人端粒酶催化亚基hTERT基因启动子的克隆

为了确定人端粒酶催化亚基 h TERT基因的启动子结构特征 ,采用 Panhandle PCR技术 ,从正常人外周血单核细胞基因组 DNA中扩增 h TERT基因 5′端上游旁侧序列 ,结果获得了 h TERT基因翻译起始位点上游 2 0 90 bp的基因组 DNA序列。序列分析表明 h TERT基因的启动子区域缺少典型真核启动子的核心元件 ( TATA box和 CAAT box) ,但含有多个已知转录因子蛋白结合的核心序列 ,如 E box及 Sp1核心序列。提示 h TERT基因的表达可能受特殊的转录因子调控 ,这些转录因子的激活可能与癌变细胞中 h TERT重新组成型表达有关     

端粒酶激活机制研究进展

随着对端粒和端粒酶在衰老和肿瘤中重要性认识的不断深入,端粒酶的激活途径已日益成为这一研究领域的热点.已发现,MYC原癌蛋白(myelocytomatosis virus oncoprotein, MYC)在端粒酶的激活中起关键作用.它可以与TERT基因启动子区域内的E盒结合反式直接激活端粒酶,还可能介导了细胞内其他分子如人乳头瘤病毒E6癌蛋白(human papillomavirus E6 oncoprotein, HPV-E6)和雌激素等对端粒酶的激活.雌激素也可与雌激素受体形成复合物,直接与TERT基因启动子区域内的退化雌激素反应元件结合反式激活端粒酶.此外,腺瘤样结肠息肉癌蛋白(adenomatous polyposis coli protein,APC)、p53及调节蛋白质磷酸化和去磷酸化过程的酶类等亦可能参与了端粒酶活性的激活.     

定量分析诱导山羊体细胞重编程过程中端粒酶的表达变化

动物体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS)是目前干细胞生物学研究的热点。文中重点对山羊体细胞重编程过程中端粒酶(TERT)基因的相对表达量进行了检测,探讨了山羊重编程细胞的形成与端粒酶基因表达的关系。从关中奶山羊胎儿皮肤分离得到的胎儿成纤维细胞(GEF),其增殖能力较强,核型正常(60条XY),通过转录因子在体外诱导得到山羊重编程细胞。利用Real-timeRT-PCR方法首先对关中奶山羊胎儿各种组织的TERT表达进行了检测,结果表明睾丸组织中TERT的表达显著高于上皮组织(P0.01),在山羊胎儿的其他组织中TERT也有不同程度的表达。对原代重编程细胞和4株不完全重编程细胞株的TERT表达检测结果发现,碱性磷酸酶(AP)阳性的重编程细胞端粒酶表达量要显著高于AP阴性的重编程细胞(P0.01)。这一结果揭示,激活端粒酶活性并使其保持较高的表达水平对体细胞的重编程至关重要。     

外周血单核细胞端粒长度和端粒酶hTERT 活性在心力衰竭中的变化研究

目的:探讨心力衰竭患者外周血单核细胞端粒长度和端粒酶h TERT活性在心衰发生进程中的变化情况和意义。方法:按照筛选要求选择患者,根据入选标准分为心衰组(49例)和非心衰组(44例)。记录患者的年龄、性别、生活习惯及疾病情况,超声检测患者心脏功能,测量左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF)。在不同时间点,抽取外周血分离单核细胞,用PCR方法检测端粒长度和端粒酶h TERT活性。结果:对照组比较,心衰组患者心脏左室舒张末内径明显增加,射血分数明显降低(P0.05);在第1、7天,心衰组患者外周血单核细胞端粒长度较对照组明显缩短、端粒酶h TERT活性明显增强。第7天较同组第1天端粒长度有所增加,端粒酶h TERT活性有所减低,但与对照组相比,端粒长度显著缩短,端粒酶h TERT显著增高(P0.05)。结论:心力衰竭后患者端粒长度和端粒酶h TERT活性明显变化,并随心衰发病具有一定波动,提示端粒和端粒酶可能参与了心衰发展进程。     

