多发性骨髓瘤患者实验室指标分析及在临床诊断中的意义

目的探讨血清蛋白电泳、免疫固定电泳(IFE)及免疫球蛋白(Ig)定量实验的检测在临床诊断多发性骨髓瘤(MM)中的意义。方法对我院2011年1月~2015年10月收治的95例多发性骨髓瘤患者采用法国Serbia全自动毛细管电泳仪及琼脂糖电泳仪进行血清蛋白电泳和免疫固定电泳检测,采用西门子BN-Ⅱ特定蛋白仪对血清免疫球蛋白定量进行检测。结果 95例MM患者中,血清蛋白电泳检出M蛋白者81例,占85.3%。血清免疫固定电泳技术均检出M蛋白的存在,检出率为100%;分型结果:IgG型比例最高,其次为IgA型和轻链型,IgM型最少见。血清免疫球蛋白定量检测,95例MM患者中,相应类型的Ig水平明显升高,其余免疫球蛋白水平正常或降低。结论血清蛋白电泳、免疫固定电泳及免疫球蛋白定量等相关实验室检查,对提高MM的确诊率有重要的价值。     

免疫固定电泳检测对浆细胞肿瘤相关肾损害的诊断价值

目的:探讨免疫固定电泳(immunofixation electrophoresis,IFE)检测对浆细胞肿瘤相关肾损害的诊断价值。方法:回顾性分析我院肾病科665例住院患者的免疫固定电泳分型结果及检出M蛋白带的患者骨髓检查结果。结果:665例肾病科患者中检出44例单克隆免疫球蛋白带,检出率6.6%,其中IgG型24例(κ型6例,λ型18例),IgA型10例(κ型6例,λ型4例),IgM型2例(均为κ型),单纯轻链κ型2例,单纯轻链λ型6例;此44例患者经骨髓检查,38例确诊为多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM),2例确诊为巨球蛋白血症(waldenstrom macroglobulinemia,WM),骨髓涂片中骨髓瘤细胞比例均≥10%;骨髓瘤细胞10%的4例,诊断为意义未明单克隆免疫球蛋白血症(monoclonal gammopathy of un-determined significance,MGUS)。结论:免疫固定电泳检测可对浆细胞肿瘤相关肾损害提供重要的诊断和分型依据,值得临床应用。     

免疫固定电泳在诊断多发性骨髓瘤中的作用

目的 探讨分析免疫固定电泳在诊断多发性骨髓瘤（MML）中的作用。方法 以2014年10月至2016年10月丽水市人民医院收治的110例需进行免疫固定电泳检测的患者为研究对象,对其进行血清M蛋白和浓缩尿中M蛋白的检测,筛选出两种检测均显阳性的患者,并将检测结果与临床资料相比较,对比血清M蛋白和浓缩尿中M蛋白的检测阳性与多发性骨髓瘤之间的关系。结果 110例需进行免疫固定电泳检测的患者中,经临床资料分析,有34例患者为多发性骨髓瘤。这34例患者血清M蛋白的检测显阳性,临床诊断符合率为100.00%;25例患者浓缩尿中M蛋白的检测显阳性,临床诊断符合率为73.53%。血清检验的临床符合率较尿液检验更好,差异具有统计学意义（P＜0.05）;34例血清M蛋白的检测显阳性的患者中,IgG型21例（61.76%）,IgA型8例（23.53%）,IgM型3例（8.82%）,γ轻链型2例（5.88%）。结论 MML患者采用血清及尿液免疫固定电泳检测,血清M蛋白检测阳性率较浓缩尿中M蛋白的检测阳性率要高,血清及尿液进行的免疫固定电泳检测对MML的诊断、检测及预后判断具有重要的提示作用,临床工作者可以根据电泳图谱对MML进行分型,并制定个体化的治疗方案。     

M蛋白分型联合本周蛋白检测在多发性骨髓瘤中的应用

[目的]探讨血清M蛋白联合尿本周蛋白检测在多发性骨髓瘤中的应用价值。[方法]选择335例多发性骨髓瘤患者,利用毛细管区带电泳-免疫消减法和免疫固定电泳分别对血清M蛋白和尿本周蛋白进行检测,分析两种方法的优势及局限性。[结果] M蛋白分型结果显示,238例为M蛋白阳性,检出率为71. 0%,其中Ig G型146例(61. 4%),IgA型55例(23. 1%),IgM型5例(2. 1%),轻链型32例(13. 4%)。尿本周蛋白结果为,208例患者结果为阳性,检出率为62. 1%。二者联合判读检出率为85. 7%。10例尿本周蛋白阳性患者尿液中还检测到了完整免疫球蛋白。97例M蛋白阴性患者中,49例为尿本周蛋白阳性。[结论]血清M蛋白联合尿本周蛋白检测可显著提高多发性骨髓瘤检出率,具有较高的临床价值。     

