侵染新疆甜菜的两种病毒分离物的研究

在新疆甜菜的根部和叶片分离到两个球状病毒分离物。从病毒形态、生物学及物化性质等研究结果证明这两个分离物实是一种病毒。病毒粒体力２０面体,直径约２８ｎｍ,回接到甜菜上产生环斑和沿脉线纹最后形成坏死斑。此外还侵染苋色藜,昆诺阿黎,番杏,菠菜等,引起局部坏死斑。在普通烟,心叶烟,菜豆,黄瓜,蕃茄上无症状侵染,病毒致死温度为７０℃,１０分钟。体外存括期１３天以上,冻干病叶７年后仍有侵染力。通过ＰＥＧ沉淀、差速离心、琼脂糖柱层析及蔗糖梯度离心,可得到较高浓度的纯化病毒,病毒的紫外吸收最低值在２４５ｎｍ,最高值在２６０ｎｍ。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定,病毒外壳蛋白的分子量为２．７×１０￣４道尔顿,病毒基因组核酸为三个组份,分子量分别为３．０８ｋｂ,１．２８ｋｂ和０．８５ｋｂ。在琼脂双扩散实验中,能与番茄黑环病毒（ＴＢＲＶ）抗血清产生较弱的沉淀线,与黄瓜花叶病毒（ＣＷＶ）、烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）、烟草坏死病毒（ＴＮＶ）、香石竹环斑病毒（ＣａＲＳＶ）的抗血清不发生反应。     

Complete Genome Sequences of Two Chinese Beet soil-borne virus Isolates Provide Evidence that the Genome is Highly Conserved

The complete nucleotide sequences of two Chinese isolates of Beet soil-borne virus (BSBV) from the Inner Mongolia and Xinjiang provinces (designated BSBV-IM and BSBV-XJ, respectively) were found to share around 99% sequence identity with that of a previously reported German isolate (BSBV-G). The genome organization of the three isolates was identical. A diversity index (Pi) analysis indicated that the overall nucleotide variability of all RNAs among the three isolates was <7%, only for the 5' part of the first triple gene block gene on RNA3 was it >6%. Although the 3' end of BSBV RNA 3 was previously reported to be highly variable, the results of this study show that the total BSBV genomes are considerably conserved, especially RNAs 1 and 2.     

甜菜黑色焦枯病毒新疆分离物基因组RNA的序列分析及侵染性cDNA克隆构建

甜菜黑色焦枯病毒(Beet black scorch virus,BBSV)新疆分离物(BBSV-X)和宁夏分离物(BBSV-N)分别来自生态环境不同的新疆和宁夏的甜菜产区,自然条件下,BBSV-X含有卫星RNA,BBSV-N不含有卫星RNA。为明确二者的分子差异,以BBSV-X基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得了全长cDNA克隆。序列分析显示,BBSV-X基因组RNA全长为3 644个核苷酸,与以往报道的BBSV-N相同,且核苷酸序列一致性高达99.45%。除5′和3′非翻译区各有一个核苷酸发生变异外,核苷酸序列差异主要存在于ORF1通读区和ORF6,氨基酸序列差异仅存在于ORF1的通读区。构建获得了BBSV-X的侵染性cDNA克隆,用体外转录物定量接种了苋色藜(Chenopodiumamaranticolor)和豇豆(Vigna sinensis),结果显示BBSV-X与BBSV-N之间在致病性上存在一定的差异。     

云南基孔肯雅病毒生物学性状的研究

本文对分离自云南的基孔肯雅病毒进行了生物学特性研究。实验证明基孔肯雅病毒对乳鼠有强而稳定的致病性,对C6/36,BHK21及Vero细胞有致病变作用,能与鹅和鸽红细胞凝集,最适pH5.75。电镜观察病毒呈圆形,有膜,外径66.8nm,内径47.7nm。交互血凝抑制及中和试验表明,云南毒株之间或与国外原株在抗原性上无明显差别,为同一血清型,并与同亚组病毒反应较弱,与其它虫媒病毒无交叉。本文还讨论了云南株与国外原株在某些生物学特性方面的异同。     

Cloning and Sequencing of VL Gene of Monoclonal Antibody Against Beet Necrotic Yellow Vein Virus

The results showed that PCR product was 318 bp VL gene of monoclonal antibody against beet necrotic yellow vein virus, code 106 amino acids. VL gene belongs to a k chain subclass Ⅱ of mouse, frame region had 85 % homogenous with the published sequencing of VL gene of mouse and was in accord with structural characteristics of VL of mouse.     

甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因在甜菜转基因植株中的表达

甜菜坏死黄脉病毒(Beet Necrotic Yellow Vein Virus,BNYVV)是一种由甜菜多粘菌(Polymyxo be tae)传播的多分体植物病毒．基因组由4～5条单链正意RNA构成^[1]。60年代末,由Tamada首次报道^[2],这种病毒可对甜菜造成严重危害,侵染甜菜后产生丛根症状(Rhizomania),并导致甜菜产量和含糖 量的大幅度下降。除欧洲、北美及日本的严重发生以外,我国自70年代以来在东北、内蒙古及西北许多省区也有大量甜菜丛根病的发生报道^[3]。由于尚无有效药剂及措施用于甜菜丛根病或病毒传播介体的防治．在我国也无法采用大面积轮作作为防治手段,所以目前在世界各地及我国上述地区甜菜丛根病的发病面积逐年扩展,对甜菜生产和制糖业造成直接威胁。针对这一情况．本文报道了含有甜菜坏死黄脉病毒外壳蛋白基因的甜菜植株的转化再生工作,以期在甜菜亲本育种中获得新的抗性材料．为抗病毒品种的培育打下基础。     

甜菜黑色焦枯病毒外壳蛋白与病毒致病性的关系

利用RT-PCR方法,构建获得了由T7RNA聚合酶启动子驱动的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全长cDNA克隆pUBF52.摩擦接种苋色藜(Chenopodiumamaranticolor)后,体外转录产物可导致与野生病毒相同的枯斑症状,蛋白质印迹和RNA印迹检测也都证明了转录产物的侵染活性.构建了BBSVp24基因的原核表达载体pECP1,转化大肠杆菌BL21后的诱导表达产物能够与BBSV的抗血清呈现特异性反应,表明该基因编码产生BBSV的外壳蛋白(CP).以pUBF52为模板,分别构建了BBSVCP基因的移码突变体和不同程度的缺失突变体.侵染性检测表明,CP基因的移码突变对BBSV在苋色藜上所导致的枯斑症状及病毒RNA在寄主体内的积累基本没有影响,但CP基因的大部或完全缺失会使体内病毒RNA的积累水平大大降低,其中CP基因完全缺失的突变体转录物接种苋色藜后仅能够产生很轻的枯斑症状.将绿色荧光蛋白(GFP)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因分别与BBSVCP基因的5′端融合,构建了表达载体pBGFP和pBGUS.摩擦接种苋色藜叶片后可观察到GFP或GUS基因的表达,为探索利用BBSV作为外源蛋白的表达载体奠定了基础.     

甜菜坏死黄脉病毒75kDa通读蛋白基因构建与表达

利用DNA重组技术,将甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的CP基因和54kDa通读区片段拼接。构建了BNYVV 75kDa通读蛋白基因。序列分析表明,构建的75kDa通读蛋白基因与野生型相比．只有4个核苷酸发生了改变(包括将CP基因的终止密码子TAG改造为ATG),相应地2个氨基酸也发生了改变。将75kDa通读蛋白基因及其54kDa片段分别克隆到pJw2上,构建了这两十基因的原核表达载体。SDS—PAGE和western blotting检测结果表明,75kDa通读蛋白基因在E coli BL21(DE3)中经温度(42℃)诱导后除可特异地表达75kDa蛋白外。还产生两种小蛋白。75kDa通读蛋白基因的54kDa片段只表达出37kDa的蛋白。     

甜菜坏死黄脉病毒75kDa通读蛋白基因54kDa片段的克隆及其序列分析

以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板,通过反转录和PcR扩增获得75kDa通读蛋白基因54kDa片段的目的片段。将其克隆到pGEM－7Zf(+)上并转化DH5α得到了含有完整s4kDa片段的重组子pGBW52。采用双脱氧终止法进行序列分析。结果表明内蒙分离物的54kDa片段全长为1509nt,与法国的F13分离物相比缺失了3个核苷酸。其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列的同源性分别为94．97％和96．42％．     

云南辛德毕斯病毒的生物学性状研究

本文对云南首次分离到的Sindbis病毒进行了滤过试验,耐酸耐醚试验、致细胞病变、动物敏感性试验、血压 凝特性、空斑和毒力等试验研究,结果符合披膜病毒科的病毒特性。交 因抑试验和免疫荧光试验,以及空斑减小中和试验进一步证实为甲病毒属的Sindbis病毒,其空斑纯化株的生物学特性也与原株相符,纯化株的制备为该株病毒分子生物学研究的准确性和一致性提供了条件。云南Sindbis病毒的首次分离具有重要的流行病学意义,其生物学特性研究结果对我省该病的诊断和防治具有重要的指导意义。     

