CTD及其磷酸化状态在基因表达调控中的作用

真核ＲＮＡ聚合酶Ⅱ的最大亚基羧基末端结构域（ＣＴＤ）在基因表达调控中扮演着重要角色。本文对ＣＴＤ的基本特性及其磷酸化／非磷酸化状态转变在转录起始复合物形成、转录延长转录后加工和特定基因转录调控等过程中发挥的作用进行了综述。     

抗水稻条纹叶枯病毒核酶的设计,克隆及体外活性测定

为探索控制水稻条纹叶枯病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ,ＲＳＶ）设计合成了特异切割该病毒ＲＮＡ保守区及编码病害特异性蛋白（ＤｉｓｅａｓｅＳｐｅｃｉｆｉｃＰｒｏｔｅｉｎ,ＤＳＰ）基因的核酶,核酶基因的长度均为４０个碱基,用化学合成方法合成其正链及与其３＇－末端互补的１５个碱基引物,用ＴａｇＤＮＡ多聚酶合成其互补链。双链ＤＮＡ直接插入克隆载体ＰＧＥＭ３ｚｆ（＋）的Ｓｍａｌ位点。序列测定表明,克隆得到的核酶序列与设计的核酶序列完全一致。经ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶体外转录得到核酶ＲＮＡ。当核酶ＲＮＡ与以同样方法转录得到的靶基因ＲＮＡ混合反应,可得到预期结果相同的切割片段,表明两种核酶在体外均具有特异性切割活性。     

HCV5＇端非编码区cDNA的体外转录

采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇端非编码区（５＇ＮＣＲ）３０２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒,获得的重组体ｐＵＮ进行序列测定。将ｐＵＮ的目的基因亚克隆进体外转录载体ｐＳＰＯＲＴＩ多克隆位点的ＥｏｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点之间,所得重组体ｐＳＮ线性化后由Ｔ＿７ＲＮＡ多聚酶及ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶引导体外转录反应,产物经凝胶电泳及特异引物ＲＴ－ＰＣＲ,证实ＳＰ６引导的是正义ＲＮＡ,Ｔ７合成的是反义ＲＮＡ,其大小分别力４２９ｂｐ和３６２ｂｐ。并证实所得ＲＮＡ力ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ转录而来。获得的ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ和ＲＮＡ在常规逆转录和ＰＣＲ步骤中用于设立有效的模板对照,对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时,ＨＣＶ５＇ＮＣＲ体外转录载体的构建可用于制各ＲＮＡ探针和反义ＲＮＡ,改进后还可作为定量ＰＣＲ的竞争性模板。     

真核普通转录因子

三类真核ＲＮＡ聚合酶分别选择性地转录细胞核基因,其转录特异并不决定于ＲＮＡ聚合酶本身,而是取决于被转录基的启动子元件及能识别并结合这些元件的普通转录因子,它们与ＲＮＡ聚合酶相互作用,在启动子区组装成转录起始复合物,从而起动转灵,已知的三类普遍转寻因子中,大多数为相应ＲＮＡ聚合酶所专用,只有少数因子中的个别亚基是三类酶所通用。本简述这三类普通转录因子的结构,性质及其在转录中的功能。     

CD40／CD40L介导信号的免疫调节作用

Ｂ细胞的ＣＤ４０分子与活化Ｔ细胞的ＣＤ４０配体（ＣＤ４０Ｌ）结合可调节Ｂ细胞生长分化、克隆转换、Ｉｇ分泌、阻断Ｂ细胞凋亡和导Ｆａｓ表面分隔表达等,直接参与调节体液免疫。ＣＤ４０与ＣＤ４０Ｌ结合也影响细胞免疫功能,诱导Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞因子产生《ＣＤ４０和ＣＤ４０Ｌ连接ＴＲＡＦ蛋白多聚化,从而调节基因的转录。ＣＤ４０介导的信号传导过程与蛋白酷氨酸酶、蛋白酪氨酸磷酸化有等有关。     

HAP转录因子与DNA结合的活力受细胞内氧化还原系统的调节

ＨＡＰ 转录因子（ ＨＡＰ２／ＨＡＰ３／ＨＡＰ４／ＨＡＰ５） 是存在于酿酒酵母中的一种异源多聚蛋白,它能与酵母中许多启动子上游的ＣＣＡＡＴ盒（ 顺式作用元件） 专一性结合, 以增强基因的转录。在酵母ｈａｐ５ 突变株的细胞中,用酵母单杂交系统从水稻ｃＤＮＡＧＡＬ４ 表达文库中筛选出的阳性克隆是编码谷胱甘肽氧还蛋白的ｃＤＮＡ,提示细胞内的氧化还原系统可能作用于ＨＡＰ蛋白,从而对ＣＣＡＡＴ盒的结合活力起调节作用。对ＨＡＰ３ 亚基分子中半胱氨酸残基的突变实验结果支持上述推测     