不同地理株白纹伊蚊同工酶和可溶性蛋白的比较研究

采用生化技术进行蚊虫分类学和亲缘关系的研究,国外已有不少报道。Robert等综述了昆虫同工酶及其意义;McDonald等和我国的缪建吾都分别报道了白纹伊蚊的酯酶及可溶性蛋白的电泳图谱,但目前尚未见到对不同地理株的同种蚊虫的生化分析结果。我们采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和等电点聚焦电泳(IFE),先后对三属六种十二株伊蚊、库蚊及按蚊作了酯酶、α-磷酸甘油脱氢酶及蛋白的生化分析。现将结果报告如下。     

小鼠内细胞团标志蛋白的性质、分离和纯化

我们用二相电泳方法在小鼠畸胎瘤系统中发现小鼠胚胎内细胞团标志蛋白双联体(分子量39,000,p14.4—4.5)也存在于未分化的胚胎癌细胞株(PSAI-NG2、F9、PCC3)中,但在已分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1中用二相电泳方法不能检查到这蛋白。把EC细胞分为细胞质、细胞核、染色体三部分再进行检查,可以清楚地看到这蛋白主要存在于染色体部分。把染色体再分成0.35M NaCl可溶性,2M NaCl可溶性及2M NaCl不溶性三个组份时,则这蛋白出现在0.35M NaCl可溶性组分中,表明它是与染色体疏松结合的非组蛋白染色体蛋白。这蛋白是一种耐热性蛋白,在80℃受热10分钟不能使它变性。用制备型SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对经热处理的0.36M NaCl可溶性染色体蛋白进行分离,可得到电泳纯的小鼠内细胞团标志蛋白。由于这蛋白约占细胞总蛋白0.6%,与染色体疏松结合,又与早期胚胎细胞的多能性相关,提示它在维持多能细胞染色体构象方面有重要作用。     

用电子显微镜直接观测副肌球蛋白分子

将微量电泳及琼脂电泳纯的河蚌(Cristaria plicata,Leach)斧足肌副肌球蛋白溶于pH 8,M乙酸铵盐溶液内,蛋白浓度为0.18毫克/毫升。利用压缩氮气将此溶液从微粒喷雾器内喷至新鲜分开的洁净云母表面上,用铂铱合金真空喷镀,投影角     

念珠菌血症时甘露聚糖抗原及其IgG抗体检测诊断价值的临床研究

目的评价念珠菌甘露聚糖抗原（M抗原）及甘露聚糖IgG抗体（M-IgG抗体）检测诊断念珠菌血症的价值。方法收集2013年5月～2014年1月我院住院患者及健康体检人群共107例,包括念珠菌血症组（念珠菌血培养阳性患者）13例、危险因素组（临床诊断侵袭性念珠菌病或接受化疗恶性疾病、留置深静脉置管等侵袭性念珠菌病感染高危患者）63例和对照组（健康体检人群）31例。通过ELISA方法检测甘露聚糖抗原及甘露聚糖IgG抗体,比较3组人群检测阳性情况及持续时间,计算两种方法的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值、ROC曲线下面积及Kappa值。结果白念珠菌和光滑念珠菌为念珠菌血症的主要念珠菌病原,均为5例。念珠菌血症的7／14菌株（1例患者合并2种念珠菌感染）来自重症医学科,其次为感染内科（2／14株）。除1例死亡病例外,余12例患者进行了M抗原和M—IgG抗体监测。首次M抗原检测中,4例阳性,1例可疑阳性;首次M-IgG抗体检测中,11例阳性,1例可疑阳性。经抗真菌治疗,监测14d,M-IgG抗体持续阳性时间长于M抗原。甘露聚糖抗原在诊断念珠菌血症的敏感度41．7％,特异度98．8％,阴性预测值92．4％,阳性预测值100％。甘露聚糖IgG抗体在诊断念珠菌血症的敏感度91．7％,特异度52．8％,阴性预测值100％,阳性预测值27．5％。M抗原、M抗原并M—IgG抗体作为念珠菌血症时诊断实验的ROC曲线下面积均为0．708（95％CI：0．517—0．900）,两者的Kappa值分别为0．520和0．559。结论甘露聚糖抗原在诊断念珠菌血症时的特异度较高,甘露聚糖IgG抗体在诊断念珠菌血症的敏感性较高,两者的联合检测可以适当提高检测的敏感度及特异度,有助于念珠菌血症的诊断。     

