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相似文献
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1.
用生物素标记的cDNA探针检测马铃薯纺锤块茎类病毒   总被引:7,自引:0,他引:7  
  相似文献   

2.
3.
用聚合酶链式反应(PCR)检测马铃薯纺锤块茎类病毒   总被引:3,自引:0,他引:3  
用DNA合成仪合成两个马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid, PSTVd)特异性引物,从感病的马铃薯块茎组织的核酸抽提液中,用反转录酶合成PSTVd eDNA,然后用PCR法进行扩增,扩增产物用电泳检测,建立了用PCR法检测PSTVd的新方法。结果表明,该方法特异性强,灵敏度可达0.15pg,比现有其它检测方法高,而且样品用量少。  相似文献   

4.
建立马铃薯纺锤块茎类病毒属(Pospiviroid)类病毒有效的芯片筛查技术,对该属类病毒进行筛查。分析了该属类病毒序列,得到19条具有属级鉴定特征的探针。这些探针符合GC含量在40%与60%之间、单个核苷酸含量不大于50%、无多于4个核苷酸的连续重复及不形成多于6个核苷酸的发卡结构的标准;将探针点制到玻璃片基上制备芯片。芯片探针有效性实验结果表明,菊花矮化类病毒(Chrysanthemum stunt viroid,CSVd)及番茄雄性株类病毒(Tomato planta macho viroid,TPMVd)样品杂交可获得有效信号;灵敏度实验结果表明,该芯片可检测到200 pg/μL的总RNA。该芯片可用于Pospiviroid类病毒的筛查。  相似文献   

5.
胡勤学  张春立 《病毒学报》1997,13(2):159-163
分别用生物素肼化学标记和DIG标记我国柑桔裂皮病类病毒(CEVd)全长克隆cDNA,用以上探讨对不同来源的的核酸样品进行斑点杂交。两种探针可检出病柑桔总核酸的最低含量久为400ng/斑点和80ng/斑点;生物素肼标记CEVd-DNA探讨针,可检出CEVd-cDNA的最低含量约为10pg/斑点,研制的CEVd检测试剂盒能检测出发病和隐性带毒苗木中的CEVd,灵敏、特异、简便、快速。试剂盒已使用于检测  相似文献   

6.
本文用光敏生物素标记的R3 cDNA探针杂交检测了HFRS患者外周血淋巴细胞、血清和尿沉淀细胞中HFRS病毒核酸。结果42份淋巴细胞标本中30份为阳性,48份血清标本中有24份出现阳性杂交信号,81份尿沉淀细胞标本中53份为阳性,表明将此光敏生物素标记的cDNA探针用于HFRS实验诊断和致病机理的研究是可行的。  相似文献   

7.
8.
光敏生物素和DIG标记Orf病毒DNA探针的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:是用于Orf病毒病的诊断和相应重组菌的检测,将HCE DNAHindⅢ/A,B片断及重组质粒pGRL-4A中消化的A片断用光敏生物素和地高辛进行标记,对不同病毒分离株DNA进行检测,并对不同重组质粒进行了Dot-blotting和Southem-blotting检测。结果:用光敏生物素标记的探针最低可检出12pg的DNA,地高辛标记的探针最低可检出0.1pg的DNA,且有极强的特异性。  相似文献   

9.
光敏生物素标记总DNA探针对大豆根瘤菌的检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
以光敏生物素标记慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)USDA110总DNA作为探针,与快生型大豆根瘤菌杂交时,没有杂交斑点形成,而与慢生型大豆根瘤菌中的部分菌株能形成杂交斑点,表明该探针具有种和部分菌株特异性,用该探针与压碎的根瘤汁液进行DNA杂交,检测USDA110在不灭菌的盆栽土壤中的竞争结瘤能力,发现USDA110在大豆不同生育期的占瘤率为70%~90%。  相似文献   

10.
应用光敏生物素标记核酸探针鉴定分枝杆菌的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
用光敏生物素标记非结核分枝杆菌临床分离株及标准分枝杆菌全染色体DNA制成探针,与已知标准牛分枝杆菌(BCG株)及不同种的非结核分枝杆菌DNA杂交,可快速将分支杆菌鉴定到种,同时以大肠埃希氏菌做阴性对照,显示良好的特异性和准确性。此种方法具有鉴定速度快、操作简便、稳定性好及对人体无害等特点,适用于结核杆菌和非结核分枝杆菌的菌种鉴定。  相似文献   

