用显微荧光术定量蚕豆染色体DNA

本文的目的在于探索一个简便而准确地测定单个染色体DNA含量的方法。作者选用蚕豆(Vicia faba,2n=12)根尖细胞做材料。第一步用Feulgen染色及显微吸收光度术测得该品种二倍体胞核DNA含量力36.15皮克(微微克,第二步用DNA特异性荧光染料——DAPI标记该细胞的染色体,然后在UNIVAR显微荧光计上测量各条染色体的荧光强度。经简单换算和统计学处理求得六对染色体DNA分布:9.27、5.03、4.71、4.47、4.26、3.91皮克(微微克)。     

对同一细胞内DNA、RNA和蛋白含量相关测定的显微荧光光度法

用荧光染料DAPI、PyroninY和FITC分别染同一细胞内DNA、RNA和蛋白.在紫外光、绿光和兰光顺序激发后,用MPVⅡ显微荧光光度计测量反映单个细胞内DNA、RNA和蛋白含量的荧光强度.根据荧光发射光谱分析,每种染料荧光之间的干扰是可以忽略的.测量结果与FCM获得的结果是一致的.显微荧光光度术对单个细胞多参数相关测量的优点是简单、便宜,并可用于对活细胞获得形态学和定量细胞化学的组合信息.     

荧光相关谱技术及其应用

基于对处于平衡态少量荧光分子集合的强度涨落进行时间平均的技术,荧光相关谱fluoreswceance correlation spectroscopy,FCS)技术最近已经应用于细胞环境过程的研究。FCS优秀的灵敏特性为我们实时测量许多参数提供了途径,而且具有快速的时间特性和高空间分辨率。测量的参数包括扩散速率、局部浓度、聚合状态和分子间的相互作用。荧光互相关谱(fluorescence cross-correlation spectroscopy,FCCS)进一步扩展了FCS技术的应用,包括在活细胞中的广泛应用。本文介绍了FCS技术的原理、实验装置及其应用。     

植物ms 级叶绿素荧光动力学数据采集和分析软件

本文介绍了一套可在IBM PC(兼容)微机上运行的植物ms级荧光动力学数据采集和分析软件。本软件用C语言写成,具有汉化界面、菜单驱动、彩色人机对话窗口、操作简便、灵活,兼容性好等优点。本文着重讨论了本软件如何减少荧光动力学测量中的误差、在不过分占用内存的情况下扩大采样时间范围以及如何精确测量固定荧光(Fo)和偏转荧光(Fi)等问题。本软件和我们自行组装的植物ms级动力学荧光计——植物产量荧光计PFM-101型可广泛应用于农业、植物生态学及植物生理学的光合测量和研究。     

酶法分离胚囊的荧光显微观察

用荧光显微技术对酶法分离的胚囊进行了三方面的研究:(1)利用与DNA结合的荧光染料Hoechst 33258对金鱼草、蚕豆、芝麻、烟草、龙葵等植物的分离胚囊??染色,可以观察胚囊中各组成细胞的核以及合子和胚乳的核。(2)用金胺O和樱草黄两种荧光染料染色,证明胚囊壁中含有耐果胶酶与纤维素酶作用的成分,可能是角质,因而虽经上述酶处理仍能保持胚囊的整体性。(3)用脱色苯胺蓝染色观察了被果胶酶分离的泡桐大孢子发生的各期材料,对这一过程中胼胝质的动态作了描述。以上各项实验表明:酶法分离技术与荧光显微技术相结合,是研究胚囊细胞生物学的一种简便有效的方法。     

生物科学研究中的激光多光子显微技术

本文综述了生物科学中近红外（NIR）多光子激光扫描显微技术的进展,其中包括：多光子显微特点,激光光源,荧光寿命的测量,多光子多色实时杂化荧光（FISH）,非人侵性活体光学解剖,植物学中的多光子显微技术,细胞的多光子显微损伤、皮米非入侵和非接触性外科手术等。     

自制显微荧光光度系统及其应用

用自行开发的细胞显微荧光分光光度系统对神经细胞内游离的静息[Ca~(2 )]_j及其动态生理变化成功地进行了测定,实验结果证明系统工作稳定、重复性好,测定结果也符合公认的动态变化特点。本文报道了该项研究工作开发成功的细胞显微荧光光度系统及神经细胞内钙离子的分析测定过程及其结果。     

