牛生长激素结构不均一性的研究

本文报导用常规方法分离纯化的牛生长激素,在还原性SDS-11％聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈分子量很接近的两条主带(22KD,21.5KD)。用单克隆抗体和多克隆抗体亲和层析技术分析了不同分子量形式的牛生长激素的转化,结果表明:牛生长激素可能在pH5.5条件下转化为21.5KD分子,在pH8.3条件下则转化18KD分子。这几种形式的牛生长激素均保留与抗体的结合力,但亲和力不尽相同,如在亲和层析的洗脱性质上存在差异。已检验分离并部分纯化了18KD分子以备作进一步的研究。     

牛生长激素cDNA的分子克隆

我们克隆了与牛生长激素Poly(A)⁺RNA互补的DNA(cDNA)。首先从小牛垂体中提纯总的Pply(A)⁺RNA,用AMV逆转录酶合成单链cDNA,以单链cDNA为模板合成双链cDNA,用多聚G及多聚c谱尾法将双链cDNA克隆到pBR322质粒的Pst I位点上,构建成牛垂体PoIy(A)⁺RNA的cDNA文库。以牛生长激素基因为探针,筛选出7个阳性菌落,经电泳鉴定有两个菌落(1号和2号)含有大于500bp的插入片段。1号克隆经酶切图谱、southeTn blot 杂交及序列分析证实含有牛生长激素的编码序列。     

牛生长激素基因克隆和核苷酸序列

我们从牛基因文库小分离出编码牛生长激素基因。发现该基因编码区的核苷酸序列和近乎全长的牛生长激素CDNA克隆的核苷酸序列是一致的。该基因序列长约1800碱基对,含有四个插入顺序。具有227核苷酸的第二个插入顺序不含有象在大鼠生长激素基因中发现的那个重复因子。通过比较牛、人和大鼠生长激素基因的5’和3’侧翼区与非转译区发现许多具有高度保守顺序的区域。值得注意的是在所有这三种动物的生长激素基因中都具有一个38核苷酸的同源顺序,其位于离它们的转录起始座位上方大约100碱基对的5’侧翼区中。     

Rifkin掀起了有关牛生长激素的激烈争论

经过几年的销声匿迹和制止生物技术商品化的失败,美国的Jeremy Rifkin和他的经济趋势基金会今天重新掀起了一场争论。这次他企图阻碍牛生长激素(bGH)的商品化。他极力煽动消费者抵制经bGH处理过的牛所产的奶。八月初,该基金会援引伊利诺伊大学医学中心Samuel Epstein的一篇文章,写信给美国12个最大的超级市场链锁店。文章声称,有些研究者发现bGH可从牛奶中被吸入血液,并引起激素效应和过敏反应,在婴孩中尤其如此。文章还声称,经bGH处理的奶牛     

牛生长激素基因在马铃薯中的表达

将牛生长激素基因ｃＤＮＡ 与Ｐａｔａｔｉｎ ＣｌａｓｓＩ启动子及ＮＯＳ３终止子连接,构建了表达载体ｐＰＢＧＴ． 用直接法将表达载体转入农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ） ＬＢＡ４４０４（ｐＲＡＬ４４０４）菌株, 用此菌株转化马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ）得到再生植株． 经ＮＰＴⅡ活性检测,总ＤＮＡ ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证明目的基因已整合到马铃薯基因组中．ＲＮＡ 点杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达     

消费者组织撤离重组牛生长激素争端

在Monsanto Co.公司(St.Louis,MO)的重组牛生长激素(rBST)Posilae(用于增加奶牛产乳量)上市一年后的今天,消费者联盟(CU)取消了rBST牛奶会威胁人类健康的主张。 CU在致Time杂志编辑的信中写道,“我们并不认为rBST会立即危害健康,也不愿意让用于牛的rBST使消费者害怕饮用牛奶。”但是,CU仍提倡强制性标记用BST生产的牛奶。 CU的让步对那些着眼于谴责rBST的活动家们是一个重大打击。CU作为Consumer Reports(消     

牛生长激素抗体的制备及其纯化

 <正> 生长激素是垂体前叶分泌的蛋白质类激素,它在体内有多种生物学效应。近年来,对生长激素的作用机理及生长激素基因工程的研究报道很多,国内也开始了这方面的工作。我们实验室从1984年开始进行牛生长激素基因工程的研究。在这项研究中,为获得牛生长激素基因的探针,首先需要有高纯度牛生长激素mRNA。双抗体免疫沉淀法是分离、纯化特异mRNA的有效方法,采用这种方法分离牛生长激素(bGH)mRNA,需要有高纯度bGH抗体。此外,高纯度牛生长激素抗体对于检测生长激素cDNA在细菌中的表达,对于制备亲和层析     

FDA批准使用牛生长激素增加牛奶产量

在长达10年的争论和大量的科学研究之后,美国食品与药物管理局终于批准了用牛生长激素(BST)提高奶牛的产奶量。M0nsanto(St.Louis,MO)公司的这一产品取商品名为Posilac,将于明年二月即90天的联邦暂禁期结束后开始出售。     