11.
12.
B组轮状病毒RT—PCR来源的cDNA探针核酸诊断方法的建立   总被引:2,自引:0,他引:2  
韩新兵  王正党 《病毒学报》1998,14(2):183-187
近十年来,国内外学者相继报道在人以及牛、羊、猪、大鼠的腹泻粪样中检出B组轮状病毒〔1-3〕。洪涛等于1983年首次报道成人腹泻轮状病毒(ADRV)属于B组轮状病毒〔4〕。目前,轮状病毒B组已被公认为引起人及不同动物腹泻的流行病学的重要因素。由于B组轮...  相似文献   

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本文研究了由嗜肺军团杆菌的巨噬细胞感染性增效子(mip)基因设计的一对引物,用PCR扩增嗜肺军团杆菌3、5、7、8血清型的4个标准菌株的特异DNA序列,研究了用该引物扩增BAL液中嗜肺军团菌特异DNA序列的方法、灵敏度及特异性。结果表明:用上述引物扩增嗜肺军团菌4个标准菌株的DNA,均可得到207bp的特异扩增产物,BAL液中的军团菌经离心及裂解液裂解后,可直接进行DNA扩增,当BAL与液中军团菌量为2×103CFU/ml时,即可检测出特异扩增带(电泳法),除军团菌外,其它受试细菌均无此特异性扩增,用本法对42例临床非典型肺炎患者的BAL液进行嗜肺军团菌的检测,在42份嗜肺军团菌培养均为阴性的BAL液中,其中一例PCR检测军团菌为阳性。本研究提示:用PCR检测BAL液中的军团菌是可行的,并有快速、灵敏、特异之忧点。  相似文献   

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应用聚合酶链反应检测口蹄疫病毒的实验研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
聚合酶链反应用于直接检测口蹄疫病毒(FMDV),可快速、灵敏地检出乳鼠组织或细胞繁殖的病毒的核酸。其灵敏度可达0.062pg,整个检测过程可缩短至4~5个小时内完成,比其它检测方法都敏感和快速。本文还探讨了直接用PCR扩增合成生物素化核酸探针检测口蹄疫病毒核酸的存在。  相似文献   

16.
用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒   总被引:2,自引:0,他引:2  
陈纯贤  万蜀渊 《病毒学报》1995,11(3):276-278
  相似文献   

17.
利用原位逆转录聚合酶链式反应(ISRtPCR)技术检测了15例肝细胞癌及其癌旁肝组织中丙型肝炎病毒(HCV)RNA的定位及分布,并探讨影响实验结果的重要因素。结果表明HCVRNA阳性信号主要位于肝细胞和癌细胞胞浆,胞核几乎阴性。影响结果的主要因素包括所用蛋白酶K浓度,消化切片的时间,组织固定所用固定剂的选择及PCR扩增的循环次数等  相似文献   

18.
丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT-PCR方法的比较   总被引:1,自引:0,他引:1  
采用HCV基因组结构区C区cDNA探针和非结构区NS3-4区cDNA探针,建立了用打点杂交(dotblothybridization)检测血清中HCVRNA的方法,同采用HCV基因组5’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测血清中HCVRNA的方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中HCVRNA,但RT-PCR法敏感性优于RNA打点杂交法。对于无血清学指标的慢性NANB肝炎病人的诊断,可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性,以及RNA提取方法。RT-PCR法适用于诊断病毒血症和复制,打点杂交法适用于研究HCVRNA量的变化,对治疗的评价,以及为实验筛选较高滴度的HCVRNA阳性样本。  相似文献   

19.
应用PCR技术检测病人血液标本中斑点热群立克次体DNA   总被引:1,自引:1,他引:1  
本文以聚合酶链反应(PCR),采用二次扩增法直接检测蜱传斑点热病人血液标本中斑点热群立克次体DNA,结果从7份标本中检出阳性1份,进一步的限制性片段多态性分析证明和斑点热群黑龙江立克次体基因型相同。实验证明:黑龙江立克次体对人具有致病性,同时也证明PCR技术快速、简单、敏感,用于斑点热群立克次体的早期诊断是可行的,并可作出分型鉴定。  相似文献   

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