GCC mRNA和hTERT mRNA在腹腔镜结直肠癌根治术患者外周血中的表达及意义

目的:探讨腹腔镜和开腹手术对结直肠癌根治术患者外周血鸟苷酸环化酶C(GCC)m RNA和人端粒酶逆转录酶(h TERT)m RNA表达的影响及其意义。方法:按照随机数字表法将2009年8月-2014年4月我院收治的结直肠癌患者分为腹腔镜组和开腹手术组,通过逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测并比较两组患者外周血GCC m RNA和h TERT m RNA的表达情况。结果:与开腹手术组相比较,腹腔镜组患者手术时间长、术中出血量少、术后排气早、住院时间短,差异有统计学意义(P0.01);两组患者手术前GCC m RNA和h TERT m RNA阳性率无显著差异(P0.05);两组患者手术后GCC m RNA和h TERT m RNA阳性率显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:腹腔镜和开腹手术均会增加结直肠癌患者血行微转移,但腹腔镜结直肠根治术不会增加术后肿瘤血循环微转移的危险性。     

利用拆分绿色荧光蛋白检测端粒酶TERT亚基与端粒末端蛋白TPP1的相互作用

目的:构建pCDH-Flag-NGFP-TERT、pCDH-Myc-TPP1-CGFP基因的真核表达载体,验证TPP1-CGFP蛋白能募集到端粒区,并通过GFP蛋白自发重建检测TERT与TPP1的相互作用.方法:以相应质粒为模板,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增出N...     

《自然-遗传学》:研究发现端粒更长增患脑癌风险

据《自然-遗传学》报道,美国加州大学旧金山分校(UCSF)科学家领导的最新基因组研究揭示,TERT(端粒逆转录酶)和TERC(端粒酶)两个普通的基因变异会使染色体端粒变得更长,也会增加患神经胶质瘤脑癌的风险。TERT(端粒逆转录酶)和TERC(端粒酶)都有调节端粒行为的功能,是维持端粒长度的酶。研究人员认为,端粒更短的人患心血管疾病的风险大大增加。此前许多科学家认为端粒的功能只是防止细胞老化,保持细胞健康。但本次研究证实了TERT和神经胶质瘤之间存在相关性,并首次确定了     

TERT对小鼠EL-4淋巴瘤细胞增殖调控的初步研究

为了研究端粒酶催化亚基TERT与细胞周期相关基因的调控关系及其在肿瘤细胞增殖中的调控作用,应用基因芯片及RT-PCR等技术,对靶向mTERT的RNA干涉后的小鼠EL-4淋巴瘤细胞进行细胞周期相关基因的表达谱分析,筛选到43个基因在TERT受抑制前后存在表达差异,并且全部为下调基因.表明在小鼠EL-4淋巴瘤细胞中内源性TERT的表达抑制,导致了调控G1期和S期进程的相关细胞周期相关基因的表达变化,并可能通过此途径影响肿瘤细胞的生长和增殖.     

基于分子对接法预测红藤Sargentol及类似物紫丁香苷抗炎靶点的研究

目的：发现红藤中Sargentol及其类似物紫丁香苷的抗炎作用靶点。方法：选取26个与炎症密切相关的靶点蛋白（受体）,采用软件AutoDockVina将Sargentol和紫丁香苷与这26个蛋白进行分子对接,根据结合能预测二者的抗炎作用靶点。结果：Sargentol与4NF5、6EQ9、2Y37、5D3I、2R59等5种蛋白具有较强的结合能力,紫丁香苷与6EQ9、2Y37、2R59、3L8P、3KGC等5种蛋白具有较强的结合能力。Sargentol及紫丁香苷均与c-Jun氨基末端激酶-3(JNK-3,PDB ID:6EQ9)表现出较强的结合能,分别为-7.9和-8.3 kcal/mol,提示JNK-3可能是Sargentol和紫丁香苷抗炎的关键靶点。二者对诱导性一氧化氮合酶（iNOS,PDB ID:2Y37）亦有较强的结合能,前者还可能通过调节N-甲基-D-天冬氨酸受体-2A(NR2A)等谷氨酸受体发挥抗炎作用。结论：初步确定Sargentol和紫丁香苷抗炎作用的关键靶点,这将为进一步研究Sargentol类化合物的抗炎作用机制提供依据。     