抗牛生长激素单克隆抗体及其免疫亲和吸附柱的制备

我们用杂交瘤技术获得了分秘抗牛生长激素单克隆抗体的细胞系(4B-2)。接种此细胞于小鼠所产生腹水的抗体含量达10mg／ml。经免疫亲和层析方法纯化的单克隆抗体,属1BG1型。将单克隆抗体偶联到Sepharose 4B上,创成了免疫亲和吸附柱,可以从牛垂体匀浆中一步纯化牛生长激素。偶联有50mg单克隆抗体的亲和柱一次可结合3mg牛生长激素。经单克隆抗体亲和层析纯化的牛生长激豢,保持了与兔肝细胞膜受体结合的能力,及在去垂体大白鼠中促进胫骨生长板生长的功能。     

牛生长激素基因的人工合成,重组克隆及高效表达

本文通过设计选择大肠杆菌高频利用密码子代替天然密码子,人工全合成３２个寡聚核苷酸片段;连接并克隆获得Ａ（２７８ｂｐ）、Ｂ（８８ｂｐ）、Ｃ（２２４ｂｐ）３个较大ＤＮＡ片段;经重组克隆、定位突变等获得阳性克隆;双向ＤＮＡ序列测定分析表明获得了两种人工全合成牛生长激素（ｂＧＨ）编码基因,即编码Ｎ－Ｍｅｔ－Ａｌａ－ｂＧＨ和Ｎ－Ｍｅｔ－Ｐｈｅ－ｂＧＨ的两个基因,而至今尚未见有人工全合成ｂＧＨ基因的报道。构建了在ＰＬｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下含上述合成基因的表达质位ｐＢＬｂＧＨＥ７Ａ１和ｐＢＬｂＧＨＥ８,并在大肠杆菌中进行了温敏诱导表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达产物占全菌蛋白的３７％以上。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析和纯化产物的Ｎ端氨基酸序列测定结果都表明上述两种人工全合成ｂＧＨ基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达量为现今国际文献报道的高限水平。     

牛生长激素释放因子的融合表达及其产物的化学加工

通过寡核苷酸引导的定位突变,在人工全合成的第２７位为Ｉｌｅ的牛生长激素释放因子［Ｉｌｅ２７］ｂＧＲＦ（１－４４）ＯＨ基因的５＇端ＡＴＧ后插入Ｔｒｐ密码子序列,并分别了构建了Ｐｌ ｐｒｏｍｏｔｅｒ控制下、以β－半乳糖苷酶和ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ结合ＩｇＧ ｄｏｍａｉｎＢ、Ｃ为载体蛋白的融合型基因表达质粒ｐＢＬＥ３１０和ｐＢＬＰＡＥ２Ｄ,在大肠杆菌中得到高效表达。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达产物β－Ｇａｌ     

Upjohn公司将建立年产2110万美元的牛生长激素工厂

重组牛生长激素(rBST)有把握马上由美国食品和药物箭理局(FDA)许可,Upjohn公司(密执安州卡拉马祖)计划在卡拉马祖建立年产2110万美元的 rBST工厂。该工厂希望在1990年10月开始运转,与该产品的预期推广日期柏吻合。Upjohn 公司估计该产品将有5～6亿美元的广阔市场。根据公司副经理兼农业部经理 G.Welch 估计,前五年工厂生产 rBST 的任务是充足的,当需要时公司可以有临时性的增产计划。Upjohn 公司希望建造的31000平方英尺的建筑费用为443万美元。新设备将花费约1478万美元,公共设施     

美国红鱼生长激素基因的克隆及其遗传进化分析

采用PCR方法从美国红鱼肝脏中扩增出美国红鱼生长激素基因。该基因序列长为1 497 bp,与5个已报道的鲈亚目鱼类生长激素基因结构比较发现,他们的外显子和内含子之比均为6∶5,而且相对应的6个外显子大小一致。用Clustal X软件对美国红鱼和其他13种鲈形目鱼类生长激素基因序列进行比对,选取同源性较高的551 bp的编码区序列构建NJ和MP系统进化树,结果发现由其构建的MP和NJ树与根据形态特征构建的系统发育树基本一致,特别是在鲈形目鱼类科间及科以上分类阶元的系统发育研究方面比较一致。研究结果表明鱼类生长激素基因序列能够较真实反映近缘鱼类之间的关系,是进行鲈形目鱼类系统进化分析的较好遗传标志。     

细菌制造牛生长激素为提高牛肉、牛乳产量开新途径辟

美国Genentech公司和Mosanto公司于三月十三日宣称:利用重组DNA技术成功地制造出促进牛生长的激素。利用重组DNA技术转向农业产品的制造是由Genentech发起的。这两个公司今后还要共同研究各种动物激素,可望利用遗传工程提高农业生产做出贡献。     

用原位分子杂交技术定位牛生长激素基因于5号染色体

本工作利用放射性标记的ｂＧＨ基因（３．０ｋｂ）为探针,通过原位杂交定位牛生长激素基因于染色体５ｑ２２－２６内。该结果与以前的ｂＧＨ基因定位的结果不同,讨论了基因探针、基因定位方法等方面与定位准确性的关系。