高纯度α_1-抗胰蛋白酶的提取、抗血清的制备及其火箭免疫电泳测定

α_1-抗胰蛋白酶(a_1-AT)是肝细胞分泌的一种糖蛋白,是血浆蛋白电泳α_1球蛋白的主要成份。它能抑制多种蛋白酶,如胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、纤维蛋白溶酶等的活性。     

猪血浆α1-抗胰蛋白酶的分离纯化

α_1-抗胰蛋白酶(α_1-Antitrypsin,简称α_1-AT)是由肝细胞分泌的一种糖蛋白,是存在于动物血液中的一种重要的蛋白酶抑制剂,它能抑制多种丝氨酸类蛋白水解酶,占血浆胰蛋白酶抑制总活力的90％以上。α_1-AT通过调节蛋白水解酶的活性而参与机体的一系列生理活动,如血液凝固、纤维蛋白溶解、组织激肽释放、细胞融合、大分子装配和免疫反应等过程,对防止组织过度损伤有重要作用。目前国际上对人的α_1-AT研究较多,而对猪α_1-AT的研究甚少,仅见     

人血浆 α_2-巨球蛋白的分离纯化

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2M)是一种高分子量的糖蛋白,含糖量为8-11％,分子量为725,000,等电点为5.5,已知每克分子α_2M含有4.8克原子锌,占血浆总锌含量的20％.α_2M是血浆中重要的蛋白酶抑制剂.含量约为2毫克/毫升,能抑制四种内肽酶的活性.α_2M使蛋白酶失活的机理尚未彻底弄清,文献报道α_2M与胰蛋白酶、凝血酶、纤溶酶及激肽释放酶反应时,可从α_2M分子上游离出一段多肽(MW:85000),这一裂解作用使α_2M分子     

牛血浆中一种α_1-糖蛋白的提純和鉴定

(一)本文用硫酸銨分段沉淀和DEAE纤維素柱层析方法从牛血浆中提取了一种对三氯乙酸不稳定的α_1-糖蛋白,經鉴定系超离心、电泳和免疫純。光散射法測定分子量为66,500,超离心-扩散法測定为67,000(偏微比容取0.65)。 (二)該蛋白质具有抑制胰蛋白酶的活力,酶与糖蛋白的克分子比值是2:1。 (三)該蛋白质与胰蛋白酶結合后,仍与其相应抗血清产生沉淀反应,文中对其抑制活力中心和抗原决定簇的关系作了討論。     

三角帆蚌alpha-2巨球蛋白活性测定及不同组织的表达

alpha-2巨球蛋白(alpha-2 Macroglobulin,α2M)是一种蛋白酶结合蛋白,是重要的天然免疫因子。利用α2M的作用原理,用三角帆蚌血浆保护胰蛋白酶,后用大豆蛋白酶抑制剂抑制未被保护的胰蛋白酶。利用Na-benzoyl-DL-arg-nine-p-nitroanilide(BAPNA)作为酶底物检测被保护的蛋白酶活性的方法,首次证明了三角帆蚌体内α2M的存在。在此基础上,克隆了α2M基因保守区受体结合区片段,进一步证明了α2M在三角帆蚌体内的存在。同时,还进行了α2M不同组织的表达检测,结果显示,α2M基因在血细胞中有表达,而在外套膜、闭壳肌、肠和性腺中没有表达。     

重要的疾病急性期反应物——C-反应蛋白

急性炎症时血液有特征性改变,这包括红细胞沉降速度的加快,C-反应蛋白、血清类粘蛋白、结合珠蛋白、α_1-胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、铜兰蛋白、纤维蛋白原、氨基己糖、粘多糖、血清淀粉样物质A(serum amyloid A,SAA)等的出现或升高,运铁蛋白、α_1-脂蛋     

α1-抗胰蛋白酶的分离纯化

为建立从Cohn's组分IV沉淀中分离纯化α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)的技术路线,以Cohn's组分IV为原料,利用还原剂1,4-二硫苏糖醇(DTT)、气相二氧化硅等处理,再经压滤、离子交换层析和疏水层析提取α1-AT.用SDS-PAGE及合成基质法检测α1-AT的纯度以及生物活性.结果可见,Cohn组分IV沉淀中α1-AT占蛋白总量的11%～13%,经该工艺提取的α1-抗胰蛋白酶纯度为97.6%,疏水层析后α1-AT的收获率为21%,比活为每毫克总蛋白中含 0.54 mg功能活性α1-AT.可见用此方法从Cohn组分IV沉淀中可制备高纯度的α1-AT.     

