兴义鸭MEF2A基因克隆及生物信息学分析

为了获取鸭MEF2A基因完整编码区(CDS)序列,进一步揭示其遗传机理。本试验采用兴义鸭为研究对象,采用RT-PCR方法克隆获取MEF2A基因CDS区序列,经重组质粒测序、拼接,试验初步获得了兴义鸭MEF2A基因完整编码区序列,得到1 479 bp片段,包含起始密码子和终止密码子,编码492个氨基酸,表达蛋白分子量为53.14 k D。经序列对比,在G~(429)A、T~(661)A、A~(1423)G、A~(1426)G和G~(1467)A分别发生了单核苷酸突变,其中T~(661)A和A~(1423)G突变分别导致Cys(半胱氨酸)到Ser(丝氨酸)、Glu(谷氨酸)到Lys(赖氨酸)的改变,其他位点均属于同义突变。试验对兴义鸭MEF2A蛋白的理化性质及结构特点进行了简单分析,为下一步研究MEF2A蛋白特性及其作用机制奠定理论基础。     

牦牛MEF2C基因克隆、生物信息学及表达谱分析

本试验旨在分析牦牛(Bos grunniens)肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor 2C,MEF2C)基因的分子特征和表达规律,探索其影响牦牛肌肉发育的作用机制.试验以大通牦牛肌肉组织cDNA为模板,采用PCR扩增技术扩增牦牛MEF2C基因,用DNAStar,ExPASy,ABCpred等生物信息学软件分析MEF2C基因序列和其编码的蛋白质结构,利用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测了 MEF2C基因的表达情况.试验克隆获得的牦牛MEF2C基因编码区全长1 302 bp,编码433个氨基酸;蛋白质结构预测结果显示,MEF2C蛋白具有30h的半衰期,为亲水性碱性蛋白,没有信号肽但拥有跨膜结构.系统关系中牦牛与普通牛的亲缘关系最为接近,与小鼠亲缘关系较远.组织表达谱结果显示,MEF2C基因在牦牛7个组织中都有表达且在臀二头肌组织中表达量最高;不同时期MEF2C基因表达情况为胎牛＞成年牛＞6月龄牛.研究结果将为进一步探讨MEF2C基因在牦牛肌肉发育中的作用提供科学依据,同时也为解析牦牛肌肉发育的分子机制提供数据支撑.     

拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2(MEF2)生物信息学分析

应用NCBI上的常用程序、ExPASy在线核苷酸序列分析工具、CBS生物学序列分析工具及SABLE在线分析软件等对拟黑多刺蚁Polyrhachi svicina Roger肌细胞增强因子2(PvMEF2)进行了生物信息学分析,获得了PvMEF2因子的序列特征及理化性质,并对其结构和功能结构域进行了预测。结果表明PvMEF2因子具有与已知种类MEF2因子较高一致性的MADS和MEF2结构域,并且理化性质和二级结构、三级结构等与果蝇该因子类似,反映了PvMEF2可能是参与拟黑多刺蚁肌肉发生调控的重要因子。     

转录因子MEF2对多种信号通路的调节及其生物学作用

肌细胞增强因子 2 (myocyteenhancerfactor 2 ,MEF 2 )是一种特定的转录因子 .由于其涉及基因调节的不同环节及其多样的控制基因表达和功能的调节机制 ,正日益受到高度的重视 .目前发现MEF2最突出的功能是控制肌细胞分化过程中的基因转录 ,其主要作用是在骨骼肌、心肌和平滑肌的发育过程中介导细胞的分化 .MEF2作为钙依赖性调节因子 ,在神经系统的发育和分化中也发挥着重要的作用 .近来实验发现 ,MEF2可能参与肝脏纤维化的形成过程 ,是肝星状细胞 (hepaticstellatecell,HSC)活化的转录调节因子     

MEF2A基因突变对血管平滑肌细胞增殖迁移及其表型的影响

目的:观察肌细胞增强因子2A(MEF2A)基因突变对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖迁移及其表型的影响。方法:分别将野生型(WT)MEF2A质粒(WT组)、21个核苷酸缺失突变型(△21,显性负突变)MEF2A质粒(△21组)以及MEF2A siRNA(siRNA组)转染进人主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),通过溴化噻唑基蓝四唑(MTT)法和Millicell小室观察各组VSMC的增殖和迁移变化,免疫印迹(Western blotting)检测各组VSMC之间MEF2A蛋白、平滑肌α肌动蛋白(α-SM-actin)、SM22α、骨桥蛋白和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路表达差异。结果:MEF2A△21组和MEF2A siRNA组的VSMC增殖增加,迁移数量增多;同时此两组中α-SM-actin和SM22α表达减少,骨桥蛋白表达增加;磷酸化p38和ERK1/2表达也明显增强。结论:MEF2A基因显性负突变及沉默可使VSMC向合成型转化,其增殖和迁移能力增加。而p38和ERK1/2MAPK信号通路可能参与MEF2A基因介导的血管平滑肌细胞表型转化。     

实时荧光定量PCR检测癫痫发生中大鼠海马MEF2及CDK5的表达

目的:检测大鼠在癫痫发生过程中不同时间点海马肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor,MEF2) mRNA及细胞周期素依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5) mRNA的表达水平,并分析两者之间的相关性.方法:采用锂-匹鲁卡品腹腔注射,建立大鼠慢性癫痫模型,提取海马组织中的总RNA,并逆转录为cDNA,应用Real-time PCR检测MEF2及CDK5 mRNA的表达量.结果:MEF2A/2D mRNA于造模中止后1d急剧下降,3d开始上升,至4w达最高,后渐恢复至正常水平;CDK5 mRNA的表达量在整个癫痫发生过程中均呈上升趋势,4w达最大,6w开始下降,8w恢复至正常水平.结论:MEF2与CDK5均参与了慢性癫痫的形成过程,但两者的表达量在时间上无明显关联性.     