HCV5′端非编码区cDNA的体外转录

采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５′端非编码区（５′ＮＣＲ）３０２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段,经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒,获得的重组体ｐＵＮ进行序列测定,将ｐＵＮ的目的基因亚克隆进体外转录载体ｐＳＰＯＲＴＩ多克隆位点的ＥｃｏＲｆｆＩ和ＰｓｔＩ切点之间,所得重组体ｐＳＮ线性化后由Ｔ７ＲＮＡ多聚酶及ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶引导体外转录反应,产物     

应用酵母双杂交系统筛选AMPK相互作用蛋白

一磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)是调节体内代谢平衡的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。应用酵母双杂交系统,以AMPKβ1亚基作为"诱饵"蛋白,筛选均一化的人源cDNA文库,寻找与AMPK相互作用的蛋白。通过对150个阳性克隆进行验证,最终得到了63个与AMPKβ1亚基相互作用的蛋白。其中,包括代谢酶、转录因子或转录相关蛋白、蛋白转运相关蛋白、GTP结合蛋白、支架蛋白、细胞周期调节蛋白、RNA结合蛋白等以及一些未知功能的蛋白。从酵母双杂交的结果来看,AMPK不仅在代谢领域,而且在许多非代谢领域,如核受体及其它转录因子的调节、信号转导、DNA修复及细胞周期调节等,可能都起到非常重要的作用。     

特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究

根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯地病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）复制酶基因负链ＲＮＡ的核酶序列,以体外转录的ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负链ＲＮＡ作为底物,与转录的核酶ＲＮＡ共同保温,以检测核酶对底和的体外切割作用。实验结果表明,核酸疼 ＲＮＡ对ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负锭ＲＮＡ具有特异切割作用。     

真核生物mRNA的帽结构与帽结合蛋白

帽结构是所有ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ转录产物的特征性结构,它在ｍ ＲＮＡ 的功能和代谢的很多方面起作用． 在这些过程中还离不开相关蛋白质对它的识别和粘附,作为它行使功能的媒介,这些蛋白质就称为帽结合蛋白（Ｃａｐ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ,ＣＢＰ）． 该文主要讨论了帽结构与胞质中的ＣＢＰ－ｅＩＦ４Ｅ（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ４Ｅ,真核起始因子４Ｅ）的相互作用在ｍ ＲＮＡ 指导的翻译起始中的作用机制,以及帽结构与核内发现的另一种ＣＢＰ复合体相互作用在ｍ ＲＮＡ 加工中的作用．     

小分子RNA也能调节真核基因的表达

小分子ＲＮＡ也能调节真核基因的表达仅在若干年前,“酶必定是蛋白质”这个概念是天经地义、神圣不可侵犯的,而今天ＲＮＡ也可以是酶已是众所周知的事实了。最近（１９９３年）Ｌｅｅ．Ｒ．Ｃ．等与ＷｉｇｈｔｍａｎＢ．Ｈａ．Ｉ等都发现一种小分子ＲＮＡ可象调节蛋白那...     

酿酒酵母中的RNA解旋酶

ＲＮＡ解旋酶是一类能解开双链ＲＮＡ的酶 ,存在于所有生物体中 ,其家族成员在进化上具有保守序列。ＲＮＡ解旋酶属于分子伴侣 ,对于确保ＲＮＡ分子的正确折叠以及保持和修饰其特定的二级、三级结构必不可少。在核转录、前体ｍＲＮＡ剪接、核糖体生物发生、核质转运、翻译、ＲＮＡ降解以及结构基因表达等过程中ＲＮＡ解旋酶都发挥了一定的作用。1 .解旋酶的结构ＲＮＡ解旋酶大部分属于蛋白质超家族Ⅱ (ＳＦⅡ ) ,包含七个保守序列 (图 1 ) [1] 。除核心区域外 ,多数ＲＮＡ解旋酶具有不同的Ｎ末端和Ｃ末端部分 ,可能与底物专一性有关。目前 ,…     

果实成熟过程相关调控基因研究进展

果实成熟过程中,多聚半乳糖醛酸酶（ＰＧ）参与果胶的分解,从而在果实软化中起作用,新近发现,果实软化过程中,协同展蛋白具有一定的作用：ＡＣＣ合成酶（ＡＣＳ）、ＡＣＣ氧化酶（ＡＣＯ）和ＡＣＣ脱氨酶与乙烯合成直接有关,ＡＣＳ是乙烯形成的关键酶,由多基因家族编码,各个基因协同表达,每一基因都有自己的转录特性,新近不断发现果实中ＡＣＳ基因家族中的新成员;ＡＣＯ是一种与膜结合的酶,这种酶具有结构上的立体专一性     

