重组人心房利钠肽 (ANP) 的原核表达、纯化及鉴定

为提高重组人心房利钠肽(Atrial natriuretic peptide,ANP)的表达量,将3个ANP通过赖氨酸(Lysine,K)串联,并构建相对应的重组表达载体p ET28a(+)/ANP3。转染大肠杆菌进行诱导表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的60%。经过包涵体变复性,赖氨酸酶(Lys-C)和羧肽酶(CPB)水解,以及一系列层析纯化,每升培养液可获得约16 mg的ANP蛋白。最终,纯化后的ANP经UPLC及Tricine SDS-PAGE鉴定,纯度大于90%,LC-MS鉴定显示其分子量为3 080 Da,且为二硫键正确形成的ANP单体,通过ELISA试剂盒检测,其具有和参比品一致活性。本研究为ANP的大规模制备打下了基础。同时,所采用的串联表达技术也为其他多肽类药物的重组表达提供了新的思路。     

大鼠脊髓心房利钠肽的基因表达

用地高辛配基标记的ＡＮＰｃＤＮＡ作为探针,与大鼠脊髓腰段切片原位杂交,观察到杂交反应阳性神经元主要分布于前角（ⅨⅧ层）,少数中间带（Ⅶ层）和后角基部（Ⅶ层）。脊髓中央管室管膜上皮呈弱阳性反应。结果提示脊髓前角神经元和中央管室管膜上皮存在着ＡＮＰｍＲＮＡ,能内源性合成ＡＮＰ。     

胰岛素诱导低血糖大鼠心房肌细胞特殊颗粒的形态计量和心房利钠肽免疫组织化学研究

通过形态计量学和免疫组织化学方法发现胰岛素诱导低血糖大鼠心房肌细胞核周区特殊颗粒（ＡＳＧ）的体密度、面数密度和数密度及平均直径均高于对照组（Ｐ＜０．０５）,但高尔基复合体各参数与对照组比较没有差别（Ｐ＞０．０５）。实验组的心房利钠肽（ＡＮＰ）的免疫反应强度比对照组强（Ｐ＜０．００１）。提示胰岛素诱导低血糖对心房利钠肽的释放具有抑制作用,表明ＡＮＰ作为生理和病理调节递质与代谢刺激相拮抗。     

心房钠尿多肽对麻醉大鼠血压和肾神经传出放电的影响

本实验观察了心房肽Ⅱ(Atriopeptin Ⅱ,APⅡ)对麻醉大鼠血压(AP)、心率(HR)和肾交感神经传出放电(RSNA)的影响,并与硝普钠对 AP 和 RSNA 的影响作比较。结果如下:(1)缓冲神经完整和迷走神经完整条件下(n=12)静脉注射 APⅡ(50μg/kg)后,动脉收缩压(SAP)降低23.0±1.66 mmHg(Μ±SE,p<0.001),HR 减慢9±3.5b/min(p<0.05),RSNA 降低4.89±2.95%(P>0.05)。迷走神经切断后,静脉注射 APⅡ引起的~⊿SAP 虽有所减小,但与切断迷走神经前的反应比较,无统计学意义,HR 减慢不再出现,而 RSNA 则有所增加;(2)缓冲神经切断和迷走神经完整条件下(n=7),静脉注射 APⅡ时 SAP 降低27.4±3.25mmHg(P<0.001),HR 减慢13±3.1b/min(P<0.01),RSNA 降低11.67±1.95%(P<0.001)。切断迷走神经后,静脉注射 APⅡ引起的 SAP 降低程度有明显減小(P<0.01),HR减慢不再出现,RSNA 则反而增加(3)无论在迷走神经完整还是切断条件下,静脉注射硝普钠(n=6) SAP 均明显降低,同时伴有 RSNA 的反射性增加。以上结果表明:APⅡ的降压效应,部分是通过迷走神经传入纤维;在切断缓冲神经条件下,APⅡ可经由迷走神经传入纤维的激活而反射地抑制 RSNA。     