非离子去污剂对红细胞膜薄层等电点聚焦电泳的影响

在膜蛋白的研究中,选择一种有效的溶解和分离膜蛋白的方法十分重要。Merz等人在含8M尿素的聚丙烯酰胺凝胶上分离红细胞膜获得成功。Ames等人曾用SDS溶解膜蛋白,在透析除去SDS后,于含有尿素及NonidetP40的聚丙烯酰胺凝胶上进行等电点聚焦电泳,但由于SDS及高浓度尿素可使膜蛋白变性,失去活性,影响电泳效果。为此我们探索了非离子去污剂对红细胞膜蛋白等电点聚焦电泳的影响,分别比较了Triton X-100,Lubrol PX,No-     

不同地理株白纹伊蚊同工酶和可溶性蛋白的比较研究

采用生化技术进行蚊虫分类学和亲缘关系的研究,国外已有不少报道。Robert等综述了昆虫同工酶及其意义;McDonald等和我国的缪建吾都分别报道了白纹伊蚊的酯酶及可溶性蛋白的电泳图谱,但目前尚未见到对不同地理株的同种蚊虫的生化分析结果。我们采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和等电点聚焦电泳(IFE),先后对三属六种十二株伊蚊、库蚊及按蚊作了酯酶、α-磷酸甘油脱氢酶及蛋白的生化分析。现将结果报告如下。一、材料和方法 1、实验材料采用本所饲养的白蚊伊蚊[Aedes albopictus(Skuse)]广州株、南宁株、上海株、海南株、云南株及宜兴株;埃及伊蚊[Aedes aegypti(Linnaeus)]Bora-Bora株和海南株;黄斑伊蚊(Aedes flavopitus Yamada)。淡色库蚊     

草鱼α2巨球蛋白的分离纯化与若干特性

α2 M是动物体内重要的血浆蛋白之一,195 5年Schultze从人的血清中首次分离纯化出α2 M这一位于电泳α区的蛋白质(郑远旗等,1994 )。α2 M作为一种非特异性的蛋白酶抑制剂在免疫、疾病发生和发展中的作用日益受到重视,尤其在鱼类免疫系统中α2 M起着非常重要的作用。但鱼类α2     

SARS病毒核衣壳蛋白、膜蛋白在大肠杆菌中的高效表达和纯化

通过反转录PCR获得了SARS冠状病毒核衣壳蛋白(N)和膜蛋白(M)基因,其序列分析结果与加拿大多伦多株完全一致。将M基因和N基因克隆到大肠杆菌表达载体pET22b和pBV222上,并在大肠杆菌中以包涵体及可溶形式获得高效表达。通过离子交换、金属螯合层析纯化获得电泳纯制品。所获得的核衣壳蛋白具有良好的抗原性,可用于抗SARS抗体检测及亚单位疫苗研究。     

15例多发性骨髓瘤早期误诊临床探究及启示

目的:总结分析多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)的临床资料和实验室特点,增强对该病的认识,降低漏诊和误诊率。方法:对15例确诊MM患者的临床资料和实验室数据进行回顾性分析。结果:15例确诊的MM患者中,贫血13例,肾功能损害10例,骨痛和骨骼疾患3例,肺部感染1例,颅内占位1例,全血细胞减少1例,升主动脉扩张1例,以贫血、肾功能受损和骨折骨痛最多见。骨髓细胞学检查可见浆细胞比例增高,形态呈多样化,可见双核、多核的骨髓瘤细胞。X线或CT检查可见多发性虫蚀样及穿凿样骨质破坏影,密度低,边界清或不清,甚至出现病理性骨折。血清免疫固定电泳检出M蛋白。结论:多发性骨髓瘤多见于中老年人,随人口老龄化发病率逐年上升,其临床表现复杂多样,引起贫血、感染、肾功能损害、骨痛、病理性骨折,甚至局部肿物或占位等罕见临床症状,缺乏特异性,常造成误诊,在实际工作中临床工作人员应加强对MM的认识,掌握其临床表现的复杂特点,对异常的实验室检查结果应加以综合分析,使多发性骨髓瘤能够得到及时确诊和治疗。     

双向BN/SDS-PAGE分离鉴定痢疾杆菌福氏5型M90T株毒力相关膜蛋白复合物

通过蓝色非变性凝胶电泳(BN-PAGE)比较痢疾杆菌福氏5型野生株M90T和大质粒缺失株M90T△T的膜蛋白复合物,发现一个野生株特有的复合物,其分子量的为290 kD,命名为M90T-290.通过第二向SDS-PAGE分离M90T-290得到6个蛋白亚基,质谱鉴定为:一个由大质粒编码的毒力蛋白Apyrase(ATP-二磷酸水解酶)和5个染色体编码的蛋白,这些蛋白可能以膜复合物的形式影响毒力蛋白IcsA的单极性分布和痢疾杆菌在细胞间的扩散.这个新发现的毒力相关膜复合物在痢疾杆菌的致病过程中可能发挥重要作用.     

