膜去极化和cAMP在胰岛细胞株HIT中活化CBPC端片段

在胰岛细胞株 Ｈ Ｉ Ｔ 细胞中,用瞬时转染法观察高 Ｋ＋ 导致的膜去极化与ｃ Ａ Ｍ Ｐ对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段转录活性的影响．发现二者均可诱导 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段的转录活性增强,并有协同效应; Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ端片段的突变体（ Ｓｅｒ １ ７７２ 突变为 Ａｌａ）表现相同的诱导特性,但其基本转录活性降低．说明膜去极化和 ｃ Ａ Ｍ Ｐ对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ 端片段转录活性的诱导作用与 Ｐ Ｋ Ａ 磷酸化位点 Ｓｅｒ １ ７７２ 无关,而该位点的磷酸化对调节 Ｃ Ｂ Ｐ Ｃ 端片段的基本转录活性起重要作用．蛋白激酶 Ｃ 通路对 Ｃ Ｂ Ｐ Ｔｉ的转录活性无影响．     

低聚磷酸盐促进cAMP发酵合成的全局转录组分析

目的：以节杆菌Arthrobacter sp. CCTCC 2013431为研究对象,探究低聚磷酸盐作为能量供体促进环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)发酵合成的作用机理。方法：在7 L发酵罐中添加低聚磷酸盐,对发酵性能、转录组学、关键酶活性以及重要代谢物水平进行分析,揭示低聚磷酸盐促进cAMP发酵合成的机理。结果：发酵24 h添加2 g/L六偏磷酸钠,cAMP产量显著提高,达到3.64 g/L,与对照组相比提高了33.82%。转录组数据分析表明,由于六偏磷酸钠的添加,227个基因表达量显著上调,265个基因表达量显著下调;磷酸戊糖途径和cAMP合成途径中多数酶编码基因的转录水平,电子传递链中复合体Ⅲ、复合体IV和F₀F₁-ATP酶以及聚磷酸盐激酶编码基因的转录水平,硫氧还蛋白、过氧化氢酶及CLP蛋白酶等编码基因的转录水平均显著提高。此外,对丙酮酸激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、腺苷琥珀酸合成酶、腺苷酸环化酶、过氧化氢酶、聚磷酸盐激酶活性以及胞内活性氧、ATP和NADPH等进行测定,进一步证明了转...     

cAMP参与烟草悬浮细胞的ABA信号转导

ABA诱导型启动子 (rd2 9A)重组到报告基因 (GUS)的上游构建表达载体。通过农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因植株。将转基因植株诱导愈伤组织 ,建立稳定、均一的转rd2 9A_GUS融合基因的悬浮培养细胞系。用ABA处理悬浮细胞 2 4h后GUS活性显著升高 ,说明外源ABA能够诱导rd2 9A启动子的表达 ,获得了用于ABA信号转导研究的实用细胞系。在ABA激活表达的细胞介质中加入尼克酰胺 (cADPR合成酶的抑制剂 )或U73 12 2 (PLC抑制剂 )只能部分抑制ABA的效应 ,但如果加入蛋白激酶抑制剂K2 5 2a ,抑制效果达 95 %以上。用可跨膜的cAMP的类似物8_Br_cAMP处理细胞发现 ,它能代替ABA的作用 ;当介质中加入 1mmol/LIBMX(磷酸二酯酶的抑制剂 )增加cAMP的稳定性 ,发现低浓度的 8_Br_cAMP与ABA相同的效应。以上结果表明cAMP参与了烟草悬浮细胞中ABA信号的传递。     

环腺苷一磷酸对人Ⅰ型17β羟类固醇脱氢酶在绒癌细胞系中表达的调节作用

由Ｈ ＳＤ１７Ｂ１基因编码的人Ⅰ型１７β－羟类固醇脱氢酶（１７β－ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｔｙｐｅ１简称Ⅰ型１７ＨＳＤ）催化雌酮与雌二醇之间的转化。本文研究环腺苷一磷酸简化（ｃＡＭＰ）对该酶在培养的绒癌胞系（ＪＡＲ和ＪＥＧ－３）中表达的调节作用。用８－ｂｒｏｍｏ－ｃＡＭＰ处理两种绒癌细胞后,观察到在伴随１．３ｋｂⅠ型１７ＨＳＤｍＲＮＡ表达的同时,Ｉ型１７ＨＳＤ蛋白浓度     

利用转录调控因子Bas1p和Bas2p协同作用提高酿酒酵母cAMP产量的研究

【目的】研究转录调控因子Bas1p和Bas2p协同作用对重组酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)胞外c AMP产生的影响,初步优化发酵培养基。【方法】通过共整合表达策略,在c AMP产生菌酿酒酵母G5中超表达Bas1p和Bas2p,摇瓶发酵实验考察了Bas1p和Bas2p协同作用对菌株生长及胞外c AMP产生的影响,进一步考察了酵母粉和蛋白胨含量及前体物腺嘌呤对菌株生长和c AMP产生的影响。【结果】超表达Bas1p和Bas2p使菌株在1×YP培养基中发酵120 h时的c AMP产量较出发菌株提高51.4%,达到2 253.8μmol/L;将1×YP中的酵母粉和蛋白胨含量翻倍(即2×YP培养基)发酵120 h时的c AMP产量提高至4 450.4μmol/L;在2×YP培养基中添加0.5 g/L浓度的腺嘌呤时,c AMP产量进一步提高至5 314.3μmol/L。【结论】强化Bas1p和Bas2p的协同作用及相应地优化培养基组分有助于酿酒酵母胞外c AMP生产。     