中国甜菜坏死黄脉病毒RNA5的检测及其核苷酸序列分析

利用反转录 Ｐ Ｃ Ｒ 方法,对甜菜坏死黄脉病毒（ Ｂ Ｎ Ｙ Ｖ Ｖ）５ 个中国分离物的 Ｒ Ｎ Ａ５进行了检测,结果表明新疆分离物、黑龙江分离物和内蒙古乌拉特前旗分离物不含有 Ｒ Ｎ Ａ５ ,只有包头分离物和呼和浩特分离物有 Ｒ Ｎ Ａ５ 。序列分析结果,包头分离物和呼和浩特分离物 Ｒ Ｎ Ａ５ 基因组分别为１３３８ ｎｔ 和１３５８ ｎｔ,均只包含１ 个开放阅读框架,编码产生２６ ｋ Ｄ 蛋白。与法国 Ｆ７２ 分离物和日本 Ｄ５ 分离物相比, 各分离物间核苷酸序列同源性为９３７ ％ ～９８５ ％ ,由此推导的氨基酸序列同源性为９１８ ％ ～９８２ ％ 。     

宁夏甜菜的烟草环斑病毒的鉴定

从宁夏患丛根病甜菜的病根中分离到一种球状病毒粒子,直径约为２８ｎｍ。提纯病毒的紫外扫描呈典型的核蛋白曲线,最大吸收为２６０ｎｍ,最小吸收为２４０ｎｍ,Ａ＿（２６０）／Ａ＿（２８０）＝１．３０。寄主范围广,能侵染茄科、豆科、藜科、葫芦科、番杏科等１７种植物。病毒的ＴＤＰ为６５℃,ＤＥＰ为１０￣（－３）,体外存活期６－７天。有较强的免疫原性。病毒的抗血清与烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）之间产生明显的沉淀线。经初步鉴定认为该分离物是烟草环斑病毒。     

水稻条纹病毒两个分离物RNA4基因间隔区的序列比较

通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增了我国水稻秫纹病毒（ＲＳＶ）山东济宁（ＪＮ）、云南宜良（ＹＬ）两个分离物ＲＮＡ４基因间隔区（ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ｒｅｇｉｏｎ,ＩＲ）序列,并克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ载体上。序列分析结果表明：ＪＮ、ＹＬ两分离物ＲＮＡ４ ＩＲ均由６５４个核苷酸组成,两者之间的同源率为９２％。ＪＮ、ＹＬ两个分离物ＲＮＡ４ ＩＲ在ＡＵ碱基富集处可形成上明显的结构,其中一个序列比较保守,形成的发夹     

SEN病毒中国株流行病学研究及克隆和序列分析

为了解SEN病毒中国株的流行病学及基因序列 ,采集肝炎患者 (甲～戊型 )、非甲～非戊型肝炎患者、ALT升高的婴幼儿、尿毒症患者、静脉毒瘾者和健康体检人群的血清标本 ,用巢式PCR检测SEN病毒 ,结果他们的检出率依次为 13 3%、2 0 5 %、4 8%、5 8%、5 7%和 0。PCR获得了两种不同长度阳性片段。选取 5份阳性PCR产物进行纯化、连接及转化 ,获取重组克隆 ,命名为 pGCEM -SENVL(1、2、3)、pGEM -SENVS(1、2 ) ,进行DNA序列分析。结果与SEN病毒 (AX0 2 5 6 6 7)序列同源性分别为 87 7%、76 1%、88 2 %、72 7%和 78 8%。首次发现我国存在SEN病毒散发感染 ,并存在不同于SEN病毒 (AX0 2 5 6 6 7)的中国变异株 ,而且有同一患者存在两种变异株的复合感染     

两株H9N2亚型禽流行性感冒病毒HA基因序列分析

禽流感(AI)是由A型流行性感冒(流感)病毒引起的一种严重危害禽类健康的传染性疾病.禽类感染禽流感病毒(AIV)后,症状可表现为非显性感染,亚临诊感染,或轻度呼吸道疾病,产蛋量降低,直至急性全身致死性疾病等多种形式.     