抗肿瘤疫苗MAGE1-MAGE3-HSP70蛋白特性及其纯化策略的研究

目的:对MAGE1-MAGE3-HSP70(M1-M3-HSP70)融合蛋白的理化性质及其纯化策略进行初步研究,为后期的临床前试验提供数据和依据。方法:以本实验室构建的菌种(BL21(DE3)pLysS-M1-M3-HSP70)为材料,采用常规细菌培养及诱导方法进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳、免疫印迹(Western blotting)对目的蛋白进行分析,然后确定盐析条件,使用ButylSepharose HP疏水相互作用层析以及阴离子交换(Source 30Q填料)对目的蛋白的纯化进行分析。结果:M1-M3-HSP70蛋白在大肠杆菌中表达后,目的蛋白分为两部分,一部分为包涵体形式(44.9%),一部分为可溶表达(55.1%)。对其可溶部分进行研究发现,细菌裂解后,目的蛋白存在聚合和降解现象;确定了盐析条件、洗脱缓冲液以及稳定的PH值范围,基本确定了目的蛋白的纯化工艺。结论:明确了M1-M3-HSP70融合蛋白的基本性质,确定了目的蛋白的纯化方法,为基于融合蛋白的肿瘤疫苗的进一步研究提供了参考。     

木本植物蛋白提取和SDS-PACE分析方法的比较和优化

在几种木本植物上对4种常用蛋白提取方法、4种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较研究,发现：利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少,得到的电泳结果,蛋白条带清晰,数量多;将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果,获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究,发现了与高水平盐胁迫有关的66kD蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的28kD蛋白,获得了满意的蛋白SDS-PAGE分析结果。     

维吾尔族人Bf因子的遗传多态性及与GLO连锁不平衡参数的估计

用琼脂糖高压电泳及免疫固定法对222份维吾尔族人血浆进行了备解素B因子(Bf)遗传多太性检测,发现其Bf^*S、F、S07、F065、F1的基因频率分别为0.6622,0.2680,0.0586,0.0090及0.0023。x²检测表明,这种分布与Hardy-Weinberg遗传平衡定律相吻合。结合对GLO的研究,比较两座位间的连锁不平衡参数,发现Bf^*S与GLO¹的Δ值较大。     

简易电泳洗脱蛋白方法

制备电泳的连续洗脱与切下目的蛋白谱带洗脱是从聚丙烯酰胺凝胶回收蛋白质常用的两种方法。切带回收蛋白可采用浸泡提取,化学解聚凝胶及电泳洗脱多种途径。相对比较,电泳洗脱蛋白回收率较前二者高些,因此人们多采用此法。但是,目前广泛使用     

一步法电泳分析肌联蛋白亚型和肌球蛋白重链

目的为研究超大分子量肌小节蛋白肌联蛋白(titin)的生理病理功能,在一次电泳过程中同时分离titin各亚型和中分子量肌小节蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)。方法使用16cm×18cm垂直电泳系统,在电泳板下1/3灌注10g/L SDS-PAGE胶,上2/3灌注60g/L SDS-琼脂糖(SDS-VAGE)胶。低温8℃下持续电泳5h,在电泳板上层以SDS-VAGE胶电泳分离titin亚型,下层以SDS-PAGE胶电泳分离MHC。电泳后VAGE胶使用银染法标记titin各亚型,PAGE胶使用考马斯亮蓝染色法标记MHC。结果 titin各亚型得到有效的分离,目标蛋白条带显示清晰,与其分子量大小一一对应,分离效果明确。结论一步法垂直电泳系统可应用于超大分子量蛋白的电泳,同时可分离多个分子量差距大的蛋白,提高蛋白电泳实验效率。     

梗阻性高胆红素血症红细胞膜成分与结构的相关性研究

为进一步证明梗阻性高胆红素血症对细胞膜的损伤作用,探讨胆红素的毒性机理,我们采用毛细管电泳,圆二色谱,质谱,荧光偏振等方法,研究了红细胞膜蛋白的组成及膜的构象关系,结合膜脂的变化情况,反映了梗阻性高胆红素血症时红细胞膜的成分受到明显的影响,膜脂发生脂质过氧化、膜蛋白被氧化性降解,破坏了细胞骨架,使细胞膜的正常结构被破坏,膜流动性增大、膜稳定性下降,从而细胞不能维持其正常的生物功能。