CAAT结合蛋白CBF在转录中的作用

ＣＡＡＴ结构是一种在真核生物启动子中普遍存在的顺式作用元件。ＣＢＦ,又称为ＮＦ -Ｙ、ＣＰ１,是一个ＣＡＡＴ特异性转录因子。在转录过程中 ,ＣＢＦ与ＣＡＡＴ特异性结合 ,共同调控启动子的转录 ,本文综述了ＣＢＦ的结构及其在转录中的作用。１ＣＡＡＴ结构ＣＡＡＴ结构存在于由ＲＮＡ聚合酶Ⅱ所转录的大多数真核生物基因的近端启动子中〔１〕,它与其他的启动子元件相互协调 ,一起控制启动子的转录活性。在高等的真核细胞启动子中 ,ＣＡＡＴ一般位于 -８０区〔２〕。对不同物种的某些基因进行比较 ,发现ＣＡＡＴ结构在启动子上的位置以…     

大肠杆菌中一种对NF-IL63′UTR专一的结合蛋白

在大肠杆菌ＴＧ１ 中, 发现了一种与人白介素６ 核转录因子ｍＲＮＡ 的３′非翻译区专一结合的蛋白, 其Ｎ端氨基酸序列为ＡｌａＴｈｒＡｒｇＩｌｅＧｌｕＰｈｅＨｉｓＧｌｙＣｙｓｓ（ ？）Ｇｌｙ。对数据库检索未发现完全同源的蛋白。对于在大肠杆菌中发现真核ｍ ＲＮＡ专一结合蛋白的意义做了讨论。     

用荧光影像系统研究莲子叶细胞中核酸和蛋白质的含量

用酶解法解离受精后５ ｄ 和２０ ｄ 的红莲（ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｓｐ．） 子叶细胞,应用冷却型科学级电荷偶联装置（ＣＣＤ） 摄像式显微荧光影像系统对单个５ ｄ 细胞和２０ ｄ 细胞的ＤＮＡ、ＲＮＡ和总蛋白相对含量进行了相关测量。实验结果表明：２０ ｄ 细胞ＤＮＡ成为多倍化,为４Ｃ～８Ｃ水平。视窗分析表明：同一４ＣＤＮＡ 视窗中,２０ ｄ 细胞比５ ｄ 细胞的ＲＮＡ和总蛋白含量增加１１ 倍以上。２０ ｄ 细胞的两个ＤＮＡ视窗（４Ｃ和８Ｃ） 中,随着ＤＮＡ倍性的增高,ＲＮＡ 和总蛋白含量也以大致上相应的倍数增高。这些数据表明：红莲子叶贮存蛋白的大量积累既与ＤＮＡ 倍性有关,又与发育过程中贮存蛋白亚基基因选择性的表达有关     

丙型肝炎病毒定量分析的研究进展

近年来在多聚酶链反应（ＰＣＲ）定性检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的基础上建立了数种ＨＣＶ的定量检测方法。随着ＨＣＶ ＲＮＡ定量试验的开展，对ＨＣＶ病毒血症水平的消长规律获得了较为深刻的认识，并在临床实践中逐步得到了推广应用。本文就此方面的研究进展作了简要综述。     

真核生物mRNA的帽结构与由结合蛋白

帽结构是所有ＲＮＡ聚合酶Ⅱ转录产物的特征性结构,它在ｍＲＮＡ的功能和代谢的很多方面起作用。在这些过程中还离不开相关蛋白质对它的识别和粘附,作为它行使功能的媒介,这些蛋白南就称为帽结合蛋白（Ｃａｐ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ,ＣＢＰ）。该文主要讨论了帽结构与胞质中的ＣＢＰ－ｅＩＦ４Ｅ（ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ４Ｅ,真核核起始因子４Ｅ）的相互作用在ｍＲＢＮＡ指导的     

授粉诱导兰花花部乙烯生物合成基因在转录水平上的表达

朵丽蝶兰（Ｄｏｒｉｔａｅｎｏｐｓｉｓｈｙｂｒｉｄａ Ｈｏｒｔ．）的花授粉后,测定乙烯的产生,并分析授粉后花部各器官乙烯生物合成的ＡＣＣ合成酶和ＡＣＣ氧化酶两个基因转录水平上的表达。授粉后在花部均可探测到ＡＣＣ合成酶和ＡＣＣ氧化酶的ｍ ＲＮＡ。在花部不同器官之间,此两种酶的ｍ ＲＮＡ的积累水平均表现出一些差异。ＡＣＣ合成酶的ｍ ＲＮＡ 积累与ＡＣＣ氧化酶相比,具有更明显的特异性。而ＡＣＣ氧化酶ｍ ＲＮＡ 的积累水平远比ＡＣＣ合成酶高     

果实成熟的基因工程研究

乙烯是催化果实成熟的内源植物激素。本文简要介绍用植物基因工程的手段分离和鉴定出乙烯合成和果实成熟有关的多聚半乳糖醛酸酶、ＡＣＣ氧化酶、ＡＣＣ合酶及ＡＣＣ脱氨酶的基因。并利用反意ＲＮＡ技术将它们的反意ＲＮＡ转入番茄中,得到了相应的反意转基因植株和果实,实现了在基因水平上对果实成熟的调控,开辟了植物育种的新途径。