己酮可可碱对肺纤维化大鼠MMP-2和TIMP-1表达的影响

目的观察己酮可可碱(pentoxifylline, PTX)对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1)表达的影响,初步探讨其抗肺纤维化的作用机制.方法 SD大鼠36只,随机分为模型组、治疗组和对照组.模型组和治疗组气管内注射博来霉素诱导肺纤维化,对照组在相同条件下给予生理盐水.第二天起治疗组大鼠腹腔给予己酮可可碱6mg/kg.d,其余两组相同条件下给予生理盐水.治疗的第7d和28d,处死动物取出肺组织,用RT-PCR和免疫组化ABC法观察各组鼠肺组织MMP-2和TIMP-1表达的变化. 结果与模型组比较,治疗组经PTX作用的第7d和28d肺组织中MMP-2和TIMP-1 mRNA的基因转录均有减少,MMP-2 mRNA表达分别降低33.4%和35.5%(P＜0.001),TIMP-1 mRNA表达分别降低25.3%和33.0%(P＜0.05).免疫组化结果则显示,PTX作用的第7d和28dMMP-2分别较模型组降低30.7%和41.7%(P＜0.05),TIMP-1分别降低13.1%和19.8%(P＜0.05).结论 PTX对肺纤维化不同时期肺组织中MMP-2和TIMP-1的表达均有一定程度的降低作用,其可能通过调整MMP-2和TIMP-1比值使其趋于平衡,从而延缓甚至抑制纤维化的进程.     

茶多酚对Lewis 肺癌小鼠移植瘤MMP-2、TIMP-2 表达的影响

目的:观察茶多酚对肺癌小鼠移植瘤基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其相应的组织金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响,探讨茶多酚抗新生血管生成的效应机制。方法:建立57小鼠肺癌移植瘤模型,测定茶多酚低、高剂量组以及茶多酚联合沙利度胺组的肿瘤抑制率,并且采用免疫组化法检测各组MMP-2、TIMP-2表达水平以及MMP-2/TIMP-2比值,以探讨其抗肿瘤的分子机制。结果:实验表明,茶多酚有如下作用:①沙利度胺组、茶多酚低剂量组、茶多酚高剂量组、茶多酚低剂量联合沙利度胺组、茶多酚高剂量联合沙利度胺组的肿瘤抑制率分别为17.26%、16.94%、20.81%、21.94%和44.32%,茶多酚高剂量联合沙利度胺组与模型组瘤重比较,有统计学意义(P<0.05);②茶多酚各组及联合用药各组能下调肿瘤组织MMP-2蛋白表达,茶多酚高剂量联合沙利度胺组能上调TIMP-2蛋白表达,与模型对照组比较,均具有统计学意义(P<0.05);③用药各组MMP-2/TIMP-2比值均有所下降,茶多酚各组明显降低,茶多酚大剂量联合沙利度胺组比值下降最为显著。结论:茶多酚高剂量联合沙利度胺组对肺癌有明显抑制作用。其机制可能与下调MMP-2表达、上调TIMP-2表达、调整MMP-2/TIMP-2比值失衡状态,从而抗肺癌新生血管生成相关。     

67ku层黏连蛋白受体促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的 研究分析67ku层黏连蛋白受体（laminin receptor,67LR）与肝癌细胞基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）及其组织抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs）表达的关系,探讨67LR促进肝癌细胞体外侵袭能力的分子机制.方法 以67LR转染HepG2的稳定细胞株及其对照细胞为材料,采用半定量RT-PCR分析目前已知的23种MMPs和4种TIMPs的表达及变化情况,对表达有变化的基因采用荧光定量PCR进行验证,采用明胶酶谱分析MMP活性的变化。结果 半定量RT-PCR和荧光定量PCR发现,67LR高表达的LR4细胞,其MMP2,9的表达比67LR低表达的LR6及对照组pcDNA-1细胞明显升高,明胶酶谱分析也揭示,LR4细胞分泌的MMP-2和MMP-9的活性明显上升。结论 67LR可以促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达和分泌,从而促进肝癌细胞体外侵袭能力。     

TIMP-1和肝星状细胞对肝纤维化的影响

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的必经之路,是细胞外基(Extracellular matrix,ECM)在肝内过多沉积所致。ECM主要由激活的肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)合成,同时它的降解受到基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(Tissue inhibitor of metal protease-1,TIMP-1)的调控,因此HSC及TIMP-1对肝纤维化形成至关重要。近年来针对HSC及TIMP-1抗肝纤维化的研究已成为热点,就HSC及TIMP-1的生物学特性及其对肝纤维化的作用作一综述。     