阿达玛变换显微图象法测定乳腺癌DNA含量

以吖啶橙为细胞DNA荧光探针,用阿达玛(Hadamard)变换显微图象分析仪和显微荧光光度计分别测定了4例乳腺肿瘤的细胞DNA含量(倍性),并对分析结果进行了比较,二者的分析结果均与病理学诊断结论相吻合.阿达玛变换显微图象分析仪作为一种新的细胞定量分析仪器,其分析结果的准确度可与显微荧光光度计相媲美,而且阿达玛变换显微图象分析仪还具有其独特的优点,如信噪比高、具有同时分析多个细胞和同步扣除背景信号的能力等.     

激光扫描共聚焦显微镜荧光探针的选择和应用

激光扫描共聚焦显微镜是检测生物荧光信号的最新技术手段。不仅广泛用于荧光定性、定量测量,还可用于活细胞动态荧光监测、组织细胞断层扫描、三维图象重建、共聚焦图象分析、荧光光漂白恢复、激光显微切割手术等。本文拟就激光扫描共聚焦显微镜常用的检测内容及其相关荧光探针的选择和应用做一简单的介绍。     

一种新型的DNA荧光染料—DAPI的光学特性及其应用

近年来,由于荧光显微镜的改进,荧光染料的不断增多以及免疫荧光技术的发展,荧光显微术已在细胞生物学的研究中广泛应用。荧光显微术用于研究细胞核和染色体已有较长的历史,不过目前除了哺乳类染色体分带荧光技术和孚尔根型荧光染色有所发展外,曾经使用过的一些核的荧光染色方法已应用不多。     

一种新型的DNA荧光染料-DAPI的光学特性及其应用

近年来,由于荧光显微镜的改进,荧光染料的不断增多以及免疫荧光技术的发展,荧光显微术已在细胞生物学的研究中广泛应用。荧光显微术用于研究细胞核和染色体已有较长的历史,不过目前除了哺乳类染色体分带荧光技术和孚尔根型荧光染色有所发展外,曾经使用过的一些核的荧光染色方法已应用不多。最近,一种新型的DNA荧光染     

全内反射荧光显微术在活细胞单分子检测中的应用

全内反射荧光显微术(total internal reflection fluorescence microscopy,TIRFM)是一种灵敏、快速的单分子成像和检测技术,近年来得到迅猛发展。该技术已广泛应用于生命科学、化学、物理学等领域。本文综述了全内反射荧光显微术的原理及其在活细胞单分子检测中的应用,并对其发展前景进行了展望。     

荧光漂白恢复动力学分析

一、引言荧光漂白恢复测量技术(FPR),作为测量处于微小系统中(如位于单个活细胞上)的经过荧光染色的分子、分子团块等迁移率的有力工具而得到迅速发展。目前不少生物研究人员用FPR来测量细胞膜、脂质体中的分子迁移率等问题,这是因为细胞膜中分子的侧向运动反映了膜中分     

荧光显微技术在酿酒酵母细胞研究中的应用

为了探讨荧光显微技术在酿酒酵母细胞不同研究方面的作用,通过GFP标记目标蛋白的同源重组的方法和免疫荧光技术标记两种蛋白,最后利用荧光显微镜观察酵母细胞中某种蛋白定位及两种蛋白共定位情况;分别用荧光染液DAPI、FM4-64、BODIPY、Filipin、DHE和Annexin V试剂处理酵母细胞之后,利用荧光显微镜观察细胞中的细胞核、液泡、脂滴、麦角固醇、ROS和细胞凋亡的情况。结果显示,荧光显微技术在酵母细胞蛋白定位、细胞器观察及细胞中ROS和细胞凋亡等研究方面具有重要作用。     

