从生物材料对细胞总RNA量的影响初探其分子生物相容性

目的:从细胞总RNA量的变化观察生物材料有无毒性。方法:将生物材料浸提液作用于成纤维细胞,用异硫氰酸胍一步法抽提细胞总RNA,经RNA电泳和检测和计算其RNA浓度,观察细胞总RNA量的变化。结果:不同的生物材料可引起细胞总RNA量的变化,尤其某种有毒的硅橡胶使细胞总RNA量被严重抑制。结论:观测细胞总RNA量并结合细胞毒性试验及其他分子生物学试验可作为综合评价生物材料分子生物相容性的参考。     

仿刺参体壁总RNA提取方法的建立

目的:通过对TRIzol一步法进行改进,建立一种从富含胶原蛋白、多糖及色素的仿刺参体壁提取总RNA的有效方法。方法:样品在液氮中研磨并用TRIzol匀浆后再进行抽提;对TRIzol一步法提取的总RNA进行DNaseⅠ消化和酚氯仿抽提,用2.5mol/L的醋酸钾沉淀,并加入适量糖原(10mg/mL)与RNA共沉淀。结果:琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法以及RT-PCR检测结果表明,改进的方法能够有效去除基因组DNA、蛋白、多糖及色素的污染,RNA的产率提高。结论:制备的总RNA纯度高,完整性好,能够满足mRNA差异显示RT-PCR等分子生物学研究的要求,是一种提取仿刺参体壁及其他富含黏多糖、胶原蛋白和色素的动物组织总RNA的有效方法。     

森林脑炎病毒基因组RNA的分离及其性质的研究

本文从森林脑炎病毒感染的鼠脑组织中直接抽提总核酸,经Sepharose 4B柱层析,将病毒RNA与细胞RNA分离。方法简便。分离的病毒RNA在260nm处有典型紫外吸收光谱,260/280nm的比值近似2,对R_ane敏感,有感染性。     

新生隐球菌总RNA抽提方法的实验研究

目的探讨快速获取高质量的新生隐球菌总RNA的实验方法。方法选取新生隐球菌的荚膜株、荚膜缺陷株,分别设计采用4种方法提取总RNA:酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法。用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用定量PCR法鉴定RNA质量。结果酸洗玻璃珠法、液氮研磨法、异硫氰酸胍一步法、冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法的RNA产量分别为0.2μg/105细胞、0.4μg/105细胞、0.1μg/105细胞、0.6μg/105细胞。结论冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取的RNA均一性和完整性最好,是简便、快捷地提取具有荚膜和细胞壁双重屏障的新生隐球菌RNA的理想方法。     

从棉铃虫体中提取总RNA的一种有效方法

昆虫组织细胞中含有大量的RNA酶 ,在提取其RNA时 ,防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键。目前提取动物组织细胞总RNA的方法主要采用“异硫氰酸胍 酚 氯仿抽提”一步法操作 ,但从昆虫组织细胞中提取RNA尚无明确的方法。本实验根据昆虫组织细胞中RNA的分子结合其它蛋白等次生物质的特性不同 ,适当的调整该方法 ,从棉铃虫中提取到了完整、无降解、纯度高的RNA ,适用于Northern杂交和cDNA合成等分子生物学操作     

从少量培养细胞中同时提取微量蛋白和RNA的方法探讨

为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯仿一步抽提RNA法和分子克隆实验手册裂解液制备蛋白质的方法 ,作为对照 .自制试剂提取的总RNA ,18S、2 8S清晰可见 ,2 8S比 18S带亮度强 2～ 3倍 ,带与带之间无拖尾现象 ,5S隐约可见 ,而且成功地进行了Northern印迹、RT PCR分析 ,与经典方法差异不大 ;用此法所提蛋白质 ,经SDS PAGE检测 ,蛋白分离效果很好 ,无杂质 ,且Western印迹检测Giα蛋白 ,可见一条清晰的特异带 ,与常规提取蛋白质 ,结果相似 .从微量细胞中同时提取的RNA和蛋白质 ,得率高、纯度好 ,具有化学完整性和生物学性质     

