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水母雪莲愈伤组织cDNA文库的构建 总被引:8,自引:0,他引:8
用TRIZOL Reagent提取水母雪莲红色系1~15d愈伤组织总RNA,用SMART cDNA Library Construction Kit构建cDNA文库.经测定原始文库滴度达到1.5~4×106,扩增总文库滴度达到1011,重组率达到98%,插入片段在0.5kb到3kb之间,多在1kb左右.通过PCR检测,从总文库中检测到了雪莲CHS、DFR及SmP基因的特异片段.SmP基因是转录调控因子,其表达丰度很低.各项指标都表明,已获得高质量的cDNA文库,为雪莲基因资源保存,雪莲类黄酮次生代谢分子调控奠定了坚实的基础. 相似文献
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光照对水母雪莲愈伤组织合成生物碱的影响 总被引:6,自引:0,他引:6
以水母雪莲(Saussurea medusa Maxin.)无菌幼苗的根作外植体,诱导获得的愈伤组织为材料,研究光照对生物碱合成的影响。结果表明:尽管在水母雪莲的愈伤组织培养物中,总生物碱的含量比原植株中的含量低,但其组成成分比原植物丰富。并且秋水仙碱的含量也比原植物高,尤其是在光照培养的愈伤组织中秋水仙碱大大增加。 相似文献
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水母雪莲愈伤组织和悬浮培养细胞的抗冻性研究 总被引:12,自引:0,他引:12
水母雪莲(Saussurea meduasa Maxim)是典型的高山雪线植物。本文研究了其愈伤组织及悬浮细胞的培养过程,并对其抗寒性做了初步研究,研究结果表明,水母雪莲愈伤组织和悬浮培养细胞分别可抵抗-6.5℃、-7.5℃的冰冻低温胁迫,水母雪莲愈伤组织细胞内丰富的蛋白质和淀粉粒多糖构成其较强抗冻能力的物质基础,低温锻炼后,悬浮细胞分泌蛋白中有新的多肽(76,48,27.5,19.5kD)合成,而33,51kD两条多肽合成增强,悬浮细胞抗冻能力的提高同蛋白质合成的增强是一致的。 相似文献
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光质,光强和光期对水母雪莲愈伤组织生长和黄酮生物合成的影响 总被引:35,自引:0,他引:35
白光、蓝光、红光和远红光等不同光质照射及不同的白光强度对水母雪莲愈伤组织生长,苯丙氨酸氨基裂解酶(PAL)活性及黄酮合成有不同的影响。红光明显促进愈伤组织的生长,但强烈抑制PAL活性和黄酮的合成。蓝光对愈伤组织生长无明显影响,但显著提高PAL活性和黄酮的合成。白光的作用介于红光和蓝光之间。远红光的作用与蓝光相似,但作用比较弱。每天16h蓝光加8h白光和8h蓝光加16h白光的组合产生最高的黄酮含量和 相似文献
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新疆雪莲愈伤组织诱导及总黄酮的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
以新疆雪莲植株叶片为外植体,研究了不同植物激素和培养时间对新疆雪莲愈伤组织生长、总黄酮含量和产量的影响.结果表明:新疆雪莲愈伤组织最佳诱导培养基为MS+2.00 mg/L NAA+1.00 mg/L 6-BA,其愈伤组织诱导率最高(97.0%);继代培养基以MS+2.00 mg/L NAA+1.00 mg/L 6-BA中愈伤组织生长量和总黄酮产量最高,分别达4.58 g和12.24 mg;以MS+4.00 mg/L NAA+2.00 mg/L 6-BA中的愈伤组织总黄酮含量最高,达2.17 mg/g;愈伤组织的生长量随继代培养时间的延长而增加,而其总黄酮含量不稳定,于继代培养第30天达到最高(2.7 mg/g),此时总黄酮产量最高可达26.66 mg. 相似文献
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不同抗生素对雪莲愈伤组织生长的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
以雪莲叶片为外植体,探讨了卡那霉素(kanamycin,Kan)、潮霉素(hygromycin B,Hyg)、羧苄青霉素(car-benidillin,Car)3种抗生素对雪莲愈伤组织诱导、生长及分化的影响,以确定农杆菌介导的遗传转化研究中筛选剂和抑菌剂的最适浓度。结果表明:40mg/L的卡那霉素已抑制雪莲愈伤组织生长,当卡那霉素为50mg/L时,愈伤组织的生长基本停止;8.0mg/L潮霉素能够有效抑制雪莲愈伤组织的生长,当潮霉素为20mg/L时则生长的愈伤组织块较小、褐化、甚至死亡。同时,低浓度(0.5~2.0mg/L)的潮霉素可以提高雪莲愈伤组织的分化率;作为农杆菌抑菌剂,不同浓度羧苄青霉素对雪莲愈伤组织生长的影响差异极显著,当羧苄青霉素的浓度超过400mg/L时对雪莲愈伤组织的出愈及生长均有明显的抑制作用。 相似文献
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光质、光强和光期对水母雪莲愈伤组织生长和黄酮生物合成的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