利用生物信息学方法对人类(Homo sapiens)肌肉增强因子2(MEF2)的特性比较及进化分析

肌肉增强因子2(Myocyte enhancer factor 2,MEF2)是MADS(MCM1,agamous,deficiens和serum response factor)家族成员之一,在动物发育过程中起到重要的调节作用。为了进一步了解其调控的复杂性,本文根据NCBI中已有的人类MEF2相关数据,应用ExPASy在线序列分析工具、CBS在线分析服务器软件、Conserved Domain Database(CDD)数据库、SABLE在线分析软件等对人类MEF2蛋白的不同亚型序列进行比较分析,同时,根据相关序列的比对结果构建系统进化树进行分析。结果表明,MEF2在人体内以多种蛋白形式存在,其理化性质存在一定差别,可能的翻译后糖基化修饰多为O型糖基化且均存在较多磷酸化位点。人类各MEF2蛋白具明显MADS结构域,多数具有MEF2结构域和HJURP_C结构域。各MEF2蛋白二级结构均包括了螺旋、折叠和无规则卷曲等多种形式,其三级结构模式相似。系统进化树显示MEF2B蛋白与其他蛋白有着较大的序列差异及较远进化关系,可能较为原始。     

The Cancer Mutation D83V Induces an α-Helix to β-Strand Conformation Switch in MEF2B

MEF2B is a major target of somatic mutations in non-Hodgkin lymphoma. Most of these mutations are non-synonymous substitutions of surface residues in the MADS-box/MEF2 domain. Among them, D83V is the most frequent mutation found in tumor cells. The link between this hotspot mutation and cancer is not well understood. Here we show that the D83V mutation induces a dramatic α-helix to β-strand switch in the MEF2 domain. Located in an α-helix region rich in β-branched residues, the D83V mutation not only removes the extensive helix stabilization interactions but also introduces an additional β-branched residue that further shifts the conformation equilibrium from α-helix to β-strand. Cross-database analyses of cancer mutations and chameleon sequences revealed a number of well-known cancer targets harboring β-strand favoring mutations in chameleon α-helices, suggesting a commonality of such conformational switch in certain cancers and a new factor to consider when stratifying the rapidly expanding cancer mutation data.     

不同训练方式对大鼠骨骼肌纤维类型转化和CaMK II/MEF2传导途径的影响*

目的: 探讨间歇速度训练和耐力训练对大鼠骨骼肌纤维类型转化及钙调蛋白激酶/肌细胞增强因子2(CaMK II/MEF2)信号传导通路的影响。方法: 成年雄性SD大鼠(8周龄)18只,随机分成间歇速度训练组(IST),耐力训练组(ET),设空白组(C),每组6只,IST组采用75 m/min×1 min、20 m/min×1 min的交替训练6次,跑台坡度15,持续时间12 min/d;ET组采用速度30 m/ min、跑台坡度7、持续时间90 min/d的耐力训练。干预8周后,分别取小鼠右侧胫骨前肌、比目鱼肌,酶联免疫吸附法检测骨骼肌琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,ATP酶染色法观察I、Ⅱ型肌纤维面密度、数密度变化情况,SDS-PAGE凝胶电泳技术观察骨骼肌MHC亚型百分比含量、骨骼肌mRNA表达谱测序分析及qRT-PCR技术检测CaN、CaMKII、MEF2水平。结果: 相比C组,ET组SDH活性显著上升,LDH活性降低(P＜0.05);IST组胫骨前肌中LDH活性值升高(P＜0.01)。ET组胫骨前肌MHCIIa%升高,MHCIIb%降低(P＜0.05),比目鱼肌MHCI% 和MHCIIa%升高,MHCIIb%均降低(P＜0.05)。相比IST组,ET组胫骨前肌MHCIIx%升高(P＜0.05)。相比C组,ET组胫骨前肌 I、II 型纤维纤维密度上升,IST组II型纤维纤维密度提高,IST组、ET组比目鱼肌I型纤维纤维密度上升(P＜0.05)。相比C组,ET组骨骼肌CaN、CaMKII、MEF2 mRNA表达水平增高,IST组CaN、CaMKII、MEF2 mRNA表达水平下降(P＜0.01)。Illumina高通量测序筛选骨骼肌纤维转化相关因子及关联分析,运动干预促使骨骼肌纤维转化相关因子表达变化富集于TGF-β/Smad3、CaN/MEF2、AdipoQ等信号通路,而耐力训练显著提高骨骼肌纤维转化、干细胞功能相关信号通路的富集。结论: 耐力训练促进向氧化型肌纤维转化(慢肌),而间歇速度训练向酵解型肌纤维转化(快肌),并伴随着CaMK II/MEF2传导途径中CaN、CaMKII、MEF2基因的高表达。     

分离MEF和ES细胞的差速贴壁法研究(简报)

胚胎干细胞的分化控制是胚胎干细胞研究的一个重要方面。由于常规的拟胚体诱导途径是在形成拟胚体后才开始进行诱导分化,受多种胚层的共同作用使得我们无法简便探索诱导分化的机制。而且用这种方法进行的诱导分化试验的结果检测比