肝癌组织及细胞系总RNA抽提逆转及基因克隆方法的改进与比较

本文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR（q-RT-PCR）的方法。 比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(Oligo dT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶（Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LA taq聚合酶、Prime Star聚合酶）进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响。新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高。RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要。部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆。     

竹节人参总皂苷对脑缺血大鼠兴奋性氨基酸的影响

目的:探讨竹节人参总皂苷对大鼠脑缺血及其再灌注后脑组织兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响,以确定竹节人参对抗缺血性脑损伤,防止缺血时EAA升高的主要活性部位。方法:将大鼠用竹节人参总皂苷处理后,建立大鼠脑缺血模型,观察竹节人参总皂苷对大鼠脑组织中的谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)的影响。结果:竹节人参总皂苷对正常大鼠脑组织EAA含量无影响,可使脑缺血及其再灌注损伤大鼠脑组织Glu、Asp含量降低,对GABA、Gly无明显影响。结论:竹节人参总皂苷可对抗缺血性脑损伤,防止缺血时EAA的升高,从而发挥对脑损伤的保护作用,与竹节人参作用相似,竹节人参总皂苷是竹节人参具有本作用的主要活性部位。     

基因芯片在骨骼肌老龄化相关基因表达谱中的应用

对老龄组大鼠 (30月龄 )和年轻对照组大鼠 (3月龄 )的腓肠肌超微结构进行观察 ,可以看到前者肌肉肌纤维萎缩伴有线粒体空泡变性。并进行总RNA抽提、mRNA纯化、探针制备 ,应用基因芯片筛选老龄化相关基因 ,两组大鼠骨骼肌重复出现的差异表达基因 12 7个 ,下调基因涉及能量代谢、信号转导 ,上调基因涉及蛋白质分解、细胞凋亡     

五种不同组织结构特点昆虫的总RNA提取效率比较

【目的】比较RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法对不同种昆虫总RNA提取的效率,为不同种昆虫总RNA提取方法选择提供参考。【方法】采用RNAeasy抽提试剂盒法和Trizol提取法分别对九香虫Aspongopus chinensis Dallas、白背飞虱Sogatella furcifera Horváth、中华蜜蜂Apis cerana cerana、黄蜻Pantala flavescens和蒿金叶甲Chrysolina aurichalcea进行总RNA提取,通过紫外分光光度计测定总RNA吸光度(OD)值,利用琼脂糖凝胶电泳检测等方式对RNA质量进行评估。【结果】2种提取方法提取不同昆虫总RNA中,Trizol法提取白背飞虱(同翅目)、蒿金叶甲(鞘翅目)和九香虫(半翅目)的总RNA浓度较高,但纯度较低。电泳结果显示总RNA有降解,完整性较差,RNAeasy抽提试剂盒法提取黄蜻(蜻蜓目)和中华蜜蜂(膜翅目)的浓度较低,纯度较高,电泳结果显示完整性较好。【结论】Trizol法更适合提取小型或几丁质含量高的昆虫,RNA抽提试剂盒法更适合几丁质含量较少、腹软且有大量体液的昆虫总RNA提取。     

一种快速提取小麦叶片总RNA的方法

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键.同种植物不同器官的组织由于组成分的差异,提取RNA的方法也存在不同的难点.在苯酚法和氯化锂沉淀法的基础上,改进并提出了一种适合小麦叶片总RNA的快速提取方法,消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染.该方法提取的小麦叶片总RNA,完整性好、纯度高,可用于RT-PCR、N orthern杂交、RACE等实验操作,而且简单经济、快速、实验结果稳定,重复性好,还适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取.     

Rapid and Reliable Method of Extracting DNA and RNA from Sweetpotato, Ipomoea batatas (L). Lam

A quick, simple and reliable method of extracting DNA from sweetpotato (Ipomoea batatas (L.) Lam.) has been developed. The method was applied successfully for extraction of total DNA from leaves and total RNA from leaves and various tissues. The yield of DNA extracted by this procedure was high (about 1 mg/g leaf tissue). The extracted DNA was completely digested by restriction endonucleases indicating the absence of common contaminating compounds. The absorbancy ratios of A260/A230 and A260/A280 of isolated RNA were approx. 2 and the yield was about 0.2 mg/g fresh wt. CIPK and tublin genes were successfully amplified by RT-PCR, suggesting the integrity of isolated RNA. The total DNA and RNA isolated by this method was of sufficient quality for subsequent molecular analysis.     

