｅｒｏｓｅＨＲ５／５疏水柱在ＦＰＬＣ仪上测定了一些蛋白的表面疏水性。在被测量的蛋白样品中,细胞色素Ｃ的亲水性最强,胰凝乳蛋白酶的疏水性最强。说明蛋白质的疏水性与其表面性质密切相关,而与蛋白质的分子量、疏水残基总数并不直接相关;去辅基细胞色素Ｃ和Ｃ端缩短的金黄色葡萄球菌核酸酶与天然态比较疏水性变化很大。疏水柱层析还用于监测在低浓度胍的作用下蛋白质的构象变化。以Ｎ－乙酰酪氨酸为模型化合物探测盐酸胍对疏水柱结合能力的影响,在０４Ｍ胍存在时,Ｎ－乙酰酪氨酸在疏水柱上的结合能力略有减弱,但核糖核酸酶Ａ的变化较大,表明胍引起的蛋白质的微小构象变化有效地引起其表面性质的变化;在０．１—０．３Ｍ盐酸胍存在时,甘油醛－３－磷酸脱氢酶表面疏水性明显增大,并伴随聚合态的出现。说明在低胍作用下,酶分子发生的构象变化,导致天然态内埋疏水面的暴露,暴露的疏水面间的相互作用是形成聚合的主要原因。     

ON THE MECHANISM OF OUABAIN INHIBITION OF SYNAPTOSOME PROTEIN SYNTHESIS

Abstract— Ouabain (200μ m ) inhibited incorporation of radiolabelled leucine or glycine into the protein of neonatal synaptosome fractions but had minimal effect on preparations from adult rats. Leucine uptake into synaptosomes was rapid but not influenced by 200μ m -ouabain in contrast to ouabain inhibition of [¹⁴C]glycine and [¹⁴C]γ-aminobutyric acid uptake. Ouabain blocked the Na⁺ -dependent (stimulated) component of synaptosome fraction protein synthesis in the presence of 25m m -K⁺. Ouabain inhibition was not alleviated by addition of ADP or ATP. 100μ m -atractylate failed to influence [³H]leucine uptake or incorporation. Synergistic inhibition by ouabain was observed with the cycloheximide-sensitive component of protein synthesis and the chloramphenicol sensitive phase. Increasing the medium Ca²⁺ concentration stimulated protein synthesis and this stimulated component was inhibited by ouabain. Ouabain inhibition was associated with decreasing intraterminal K⁺ concentration and [K]_i was linearly related to the protein synthesis rate in control and ouabain treated preparations.     

三种金属硫蛋白聚合体的疏水性相互作用研究

通过分子表面的计算考察了三类金属硫蛋白（大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ,兔肝金属硫蛋白亚型Ⅰ和Ⅱ）二聚体短聚体中组成单元之间的疏水性相互作用。计算结果表明二聚体和三聚体中各组成单元之间均可以形成较好的几何匹配。对于二聚体而言,单体和单体之间存在一定的疏水性相互作用,但作用力 三聚体中,单体和二聚体之间的疏水残基能通过好的空间匹配形成很强的疏水性相互作用。对于这三种金属硫蛋白,二聚体中单体和单体之间的疏水性相     

野生罗汉果蛋白质成分的研究

对野生罗汉果的蛋白质和氨基酸进行了试验,从野生罗汉果的水解产物中检出了18种氨基酸,其中8种为人体必需的氨基酸。     

鸡胚活性蛋白研究

鸡胚经加热除去杂蛋白,用水提取,活性蛋白含量为1mg/mL。测得SOD活性24μ/mL,25℃保存半年后活性仍保留75％.鸡胚活性蛋白对光照还原法产生的O(?)有较好的清除能力,对Fenton反应产生的·OH清除能力远高于甘露醇。对酪氨酸酶有强烈抑制。用上述提取液配制的霜剂经试用,均感皮肤柔软光滑,有祛斑、减轻面部皱纹的功效,无过敏反应。     

苦瓜性别分化的特异蛋白质研究

对苦瓜（ＭｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａＬ．）的两性期和雌、雄花早期发育过程中的３个时期花蕾,用毛细管电泳法进行可溶性蛋白质分析,发现了一些与性别分化有关的特异蛋白质。其中１１ｋＤ的蛋白质从幼雌花时期开始出现后,在雌花发育的３个典型时期都存在,很可能是雌花分化程序表达中的一种“关键蛋白”。与之类似,３０ｋＤ的蛋白质很可能是雄花程序表达中的一种“关键蛋白”     

甜茶蛋白质成分的研究

对甜茶的蛋白质和氨基酸进行了试验,从甜茶水解产物中检出了18种氨基酸,其中8种为必需氨基酸。     

ON THE MECHANISM OF ELECTROSHOCK-INDUCED INHIBITION OF PROTEIN SYNTHESIS IN RABBIT CEREBRAL CORTEX

Abstract— The mechanism of electroshock (ES)-induced inhibition of protein synthesis in rabbit cerebral cortex has been investigated by using a cell-free system. The protein biosynthetic activity of the post-mitochondrial supernatant (PMS) obtained from the cerebral cortex of ES-treated animals was found to be markedly lower than in controls (C). This inhibition was accompanied by a decrease of polysomes and an increase of monomers. In addition, a relative increase in light polysomes was evident at short intervals after ES treatment. No difference was found in the total soluble activity and in the activity of the elongation factors and ribonuclease present in the cell sap of C and ES animals. The biosynthetic activity of ES-total. free and membrane-bound ribosomes was approx 45% lower than that of the corresponding C fractions: polysome/monomer ratios were similarly reduced. The total content of cortical ribosomes was not affected by ES. Following ES treatment there was no change in the ribo-somal ability to elongate, terminate and release polypeptide chains, nor a decrease in the polysomal content of poly(A)-containing mRNA. These data strongly suggest that the ES-induced inhibition of protein synthesis results from a defect in the initiation process. The possible mechanisms mediating this defect have been discussed.