卡伍尔氏链霉菌NA4突变株ΔbafAI的次级代谢产物研究

链霉菌产生的次级代谢产物是农用和医药抗生素的重要来源。为了更深入挖掘卡伍尔氏链霉菌NA4潜在多样的次级代谢产物,对阻断NA4主产物bafilomycins的突变株ΔbafAI随机激活的代谢产物进行分离和鉴定。采用HP20固相萃取、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱以及半制备HPLC等方法对ΔbafAI代谢产物进行分离纯化;使用NMR和MS确定化合物结构,并对单体化合物进行了生物活性测定。共分离鉴定6个化合物:环(L-异亮氨酸-L-脯氨酸)(1)、环(L-缬氨酸-L-脯氨酸)(2)、环(L-脯氨酸-L-亮氨酸)(3)、环(L-脯氨酸-L-苯丙氨酸)(4)、(2E, 4E)-5-(3-羟苯基)-戊-2, 4-二烯酰胺(5)和5′-脱氧-5′-甲硫肌苷(6)。6个化合物均是阻断NA4主产物后非特异激活的或产量显著提高的化合物,均为该菌中首次分离;化合物5和6是第二次从天然提取物中分离得到;化合物1和2显示出抗白色念珠菌活性,并首次报道了化合物5的抗氧化活性。进一步丰富了卡伍尔氏链霉菌NA4次级代谢产物研究,为激活沉默或低表达次级代谢产物合成基因簇提供了有益借鉴。     

构建一种受hTERT启动子和miR-145双调控的更为安全的新型溶瘤腺病毒

目的:构建一种受人端粒酶逆转录酶(h TERT)启动子和mi R-145双调控的更加安全的条件复制型腺病毒。方法:在已构建的h TERT启动子调控早期复制必需基因E1A的条件复制型腺病毒Adzq11基础上,再将四个拷贝的mi R-145的靶序列加入到E1A的3'非翻译区,构建新型溶瘤腺病毒Adzq11-145T。应用Real-time PCR测定人非小细胞肺癌细胞A549和人胚肺成纤维细胞HLF中mi R-145的表达量;然后在这两株细胞中,分别转染Adzq11和Adzq11-145T对应的穿梭质粒及感染病毒本身,用Real-time PCR检测E1A表达量以测定调控效果;用病毒空斑单位法检测两种病毒的复制情况;用CCK8检测对A549和HLF细胞的杀伤作用。结果:构建的新型溶瘤腺病毒Adzq11-145T在HLF中复制量明显低于Adzq11,其E1A m RNA水平和杀伤效应也显著降低。而在A549中,Adzq11-145T在E1A表达、病毒复制和溶瘤能力方面较Adzq11均无显著降低。结论:成功构建出一种新的受转录和转录后水平双重调控的条件复制型腺病毒Adzq11-145T,它比仅加入h TERT启动子调控早期复制必需基因E1A的腺病毒Adzq11更加安全。     

中国汉族人群长寿老人TERT基因MNS16A长度多态研究

近期研究表明,TERT基因中的一个串联重复长度多态MNS16A可以调节端粒酶的活性.以往研究报道,端粒酶的活性决定端粒长度从而与个体的寿命相关,据此提出假设:MNS16A的多态可能通过控制端粒长度从而影响人类的寿命.为验证该假设,本实验室从四川省都江堰市收集了446个相互没有亲缘关系的长寿老人(年龄≥90岁,平均年龄(94.45±3.45)岁),同时收集了332个正常个体作为对照组(年龄22~53岁,平均年龄(35.00±12.00)岁).检测长寿组和对照组的MNS16A长度多态,并将两组人群的MNS16A等位基因频率和基因型分布通过卡方检验进行分析.结果表明,在长寿组和对照组之间,MNS16A等位基因频率和基因型分布没有显著差异,表明MNS16A的长度多态在中国汉族人群中可能对寿命长度没有显著影响.     

南海海绵Pachychalinasp.化学成份的研究

从中国南海海绵Pachychalina sp.正丁醇可溶部分获得了5个化合物,通过UV,IR,~1H-NMR,~(13)C-NMR,MS,~1H-~1HDQFCOSY等实验确定了它们的结构分别是:对羟基苯醋酸甲酯(1),胸腺嘧啶(2),尿嘧啶(3),胸腺嘧啶脱氧核苷(4)和尿嘧啶脱氧核苷(5)。其中化合物(1)是首次从我国南海海洋生物中获得;化合物(5)则是首次从海绵中分离得到的天然产物。