The isolation of RNA from raspberry (Rubus idaeus) fruit

Previous attempts to extract high-quality, total RNA from raspberry (Rubus idaeus) fruits using published protocols have proven to be unsuccessful. Even the use of protocols developed for the extraction of RNA from other fruit tissue has resulted in low yields (1) or the isolation of degraded RNA (2). Here, we report on the development of a quick and simple method of extracting total RNA from raspberry fruit. Using this method, high yields of good quality, undegraded RNA were obtained from fruit at all stages of ripening. The RNA is of sufficient quality for northern analysis and cDNA library construction.     

茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究

从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。     

棉花幼苗根总RNA提取的改进热酚法

获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物的不同而又有较大差异,棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此RNA提取难度较大,本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根RNA热酚提取法,该法可获得高质量棉根总RNA,并能成功进行反转录,制备cDNA。     

C57BL/6J小鼠脂肪组织总RNA提取及周脂素基因的克隆

目的用改进后的方法提取高质量的RNA,以此为模板,应用T-A克隆法克隆C57BL/6J小鼠周脂素基因编码区,对其进行测序验证,并与GenBank比对。方法在试剂说明书基础上,改进提取脂肪组织RNA的方法,从C57BL/6J附睾脂肪组织提取高质量的总RNA,用RT-PCR扩增出周脂素编码区基因,并将目的基因编码区克隆入pMD18-T载体中,转化E.coli JM109后,筛选阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后,对其进行测序验证,并与GenBank比对。结果用改进后的方法成功提取出了高质量的总RNA,并且成功提取构建的重组载体中含有周脂素基因的全长序列,与GenBank公布的序列一致。结论改进的后的脂肪组织RNA提取方法是可行的,并获得周脂素基因的cDNA,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

外来入侵植物紫茎泽兰不同组织RNA提取方法

从植物组织中提取高质量的RNA是进行cDNA文库构建等分子生物学研究的前提。在苯酚法的基础上,改进并得到了一种适合紫茎泽兰根、茎、叶总RNA快速提取的方法,消除了蛋白质、DNA、多糖等的污染。该方法提取的紫茎泽兰不同组织总RNA纯度高、完整性好,可用于RT-PCR、cDNA文库构建、Northern杂交等分子生物学实验,而且简单、经济、重复性好,适合于多种植物组织总RNA的提取。Northern杂交表明F3’H基因在紫茎泽兰的根、茎、叶等组织中广泛存在,但在叶中的表达量最高,在根中的表达量最低。     

麦冬根中总RNA的快速提取

目的:从富含多糖、多酚的麦冬根部组织中快速提取总RNA。方法:采用改进的苯酚法,提取液的配制为5%SDS、1mol/LNaAc(pH4.1)、20%HAC、0.1%PVP。结果:采用该方法提取的麦冬总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰。通过琼脂糖凝胶电泳与紫外吸光度测定产量与纯度,麦冬根部组织总RNA的吸光值D260nm/D280nm值大于1.8,D260nm/D230nm值大于2.0,麦冬块根与不定根RNA的平均产量分别为79.716和76.144μg/g(鲜重)。结论:用本方法提取的RNA可用于后继的抑制消减杂交试验。     

一种从富含多糖的玉米幼穗中提取RNA的方法

介绍了一种大量提取玉米(Zea mays L.)幼穗总RNA的有效方法。由于玉米幼穗富含多糖, 用普通的RNA提取方法和Trizol很难获得高质量的RNA。在热酚法提取RNA的基础上, 通过在提取缓冲液中加入低pH值的醋酸钾来去除多糖。所得到 的RNA获得率高, 质量好, 条带完整, 实验证明可直接用于RT-PCR、微阵列等各项后续分子生物学实验。