大鼠肝癌中α_2-巨球蛋白等几种分泌性蛋白基因表达的变化

用Northern blot方法对二乙基亚硝胺所诱发的大鼠肝癌中内源性蛋白酶抑制因子α_2-巨球蛋白(α_2-M)、非特异性免疫抑制剂α_1-酸性糖蛋白(α_1-AGP)及雄性激素正调控的α-2u球蛋白(α-2u)三种分泌性蛋白基因表达情况进行了分析。结果表明在大部分(14/16)肝癌样品中α_2-M RNA水平显著降低;而α_1-AGP RNA水平显著高于正常对照水平;α-2u RNA水平明显下降,但在某些雄性大鼠肝癌样品中该基因却有一定程度的表达。这些结果说明,一些肿瘤宿主血浆中α_2-M水平的显著下降及α_1-AGP水平的明显升高分别是由于基因表达活性的下降及升高所致。α-2u基因表达的异常提示,在癌变过程中机体的内分泌功能发生了某些变化。     

人血浆Cohn法组分Ⅳ沉淀的综合利用研究

目的采用全层析工艺从废弃的Cohn法组分Ⅳ沉淀(Cohn fraction Ⅳ precipitate, Cohn F Ⅳ)中提取抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)、α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)和人血白蛋白进行综合利用。方法将Cohn F Ⅳ溶解并澄清处理后进行SD法病毒灭活,得到上柱前料液,再依次采用阴离子交换层析、肝素亲和层析+α1-AT Select串联亲和层析、疏水层析以及分子筛层析后分别得到AT Ⅲ和α1-AT的纯品以及主要含有人血白蛋白的组分。对AT Ⅲ和α1-AT分别进行纯度、活性以及肝素亲和力等方面的检测,并评价其质量属性。结果采用此方法获得的AT Ⅲ纯度可达99%以上,比活达10 IU/mg以上,肝素亲和力达80%以上;α1-AT纯度同样可达99%以上,比活达1.5 PU/mg以上。结论本研究所述方法可成功将Cohn F Ⅳ中的AT Ⅲ、α1-AT以及人血白蛋白等几种目前最具备提取利用价值的蛋白进行有效的分离,在人血浆综合利用方面具有较高的利用价值。     

慈菇中两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂的研究

由于蛋白酶抑制剂在生理、生化、病理、药理上都占有很重要的地位,特别是具有多功能的蛋白酶抑制剂被广泛应用于临床,近年来愈来愈受到各方面的重视。本文报道了从慈菇中提取两种结晶的多功能蛋白酶抑制剂,它们都具有两个活力相等的活性中心,这与其他已知的同类型植物蛋白酶抑制剂不同,有它的特殊性。(1)_慈菇蛋白酶抑制剂A、B,除能抑制胰蛋白酶外,还能抑制胰凝乳蛋白酶及猪颌下腺的舒缓激肽释放酶。用酰胺、酯及蛋白等不同底物分别求出抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值及对胰凝乳蛋白酶的半抑制比值。两者对胰蛋白酶的抑制常数在10~(-9)～10~(-10)的范围内,抑制剂B对胰蛋白酶较之A有更大的结合力,但抑制剂A对胰凝乳蛋白酶及舒缓激肽释放酶较之B却有更明显的抑制活力。(2)_用葡聚糖凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳分别测定抑制剂A、B的分子量均在17000左右。从抑制剂A、B对胰蛋白酶的当量抑制比值求得分子量为8500。这说明每一抑制剂分子中具有两个活力相等的活性中心。(3)_测定了抑制剂A、B的氨基酸组成,二者除碱性氮基酸及天冬氨酸含量略有差异外其余皆相同,各含有两对二硫键,非极性氨基酸含量较高约占60%左右。由氨基酸组成求得最小分子量约16500。(4)_用二硝基氟苯,二甲基氨基萘磺酰氯及氨呔酶M测定抑制剂A、B的N末端,都证实是天冬氨酸。     

α_1抗糜蛋白酶

<正> 血浆中含有几十种蛋白质。其中含量最多的是清蛋白,其次为免疫球蛋白。居于第三位的是一组蛋白酶抑制物,关于它们的生物学意义,有些至今尚未明确。引起人们对这类血浆蛋白质的兴趣始于60年代初。当时有人报道α_1抗胰蛋白酶(α_1—AT)的缺乏与肺气肿的发生有关。该作者用琼脂电泳法检查了六例肺气肿思者的血清,发现在α_1区缺少一种成分,免疫电泳证实它是α_1—AT。直到1970年,西德的N.Heimberger采用了一种特别的生化分析方法,才首次比较系统地分离和鉴定了几种存在干血浆内的蛋白酶抑制物。这个方法把电泳和酶     

α_1抗胰蛋白酶遗传类型在七个民族中的分布

调查了α_1-AT遗传类型在东北及内蒙古地区汉、蒙、朝鲜、满、达斡尔、鄂温克、鄂伦春等七个民族中的分布。计算了每个群体中的α_1-AT基因频率,经X~2检测证明七个群体α_1-AT表型分布均符合Hardy-weinberg法则。同时,将各少数民族人群α_1-ATM类型及变异型的基因频率与汉族人群进行了比较。     

刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和填料的制备及纯化瑞替普酶

刺桐属胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,能特异性的抑制胰蛋白酶、组织纤溶酶原激活剂(tPA)、瑞替普酶(rPA)等丝氨酸蛋白酶。实验利用ETI工程菌,经诱导表达、体外复性及纯化获得ETI蛋白,并将该蛋白键合到CNBr活化的琼脂糖凝胶,制备ETI亲和填料,纯化瑞替普酶 。     

人血浆α_2-巨球蛋白的研究概况

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2-M)是人体中重要的血浆蛋白之一,能与多种蛋白水解酶反应,是血浆中含量最多的蛋白酶抑制剂。α_2-M通过对蛋白酶水解活性的调节而参与凝血、纤溶、激肽释放、炎症及免疫等一系列生理及病理过程。因此,α_2-M的研究对某些疾病发病机制的了解具有重要的意义。 1953年,Jacobsson首先报道了α_2-M。此后对其组成、结构、理化性质及生物活性等方面的研究都有较详细的报道和论述。国内这     

人血浆α_2巨球蛋白的研究概况

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2-M)是人体中重要的血浆蛋白之一,能与多种蛋白水解酶反应,是血浆中含量最多的蛋白酶抑制剂。α_2-M通过对蛋白酶水解活性的调节而参与凝血、纤溶、激肽释放、炎症及免疫等一系列生理及病理过程。因此,α_2-M的研究对某些疾病发病机制的了解具有重要的意义. 1953年,Jacobsson首先报道了α_2-M.此后对其组成、结构、理化性质及生物活性等方面的研究都有较详细的报道和论述.国内这     

HPV-16癌蛋白促宫颈癌血管生成及其机制

多种肿瘤组织中有人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)相关癌蛋白的检出,尤其是宫颈癌活检组织中高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)癌蛋白的检出率高达95%。近年的研究发现,HR-HPV癌蛋白(特别是HPV-16E6和E7)与宫颈癌血管生成有关,其机制主要是:(1)HR-HPV癌蛋白可以增强一些血管生成促进因子,如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)等的表达从而促进血管生成;(2)HR-HPV癌蛋白也可以降低一些血管生成抑制因子,如血小板应答蛋白(thrombospondin,TSP)、乳腺丝酶抑制蛋白(mammary serine protease inhibitor,maspin)等的表达进而使血管生成免受抑制。本文对HPV-16癌蛋白及其与宫颈癌血管生成的关系作一综述。     

激光扫描共聚焦显微镜观察胰蛋白酶对肺上皮细胞游离钙离子的影响

目的：研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca^2＋]i的影响.方法：应用Fluo-3/AM 荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜（LSCM） 检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca^2＋]i.结果：胰蛋白酶、SLIGKV、tc-LIGRLO均能引发H292细胞[Ca^2＋]i的增加,平均荧光强度分别比加入药物前增加267%,60%和37%.胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）和α1-抗胰蛋白酶（α1-AT）可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca^2＋]i的增加.结论：PAR-2可以介导H292肺上皮细胞[Ca^2＋]i的释放增加,胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca^2＋]i的增加.     

一种具有抑制糜蛋白酶活性的血清DNA结合蛋白质的纯化和理化特性

 本文采用离子交换层析,DNA亲和层析和硫酸铵盐析三步从人血清中分离纯化了一种肿瘤相关DNA结合蛋白质(64DP)。本方法较简便,产率提高。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫电泳鉴定纯度符合要求。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量为64,000。等电聚焦电泳测得等电点在4.2左右。醋酸纤维膜电泳和转移电泳表明其为一种α_1球蛋白。过碘酸西夫氏糖蛋白染色呈阳性反应。氨基酸分析和酶抑制试验证实64DP与α_1抗縻蛋白酶很相似。     

大鼠肝癌中α_1-抑制因子3基因表达及基因结构的某些变化

在DEN诱发的大鼠肝癌中,大部分(75%,12/16)肝癌组织中α_1-I 3的基因表达显著减少或失去表达能力。进一步的研究表明,该基因表达异常的原因可能部分地是由于基因的甲基化程度较高,及可能由于基因本身结构的变化(如重复序列的插入及在某些限制性内切酶位点发生突变)而导致基因结构异常(RFLP)有关。本文还就α_1-I 3类内源性蛋白酶抑制因子与癌变的关系进行了讨论。     

1α,25(OH)_2D_3抑制前列腺癌机制研究进展

1α,25(OH)_2D_3是一种类固醇激素,在抑制前列腺癌发生和发展中具重要作用。1α,25(OH)_2D_3抑制前列腺癌涉及多方面的分子过程,包括G1/S细胞周期阻滞、促癌细胞凋亡、抗血管生成和阻止癌细胞迁移等。本文将从维生素D_3合成代谢羟化酶表达调控、VDR基因多态性、雄激素及受体调控、抗炎因子表达调控、胰岛素样生长因子及相关结合蛋白表达调控等方面阐述了近年来1α,25(OH)_2D_3抑制前列腺癌分子机制的研究进展,为维生素D_3预防和治疗前列腺癌的应用提供了参考。