白光、蓝光、红光和远红光等不同光质照射及不同的白光强度对水母雪莲愈伤组织生长、苯丙氨酸氨基裂解酶(PAL) 活性及黄酮合成有不同的影响。红光明显促进愈伤组织的生长,但强烈抑制PAL活性和黄酮的合成。蓝光对愈伤组织生长无明显影响,但显著提高PAL 活性和黄酮的合成。白光的作用介于红光和蓝光之间。远红光的作用与蓝光相似,但作用比较弱。每天16 h 蓝光加8 h 白光和8 h 蓝光加16 h 白光的组合产生最高的黄酮含量和黄酮生产率。 相似文献
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家蝇cDNA文库的构建 总被引:10,自引:0,他引:10
自Boman小组 (Steiner ,1981)从惜古比天蚕(Hyalophoracecropia)中分离、纯化出第一种抗菌肽天蚕素以来 ,人们已在昆虫和其他无脊椎动物中发现了 170多种抗菌肽 (Lowenbergeretal ,1999)。目前 ,人们不仅搞清楚了多数抗菌肽的氨基酸序列、结构和功能特点 ,而且还对一些抗菌肽的基因进行了克隆 (陈留存和王金星 ,1999)。我们以家蝇为材料 ,分离、纯化出了抗菌肽 ,在此基础上 ,构建了经过诱导的家蝇cDNA文库 ,以克隆其基因。1 材料和方法1 1 实验材料家蝇 (Muscadomestica)… 相似文献
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麋鹿血液cDNA文库的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
为分离出MHCⅠ、Ⅱ基因,利用TRIzol 试剂从麋鹿血液组织中提取总RNA,经mRNA 纯化试剂盒纯化后,根据Stratagene 公司的cDNA 文库构建系统构建了麋鹿血液组织的cDNA 文库。初始文库滴度为1.96 ×106 pfu/ ml,总库容为1.96 ×106 个独立克隆;cDNA 插入片段平均长度约为1.0 kb;重组率为95.6 % 。文库各项指标均达标准经典cDNA 文库的基本要求。利用本实验室设计的可扩增MHCⅡ类DQA 基因第二外显子的引物检测扩增后的文库,得到了特异性非常好的目标条带,说明本文所建文库可以用于麋鹿MHC 相关基因的分离。 相似文献
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单个植入前胚胎构建cDNA文库 总被引:4,自引:0,他引:4
以PCR为基础的单个植入前胚胎cDNA文库构建是一种快速、可重复和高效的建库方法。单个植入前胚胎cDNA文库作为一种重要的新兴基因资源库 ,为新基因的克隆和鉴定奠定了坚实的基础 ,不仅解决了胚胎研究材料受限的问题 ,而且在时间上更加精确 ,更符合胚胎发育的规律。是研究早期胚胎发育基因表达的一种有效手段。随着这一技术的不断改进和与其它技术的有机结合 ,必然为人们进一步揭示胚胎发育的分子机制开创一个崭新的局面。 相似文献
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毛冠鹿大脑组织全长cDNA文库构建 总被引:1,自引:0,他引:1
运用SMART技术构建了毛冠鹿(Elaphodus cephalophus)大脑组织全长cDNA文库。提取大脑组织总RNA,Oligotex mRNA Kit纯化、获得poly(A) RNA,以CDSⅢ/3′PCR引物进行逆转录,LD-PCR扩增获得全长双链cDNA,经SfiⅠ酶切及柱层析分离后,500 bp以上的片段与载体λTripIEx2连接,体外包装得到cDNA文库。经鉴定原始文库滴度为5.1×105pfu/ml,扩增后文库滴度为1.5×109pfu/ml,重组率达到85%以上,插入片断平均长度约为1.0 kb,说明构建文库质量符合要求,可用于大脑特异表达基因的筛选。从该文库中克隆到了rig基因全长,包含5′和3′非编码区,从第43至477个核苷酸为一完整阅读框(ORF),此阅读框可编码一个145氨基酸的rig蛋白。 相似文献
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Summary Room temperature, heat reflux, Soxhlet, ultrasound-assisted and microwave-assisted extractions were employed to extract flavonoids
from dry cell cultures of Saussurea medusa Maxim. 24, 20, 6, 0.5 and 0.1 h exposures were necessary for room temperature, Soxhlet, heat reflux, ultrasound-assisted
and microwave-assisted extractions to obtain the maximum yield of flavonoids of 3.0%, 4.1%, 3.9%, 3.5% and 4.1%, respectively.
Microwave-assisted extraction showed obvious advantages in short duration and high efficiency to extract flavonoids from S. medusa cultured cells. 相似文献