三氧化二砷对胶质瘤U251细胞侵袭迁移和MMP2表达的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)在体外对胶质瘤U251细胞侵袭迁移及金属基质蛋白酶2(MMP2)表达的影响.方法:采用台盼兰法(MTT法)观察As2O3对U251细胞粘附能力的影响;Transwell侵袭小室测定法检测As2O3对U251细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱实验和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察As2O3对金属基质蛋白酶2(Matrix metalloproteinase2,MMP2)在U251细胞中表达的影响.结果:As2O3能够降低U251细胞粘附能力,Transwell实验中药物处理组穿膜细胞数明显低于对照组(P＜0.01),As2O3不但降低MMP2前体蛋白的表达,而且影响其mRNA的表达.结论:As2O3能够有效抑制胶质瘤U251细胞的侵袭迁移,其作用机制可能与As2O3下调胶质瘤U251细胞中MMP2的表达有关.     

葛根素对糖尿病大鼠肾组织MMP-2的表达及活性的影响

为探讨葛根素对糖尿病大鼠肾组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)及活性表达的影响,采用单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型的方法,每日ip葛根素注射液,共16周。采用原位杂交法检测肾小球MMP-2、TIMP-2mRNA表达,流式细胞术和免疫组织化学检测肾皮质MMP-2、TIMP-2及Ⅳ型胶原表达;酶谱分析检测肾皮质MMP-2活性变化。结果发现糖尿病组较对照组肾小球MMP-2mRNA及蛋白表达降低而TIMP-2mRNA及蛋白表达升高,Ⅳ型胶原表达亦增加,MMP-2活性降低,肾功能恶化;葛根素用药组较糖尿病组MMP-2mRNA及蛋白表达升高而TIMP-1、Ⅳ型胶原表达减少,MMP-2活性部分恢复,肾功能改善。表明葛根素可能部分是通过调节肾小球MMP-2蛋白表达及活性的改变从而减轻肾小球细胞外基质沉积,保护糖尿病大鼠的肾功能和形态。     

基质金属蛋白酶与脑血管急性损伤

基质金属蛋白酶是一组金属依赖性的蛋白内切酶家族,可对细胞外基质进行特异的降解,在生理和璃理过程中都发挥着重要作用。已有许多有关基质金属蛋白酶在中枢神经系统的作用的研究报道,本文对基质金属蛋白酶在脑缺血和脑出血等脑血管的急性损伤作用进行了综述,并对进一步研究方向作出展望。     

通心络胶囊对心肌梗死模型大鼠MMP-2和TIMP-1表达的影响

目的:探讨通心络胶囊对心肌梗死大鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)的表达、心脏结构和功能改变的影响.方法:取SD大鼠24只,随机分成假手术组(SH group,n=8),心肌梗死模型组(MI group,n=8),用药组(Treated group,n=8).术后4w,测量左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室上升最大速率(+dP/dtmax)、左室下降最大速率(-dP/dtmax);测定全心重(THW)及左心室称重(LVW),计算THW/体重(BW)、LVW/BW值和心肌梗死面积;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MMP-2及TIMP-1水平.结果:与SH组比较,MI组心室重量增加,心室功能显著降低,MMP-2升高,TIMP-1降低;与MI组比较,Treated组心室重量降低,心室功能显著增高,MMP-2减少,TIMP-1增加.结论:大鼠心肌梗死后,通心络胶囊能降低血清MMP-2水平,升高TIMP-1水平,抑制左室重构、改善心功能.     

Fra-1对大鼠C6胶质瘤细胞侵袭转移能力的影响

目的：观察Fra-1对C6胶质瘤侵袭转移能力的影响。方法：以大鼠C6胶质瘤细胞为研究对象,Fra-1siRNA通过脂质体转染C6,realtimeRT-PCR和westernblot法检测C6细胞中Fra-1的表达、Elisa法检测细胞培养上清中MMP一9的含量,Transwell小室观察C6细胞的转移侵袭能力。结果：干扰Fra-1后能降低C6细胞中Fra-1的表达,显著降低C6细胞中MMP-9的含量,降低C6细胞的转移侵袭能力。结论：干扰Fra-1能抑制C6细胞的转移侵袭。     