氨甲酰胆碱(Carbamylcholine)对大鼠缺血心室致颤阈值的影响及其与cAMP、cGMP的关系

本实验以心室颤动阈(VFT)作为心室易颤性的指标,观察胆碱类物质氨甲酰胆碱对大鼠缺血心室 VFT 的影响及其与心肌 cAMP 和 cGMP 水平的关系。实验结果表明,氨甲酰胆碱可提高正常心脏和急性局部缺血心脏的 VFT,提高缺血和未缺血心肌的 cGMP 水平,但明显降低缺血心肌 cAMP 水平,使缺血和未缺血心肌的 cAMP/cGMP 比值显著降低,其作用与肾上腺素正好相反。实验结果还表明,急性局部缺血心脏的 VFT 与缺血心肌 cAMP/cGMP 比值之间有密切的负相关关系,相关系数 r=-0.905(n=22,P<0.001)。上述结果提示缺血心肌 cAMP/cGMP 比值的提高可能是急性心肌梗塞早期发生心室纤维性颤动的重要因素。     

不同缺氧时间大鼠脑组织中腺苷和血管活性肠肽含量的变化

本实验采用大鼠40只,雌雄各半,随机分为海平对照、缺氧即刻、缺氧20min和缺氧60min 4组。缺氧在低压舱中进行,模拟海拔高度为8000m。用放免和HPLC法分别测定了4组动物脑组织中腺苷、AMP和血管活性肠肽(VIP)含量的变化。结果表明,3个缺氧组腺苷水平明显高于海平对照组(66.98±4.52μg/g),以缺氧即刻组为最高(108.15±10.59μg/g,P<0.01)。脑组织中VIP含量,海平对照组为46.15±3.83pmol/g,缺氧即刻略有下降,以后逐渐上升,至缺氧60min时达67.75±3.11pmol/g,明显高于对照组(P<0.05)。推测二者与缺氧时脑血流增加有关。     

离子交换法提取大枣中环磷酸腺苷(cAMP)的工艺研究

环磷酸腺苷(cAMP)作为第二信使参与多种生理生化过程的调节,是人体内重要的生理活性物质。本文采用水浸提和6 000 Da超滤膜过滤方法对大枣进行预处理,从5种树脂中选型最合适的树脂,并对提取工艺进行确定。结果表明,大枣在小颗粒状(0.3 cm)捣碎状态下,60℃水浸提12 h,cAMP提取效果最好。通过考察SD5、SD8、D01、D05和D13五种型号离子交换树脂,发现D13型树脂提取大枣中cAMP效果最佳。选用的洗脱剂为0.05 mol/L HCl,流速为1.5 mL/min。得到产品产率为65.0%,其中cAMP含量37.5%。     

CREB信号通路在神经系统中的调控及功能

cAMP应答元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB)在神经元生成、突触可塑性及学习记忆等方面都具有重要的调节作用,这使得与CREB信号通路相关的分子成为较受关注的神经系统疾病干预的药物靶点.本文概述了CREB的基本构成、相关信号通路、其目的基因表达调控及其在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）中的作用.     

Functional analysis of guinea pig β1-adrenoceptor

Although similarity of pharmacological responses to certain stimuli between guinea pigs and humans has been reported, this has been poorly defined by a molecular biological approach. In this study, we cloned the gene of guinea pig β1-adrenoceptor (ADRB1). The deduced amino acid sequence of guinea pig ADRB1 (467-aa) showed 91% and 92% identity with the human and rat ADRB1 sequences, respectively. Using HEK293T cells expressing guinea pig, human and rat ADRB1s independently, we elucidated the functional characteristics of each ADRB1. The ligand-binding profiles and the concentration-response relationships for isoprenaline-induced cyclic adenosine monophosphate (cAMP) production were similar among the three ADRB1s. Isoprenaline also induced phosphorylation of extracellular-signal related kinases (ERK) through ADRB1s in a concentration-dependent manner. The minimum effective concentration of isoprenaline for phosphorylation of ERK, through guinea pig ADRB1 was the same as through human ADRB1, but markedly lower than that of through rat ADRB1. ERK phosphorylation through guinea pig ADRB1 was sensitive to pertussis toxin, a dominant-negative ras and PD98059, indicating that a G_i-mediated pathway is involved in the ADRB1/ERK signaling loop. These results suggest that the G_i-coupling efficacy of guinea pig and human ADRB1s may be higher than that of rat ADRB1.     

A method for studying synaptosomal release of neurotransmitter candidates, as evaluated by studies on cortical cholecystokinin octapeptide release

A method for perfusing rat cortical synaptosomes for studying the regulation of cholecystokinin octapeptide (CCK-8) release has been developed and was found to have advantages over the static incubation system. Synaptosomes isolated from rat cortex were suspended in Biogel P2 columns and perfused with Krebs Ringer Bicarbonate buffer. One hundred mM KCl and 75 microM veratine stimulated CCK-8 release, which was Ca++-dependent. The synaptosomes were functionally viable for at least 135 min of incubation as indicated by multiple 100 mM KCl depolarizations and uptake of (3H)-norepinephrine and (14C)-choline. Dopamine and acetylcholine (10(-6)M) stimulated CCK-8 release while serotonin and norepinephrine were without effect. Approximately 20% of total occluded CCK-8 was released from synaptosomes by 100 mM KCl and degradation of CCK-8 was less than 10%. Perfusion of synaptosomes has several advantages over static incubation systems and allows systematic studies on the role of neurotransmitter in the regulation of neuropeptide secretion.