α-人心房钠尿多肽对大鼠血流动力学的作用

本工作观察了α-人心房钠尿多肽(α-Human atrial natriuretic polypeptide,α-hANP)对麻醉大鼠的血流动力学作用。静脉注射α-hANP(3μg/100g)后,动脉血压(ABP)、左室内压(LVP)、左室 dp/dt(LV dp/dt)、心指数(CI)和总外周阻力指数(TPRI)均明显下降,而心率(HR)无明显变化。切断迷走神经后,α-hANP 降压和 LV dp/dt 下降的程度虽有所减小,但与切断前相比无统计学意义。我们的结果表明,α-hANP 对麻醉大鼠的降压机制,在于外周血管舒张所致的总外周阻力减小,以及心肌收缩性能抑制而引起的心输出量降低。     

心房利钠肽样免疫反应神经元在大鼠中脑和脑桥中某些锥体外系神经核内的分布

采用PAP免疫组织化学方法对大鼠中脑和脑桥内心房利钠肽(ANP)样免疫反应神经元的分布进行了研究,结果显示阳性神经元除存在于其他作者报导过的导水管周围灰质、Edinger-Westphal核、中缝核、脚间核和蓝斑核外,还存在于属于锥体外系的红核、黑质和脑桥核内,因此,推测脑内的ANP可能在锥外系对躯体运动的调节中起着一种神经递质或神经调质的作用。这为脑内ANP可能具有与液体和电解质平衡以及心血管功能的调节无关的其它作用提供了部分形态学证据。     

心房感受器,心房肽和肾脏的钠尿反应

早在1956年,Henry等就提出:心房参与肾功能调节,如扩张麻醉狗的左心房,可引起尿量增加。这种利尿反应在颈部迷走神经冷阻断后就不出现,因而证明这种利尿的反射性质。他们又进一步提出,当体内血容量增加时,心房压升高,使心房容量感受器兴奋,传入冲动经迷走神经传入到下丘脑,抑制抗利尿激素分泌,引起肾脏的利尿反应而使血容量减少。这就是所谓容量感受器假说。他们认为,左心房牵张感受器是这种心—肾之间反射性控制机制的重要部分。抗利尿激素的直接测定(最初是生物测定,后来是放射免疫测定)证实,在左心房压升高时,血浆中抗利尿激素的浓度确实降低。另外,Lydtin等报道,在清醒和麻醉的狗,左心房牵张除了引起利尿反应外,还引起尿钠排出增加。1975年Goetz等系统地总结了关于心房感受器和肾功能方面的文献,详细分析了支持左心房容量感受器     

难辨梭菌毒素的免疫电镜观察

本文用兔抗难辨梭菌毒素A标记在难辨梭菌48小时培养物中产生的毒素上,再用葡萄球菌A蛋白(Staphylococcus protein A,SPA)胶体金(PAG)标记,即可在电镜下观察到清晰可见的毒素颗粒。     

烟草原胚中赤霉素GA7与GA4分布的免疫电镜观察

烟草原胚中赤霉素ＧＡ７与ＧＡ４分布的免疫电镜观察陈以峰１梁世平１杨弘远２郑志富２周燮１（武汉大学生命科学学院植物生殖生物学研究室武汉４３００７２）２（南京农业大学农学系南京２１００９５）关键词原胚,赤霉素,免疫电镜定位,烟草ＤＩＳＴＲＩＢＵＴＩＯＮＯ...     

水稻受精前后胚囊内钙调素分布的变化:免疫金电镜观察

用胶体金免疫电镜技术观察了水稻(Oryza sativa subsp. japonica)受精前后胚囊内钙调素的分布变化.授粉后,卵细胞、助细胞和中央细胞内的钙调素较授粉前均有所增加.中央细胞内钙调素的增加要比卵细胞中约早2 h,退化助细胞与宿存助细胞之间的钙调素含量无明显差异.授粉到受精期间,钙调素的主要分布形式由分散的单颗粒转变为聚集颗粒,受精完成后再变为分散的单颗粒形式.胚囊壁及珠心细胞的细胞壁和胞间隙中也观察到钙调素的分布和数量变化.初步讨论了胞内和胞外钙调素在水稻受精与合子形成中的作用.     