机械性去负荷后心室明胶酶及其组织型抑制剂与细胞外基质变化

目的：探讨左心室在去除压力和容量负荷下心室组织基质金属蛋白酶-2和-9及金属蛋白酶组织型抑制剂-1和-2表达水平与细胞外基质沉积量的关系。方法：12周龄雄性Lewis大鼠建立Lewis-to-Lewis腹腔异位心脏移植模型,形成左心室去负荷状态,并以同龄雄性Lewis大鼠胸腔原位心脏作为对照。移植后14d采用天狼猩红-偏振光法对移植和对照组心脏的ECM沉积量进行分析。心室组织MMP-2和MMP-9活性检测采用明胶酶谱法。MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的mRNA表达水平检测采用荧光定量PCR法;TIMP-1和TIMP-2蛋白含量采用Western blot测定。结果：手术后14d,与原位心脏比较,腹腔移植心脏心肌细胞横截面积减小,并伴有心肌ECM沉积量增多（胶原容积分数5．22％±1．6％VS2．21％±0．9％,P〈0．05）,并且MMP-2、MMP-9明胶酶活性明显增强,MMP-2、MMP-9及其组织型抑制剂T1MP-1、TIMP-2的mRNA表达均增加（P〈0．05）,但TIMP-1、TIMP-2增加幅度较MMP-2、MMP-9高,TIMP-1、TIMP-2的蛋白含量均增加（P〈0．05）,TIMP-1增加幅度更为明显。结论：左心室在去除压力和容量负荷状态下心脏心室组织胶原沉积量增加,伴有MMPs／TIMPs系统失衡,尤其是TIMPs系统的明显上调。     

Matrix Metalloproteinases of Normal Human Tissues

This review considers biochemical properties of the family of matrix metalloproteinases (MMPs) of normal human tissues and the involvement of these enzymes in morphogenesis. Four main MMP subfamilies are characterized, and a group of other MMPs is described. Data on mechanisms of activation and inhibition of MMPs in certain tissues during various physiological processes (embryogenesis, angiogenesis, tissue growth and involution) are considered. Information about tissue inhibitors of MMP is presented, and the ability of these inhibitors to regulate the activity of MMPs is analyzed.     

HepG2.2.15细胞中联合应用siRNA抑制HBV复制和表达的研究

观察联合应用siRNA对HepG2．2．15细胞中HBV抗原表达和复制的抑制作用。应用ELISA方法检测HBeAg和HBsAg;HBVDNA水平用实时定量PCR测定;用RT—PCR检测HBVmRNA水平。结果显示,实验中应用的HBV特异性siRNA均具有明显的抗HBV抗原表达和病毒复制作用;联合应用siRNA较单独应用具有更强的抗HBV作用。可见,HepG2．2．15细胞中联合应用siRNA对HBV复制的抑制作用比单独应用siRNA更有效。     

乙型肝炎病毒PreS2蛋白研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白包括S蛋白、PreS1蛋白和PreS2蛋白,它们是HBV包膜的主要成分,可诱导机体产生相应的抗体。PreS2蛋白在HBV侵入肝细胞的过程中起着非常重要的作用,对于防治HBV的感染有重要意义。我们简要综述了有关PreS2蛋白的研究,介绍了PreS2蛋白的各项功能。     

细胞外基质与基质金属蛋白酶

细胞外基质（ECM）是存在于细胞之间的动态网状结构,由胶原、蛋白聚糖及糖蛋白等大分子物质组成.这些大分子物质可与细胞表面上的特异性受体结合,通过受体与细胞骨架结构直接发生联系或触发细胞内的一系列信号传导而引起不同的基因表达,从而导致细胞的生长和分化.作为降解ECM成分最重要的酶-基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制因子(TIMPs)在这一过程中起着非常重要的作用.MMPs是一类依赖金属离子锌并以ECM成分为水解底物的蛋白水解酶.其在转录水平的表达受到生长因子、细胞因子及激素等因素的严格调控,在蛋白质水平其活性也受到其激活剂和抑制剂的调节. MMPs通过对ECM成分的水解来影响其降解与重组的动态平衡而参与多种细胞的生理和病理过程.     