甜菜种质资源遗传多样性研究与利用

通过多年对中国甜菜种质资源搜集、整理、繁种、鉴定及编目入库等方面进行科技攻关研究,弄清了目前我国甜菜中期库保存种质资源源遗传多样性的丰富程度,根据对已经编目入国家种质长期库的1382份甜菜种质资源材料的主要经济性状鉴定试验结果,证实了我国甜菜种质资源的块根产量、含糖率和产糖量均以西北生态区最高,华北生态区次之,东北生态区最低,同时其变异幅度也比较大。由此表明我国甜菜不同生态区保存的甜菜种质资源材料具有相当高的异质性和丰富的遗传基础,这将有利于推动我国甜菜科研及育种事业的可持续发展。     

福建省2000～2003年戊型肝炎病毒分离株的分子流行病学研究

为研究福建省2000～2003年急性散发性戊型肝炎病毒（HEV）分离株的分子流行病学特征,采用RT—PCR方法扩增HEV ORF2的基因片段,经纯化、克隆、测序后,对其序列用Neighbor-Joining法和Bootstrap法进行基因进化分析。从158例急性散发性戊型肝炎的血清标本中扩增出72份HEV RNA,经基因进化树分析,这72株HEV均属于HEV基因Ⅳ型,且被明显地分为A、B、C、D共4个组群。A群的同源性最高,群内同源性为93．3％～100％;D群的同源性最低,群内同源性在86．6％～100％之间。A群和B群流行株所占比例没有差异;C群流行株所占比例由2002年的7．1％逐渐增加到2003年的26．3％（x^2=10．553,P=0．014）;D群则由85．7％逐渐减少到44．7％（x^2=8．136,P=0．043）。引起福建地区急性散发性戊型肝炎流行的HEV均属于HEV基因Ⅳ型,基因型内存在不同的组群,其中D群的变异较大。     

新城疫病毒抗肿瘤作用的研究进展

新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)属副黏病毒,由于其安全性,自从被发现以来,即受到广大研究者们的关注。经过多年的研究,新城疫病毒在抑制人肝癌、恶性胸膜间皮瘤、纤维肉瘤以及头颈癌细胞方面都取得了可喜的成果。目前,新城疫病毒抑瘤作用的机制尚未完全阐明,研究表明主要涉及诱导肿瘤细胞凋亡,发挥抑瘤佐剂作用,增强免疫细胞活性及抑制肿瘤化疗耐药。NDV即使在缺氧环境下,也可以稳定的发挥抗肿瘤作用,且其强毒株具有高效的抗肿瘤作用。本文主要就近年来新城疫病毒抗肿瘤作用的研究进展进行了综述。     

Variation in Field Isolates of Measles Virus during an 8-Year Period in Japan

Field isolates of measles virus (MV) during an 8-year period in four areas of Japan, i.e., Osaka, Nagoya, Tokyo and Akita, were classified into three types in regard to the electrophoretic mobility of the hemagglutinin (HA) proteins: S type with small (78 K) HA, M type with intermediate (80 K) HA and L type with large (82K) HA. The type of field isolates was closely related with the geographical location and the year of virus isolation. The S type strain was isolated only in an outbreak from 1983 to 1984, whereas the M and L type strains were isolated between 1983 and 1990. The HA genes of the M and L type strains of MV were found to have a nucleotide substitution which introduces a new potential glycosylation site. In addition, the matrix proteins of all field strains isolated after 1977 showed slower electrophoretic mobility of 42 K than 39 K of the Edmonston and Toyoshima strains. These results indicate that MV strains of different HA types existed concomitantly and that major populations of MV currently circulating in Japan are changing from those prevalent in 1983-1984.     

三株口蹄疫病毒的克隆和基因型鉴定

目的：将O、A、Asia—Ⅰ型等3株口蹄疫病毒（FMDV）VP3-VP1—2A区域的一个片段克隆到pMD18-T载体上,构建阳性重组质粒,并且鉴定3株病毒所属的基因型。方法：将从中国农业科学院兰州兽医研究所获得的O、A、Asia—Ⅰ型灭活FMDV提取RNA作为模板,采用RT-PCR技术扩增了VP3-VP1-2A区域的一个约1070bp的片段,包含了全部的VP1序列;将其克隆到pMD18-T载体上,鉴定后得到阳性重组质粒;将目的片段进行序列测定、分析、绘制系统发育树,进而确定各灭活病毒的基因型。结果与结论：经鉴定,O型灭活FMDV属Cathay基因型,它与该基因型3条参考毒株序列的相似性在87％以上;A型灭活FMDV与参考株的相似性差异较大,但在系统发育树上可以看出该毒株属于Asia基因型;Asia-Ⅰ型FMDV只有1个基因型,将测序结果在NCBI网站上BIJAST,证实该灭活病毒为Asia—Ⅰ型。