水稻受精前后胚囊内钙调素分布的变化：免疫金电镜观察

用胶体金免疫电镜技术观察了水稻 (Oryzasativasubsp .japonica)受精前后胚囊内钙调素的分布变化。授粉后 ,卵细胞、助细胞和中央细胞内的钙调素较授粉前均有所增加。中央细胞内钙调素的增加要比卵细胞中约早 2h ,退化助细胞与宿存助细胞之间的钙调素含量无明显差异。授粉到受精期间 ,钙调素的主要分布形式由分散的单颗粒转变为聚集颗粒 ,受精完成后再变为分散的单颗粒形式。胚囊壁及珠心细胞的细胞壁和胞间隙中也观察到钙调素的分布和数量变化。初步讨论了胞内和胞外钙调素在水稻受精与合子形成中的作用。     

心房钠尿因子对豚鼠窦房结自律性的影响

用微电极技术研究表明,分别灌流心房钠尿因子(ANF)0.025和0.05μmol/L 7min 后,豚鼠窦房结细胞的自发节律无明显变化,而用0.1μmol/L 灌流时,其自发节律明显降低7%(P<0.01)。但当上述三种浓度 ANF 和异丙肾上腺素混合液灌流时,自发节律分别降低4,12和22%。这些结果表明,ANF 能抑制异丙肾上腺素的阳性变时效应。其机理可能与 ANF 阻滞窦房结细胞的 T 型钙通道电流有关。     

抗体形成细胞发育的免疫电镜研究

The pre-embedding immunoelectron microscopic method was used to study the development of antibody-producing cells in the guinea pig popliteal lymph nodes of 2, 3, 5, 8 and 10 days after a second challenge with horseradish peroxidase. The results indicated that the antibody activity was located in the perinuclear space, the endoplasmic reticulum and Golgi complex. According to the cellular developmental stages and the characteristics of distribution of the antibody activity, the antibody-producing cells (APC) were divided into four types: (1) Type I cells (lymphocytes) exhibited many positive granules throughout the cytoplasm; (2) Type II cells (proplasmacytes) contained many positive granules and positive short bars, some of them were parallel; (3) Type III cells (proplasmacytes) contained numerous parallel positive lamellae in cytoplasm; (4) the parallel lamellae in cytoplasm of type IV cells (plasmacytes) were arranged into a network-endoplasmic reticulum. According to the kinetic change from granules, short bars to parallel lamellae and the network, the results indicated the developmental course of AFC from lymphocytes, proplasmacytes to plasmacytes.     

循环血容量对人血浆心房利钠多肽有影响

心房利钠多肽(ANP),有强大的利钠和利尿作用,对调节体液平衡有重要作用。1984年由Kangawa等确定其结构,并开始用RIA 法测定其浓度。作者用生理盐水持续静脉滴注或注射速尿后步行试验,使循环血容量增加或减少,以观察血浆ANP 的浓度。试验以8例19～20岁的健康男性为观察对象。盐水负荷试验为晨起空腹,2小时内静滴生理盐水1000 ml,静滴前及静滴后30、60及120分钟分别测定血浆ANP     

豚鼠胆囊SP免疫组织化学反应特点及电镜观察

研究采用ABC免疫组化方法及电镜观察发现;豚鼠胆囊含有SP免疫反应的神经元,神经纤维及肥大细胞,这些神经纤维束是被神经膜细胞完全或不完全包裹的无髓神经纤维。其神经纤维内含有的突触小泡形态大小不一。电镜下分可为3种类型;（1）以小型无芯小泡为主以及少量大型有芯小泡。（2）以小型有芯小泡为主以及少量无芯小泡和大型有芯小泡。（3）以大型有芯小泡为主以及少量小型无芯小泡。用SP免疫电镜组化方法观察。豚鼠胆囊的SP免疫反应阳性神经纤维内散在分布的突触小泡多为第3种。但在血管,淋巴管周围SP免疫反应阳性神经纤维内的突触小泡多为小型有芯小泡,胆囊除了受肾上腺素能神经支配外,尚受SP等肽能神经的支配。本研究对豚鼠胆囊SP免疫组织化学反应阳性神经纤维分布特点及神经纤维内突触小泡的超微结构特点进行了研究。