Matrix metalloproteinases 2 and 9 as the factors of head and neck tumor metastases

The levels of metalloproteinases (MMP-2,-9), their tissue inhibitors (TIMP-1,-2) and extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) were studied in tumor tissue and blood serum from patients with head and neck squamous cell carcinoma. Immunohistochemical investigation showed much higher expression of MMP-9 and TIMP-1 in tumor tissue compared with MMP-2 and TIMP-2. There was different distribution of the investigated parameters (except TIMP-1) in cancer cells and stroma. Accumulation of MMP-2, MMP-9, and TIMP-2 was found mainly in cell elements (fibrocytes, leukocytes, etc.) and in stromal extracellular space. Expression of EMMPRIN was significantly higher in tumor cells than in stromal cells. It is possible that carcinoma cells express EMMPRIN, which may increase MMP production by surrounding cells. There was significant decrease of TIMP-1 expression in carcinoma cells with N1 grade of metastasis than in tumors without metastasis. The level of TIMP-1 in blood serum from patients with tumor metastases to regional lymph nodes was lower than in serum from patients without metastases. Thus, MMP-9 and TIMP-1 play an important role in the development of head and neck squamous cell carcinoma and the TIMP-1 level in blood serum and cancer tissues is linked to the first grade of regional lymph node metastasis.     

Role of matrix metalloproteinases and their inhibitors in tumor invasion and metastasis

The role of various matrix metalloproteinases (MMP)—such as gelatinases, stromelysins, matrilysin, collagenase-3, and membrane-bound MMP (MB-MMP)—in tumor invasion and metastasis is discussed. Data suggesting significance for malignant growth of the expression level of these enzymes and also of their activators and inhibitors are presented. It is concluded that at different stages of tumor progression the activity of different MMPs is displayed, which is regulated by various growth factors and oncogenes. Different malignancies are characterized by changes in activities of specific MMPs. Data are presented which show significance of the ratio between the MMP activity and that of tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP) in tumor invasion and metastasis, especially in connection with a dual role of TIMP as both MMP inhibitors and activators.     

治疗性乙型肝炎疫苗研究进展

乙肝疫苗多用于预防乙型肝炎病毒(HBV)。近年来,人们的研究重点转移到了针对慢性乙肝病毒携带和慢性乙肝患的治疗性疫苗的开发上。本就治疗性乙肝疫苗的分类、机制及临床疗效加以综述。     

HBV转基因小鼠--乙型肝炎研究的重要工具

HBV感染具有严格的种属特异性和组织亲嗜性,所以可用于研究的动物模型很少。随着转基因技术的出现和发展,人们通过研制转基因动物模型来研究病毒致病机理。把HBV的DNA或其片段转入小鼠受精卵建立起来的HBV转基因小鼠,已被广泛地应用于乙型肝炎的研究中,主要体现在以下3个方面：研究HBV的致病机制、与肝细胞癌的关系及寻找、评价治疗乙肝的方法。     

Effect of heparin on the production of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases by human dermal fibroblasts

The influence of heparin and a heparin fragment devoid of anticoagulant activity on the production of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases by human dermal fibroblasts was studied. Doses (0.1-400 microg/ml) responses were performed and data obtained were similar whatever heparin or fragment was used. The basal expression of collagenase by fibroblasts decreased quasi-linearly with increasing doses of heparins from 1 to 400 microg/ml. TIMP-1 levels were not affected by supplementing serum free culture medium with heparins. On the contrary, at low concentration, i.e. 1-10 microg/ml, heparins stimulated the secretion of both 72-kDa gelatinase (1.4-1.6-fold) and particularly TIMP-2 (>4-fold). At high doses, MMP-2 and TIMP-2 production by fibroblasts returned to basal levels. These results suggested that the local concentration of heparin released by mast cells could be instrumental in modulating fibroblast growth and proteolytic phenotype.     

乙型肝炎患者血清蛋白电泳谱变化规律的研究

研究乙型肝炎病毒患者血清蛋白的变化特点,探讨其与疾病进程的关系。从临床收集正常体检者血清和乙型肝炎病毒不同感染阶段的患者血清,按疾病类型进行分组。选用血清蛋白电泳技术检测白蛋白(ALB)、α1球蛋白、α2球蛋白,γ球蛋白百分含量及A/G。与正常对照组相比,重度慢性肝炎组、肝炎肝硬化组和原发性肝癌组中ALB、α1球蛋白、α2球蛋白明显降低,而γ球蛋白明显升高;重度慢性肝炎、肝炎肝硬化、原发性肝癌三组中A/G比值依次明显降低。急性乙型肝炎组和轻度慢性肝炎组的蛋白电泳各项指标均无明显变化。前白蛋白含量在急性乙型肝炎、轻度慢性肝炎、重度慢性肝炎、肝炎肝硬化和原发性肝癌组均明显降低。结果提示,蛋白电泳图谱随着乙型肝炎病毒感染的不同阶段会发生相应变化。A/G能够反应乙型肝炎病毒感染的中晚期进展,对乙型肝炎的诊断,治疗以及病情转归具有重要意义。