用荧光影像系统研究莲子叶细胞中核酸和蛋白质的含量

用酶解法解离受精后５ ｄ 和２０ ｄ 的红莲（ Ｎｅｌｕｍｂｏ ｓｐ．） 子叶细胞,应用冷却型科学级电荷偶联装置（ＣＣＤ） 摄像式显微荧光影像系统对单个５ ｄ 细胞和２０ ｄ 细胞的ＤＮＡ、ＲＮＡ和总蛋白相对含量进行了相关测量。实验结果表明：２０ ｄ 细胞ＤＮＡ成为多倍化,为４Ｃ～８Ｃ水平。视窗分析表明：同一４ＣＤＮＡ 视窗中,２０ ｄ 细胞比５ ｄ 细胞的ＲＮＡ和总蛋白含量增加１１ 倍以上。２０ ｄ 细胞的两个ＤＮＡ视窗（４Ｃ和８Ｃ） 中,随着ＤＮＡ倍性的增高,ＲＮＡ 和总蛋白含量也以大致上相应的倍数增高。这些数据表明：红莲子叶贮存蛋白的大量积累既与ＤＮＡ 倍性有关,又与发育过程中贮存蛋白亚基基因选择性的表达有关     

光致漂白荧光恢复技术及其进展

本文概述了荧光漂白恢复(FPR)技术的基本原理、方法、现状和最新进展。其次论述了影响FPR测量的若干因素及FPR对细胞的影响。     

抗砷细胞荧光染色后的激光共聚焦显微镜检测

目的:应用激光共聚焦显微镜检测活细胞内荧光物质含量.方法:传代培养长期低剂量砷诱导的抗砷细胞,用荧光染料Rhodamine-123对细胞染色30min,实验组与维拉帕米(Verapamil)共同孵育,对照组为单加Rhodamine-123的抗砷细胞.应用激光共聚焦显微镜采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列,并且记录不同时间段的细胞内荧光强度.结果:实验组细胞染色12h,24h,36h,48h,60h后,荧光强度依次为(51.567±0.7572)、(46.533±0.7095)、(39.557±0.601)、(38.6±0.6245)和(38.505±0.718),明显高于同时间段对照组的荧光强度,差异均有显著性(P＜0.01).结论:应用激光共聚焦显微成像技术能进行活细胞水平荧光物质实时定量检测.     

新型快速显微多道分光光度系统及其应用

介绍一种新型快速显微多道分光光度系统。利用倒置显微镜、衍射光栅、线阵CCD等构成的显微多道分光光度系统,可对微区样品在350nm-800nm（波长分辨率为0．2nm)光谱波长范围内进行快速光谱检测,最快检测时间为1ms。利用该系统进行的人血红细胞内血红蛋白测量分析表明,该具有高灵敏度、快速、无扰、在位、多光谱显微测量的特点,在生命科学研究中动态监测细胞生命过程的变化。     

超短脉冲技术测量癌细胞荧光光谱与荧光寿命

研究用于癌症诊断与治疗的光敏剂血卟啉（hematoporphyrin derivative,HPD）的超快光动力学过程,采用超短脉冲激光光谱技术和皮秒时间相关单光子计数系统,测量经血卟啉培养的活体癌细胞与正常细胞的荧光光谱、荧光寿命特性及荧光峰值强度随时间变化曲线,并测量单一细胞内部不同位置的荧光寿命特性,观测到：癌细胞样品在645 nm处具有特有的光谱谱峰;癌细胞样品荧光寿命的快成分约150 ps慢成分约1200 ps,而正常细胞样品快成分约300 ps慢成分约2500 ps;癌细胞样品的荧光峰值强度经12小时衰减约10%,而正常细胞样品衰减约55%;在细胞内部荧光寿命300 ps的快成分十分显著,且中心部位血卟啉浓度最高.癌细胞与正常细胞的荧光光谱、荧光寿命特性及荧光峰值强度随时间变化曲线相差十分明显,反映了癌细胞与正常细胞对血卟啉亲和特性有显著的差异,测量结果确认了荧光光谱技术诊断与治疗癌症的可行性,并对发展超短脉冲激光光谱技术早期诊断与治疗癌症具有重要的指导意义和临床应用价值.     

光镜荧光标记到电镜超微结构 组合式光电联合显微镜

<正>光电联合显微镜CLEM(Correlative Light and Electron Microscopy)利用荧光显微镜的分子标记功能,结合电子显微镜捕获高分辨率超微结构的能力,在细胞结构与功能研究之间搭建了一座桥梁。让细胞生物学家能够观察生物大分子在活细胞中的动态,进而确定亚细胞水平的超微定位。这已成为显微研究的前沿。