中国对虾杆状病毒基因克隆及探针制备与检测

从收集的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）病虾样品中分离到一种杆状病毒,经负染在电镜下观察,完整病毒粒子大小为１１０×２８０～３２０ｎｍ。病毒核酸经ＥｃｏＲＩ酶切,克隆到ｐＵＣ１８质粒上,经筛选得到两个克隆Ｌ４６、Ｍ１３,克隆片段分别为２．１４ｋｂ和３．５８ｋｂ。将这两个基因片段和对虾白斑综合征杆状病毒（ＷｈｉｔｅＳｐｏｔＳｙｎｄｒｏｍｅＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ,简称ＷＳＳＶ）基因克隆片段Ａ２６制备探针,共同用点杂交法对我国沿海地区的病虾样品进行检测,以了解我国沿海地区对虾杆状病毒的分布,并确定中国对虾杆状病毒与ＷＳＳＶ的同源性。     

两种病毒侵染中国对虾后细胞超微病理学变化与免疫标记

应用电子显微技术研究人工感染的中国对虾病毒病原及其宿主细胞超微病理学变化。结果显示病虾体内存在球状与杆状两种病毒病原,有时在同一病虾组织的同一细胞中可见两种病毒同时侵染现象,该现象提示存在复合感染的可能。利用胶体金免疫标记技术对感染病虾细胞质中出现的球状病毒作定位标记,初步结果表明已分离提纯的球状病毒与感染病虾细胞质中观察到的病毒粒子性质基本相同。病毒侵染后,细胞内主要的细胞器如线粒体、内质网、核糖体均发生了显著变化;侵染后期,可见溶酶体及多种膜性结构大量增生、细胞核被一些微管样结构包裹等特殊变化的发生。     

无包涵体杆状病毒在中国对虾主要器官组织中的分布

研究自然发病和人工感染的中国对虾胃等10种器官组织内杯状病毒的分布情况,结果在病虾的胃、皮下组织、鳃、循环血细胞,肠的上皮和结缔组织细胞中,观察到大量病毒粒子,是该杆状病毒侵染的主要器官组织;在类淋巴、,肝脏、肝胰腺的组织细胞中,观察到中等数量的病毒粒子;在症状典型的病重虾腹神经索,肌肉组织细胞中观察到少量病毒粒子。表明病毒在病虾机体内广泛分布,已形成周身性感染。该病毒主要侵染以上器官的疏松结缔组织细胞、上皮细胞和循环血细胞,其次是神经胶质细胞和心肌细胞。在中国对虾的神经胶质细胞、心肌细胞、循环血细胞以及各主要器官的疏松结缔组织细胞中,目前尚未见到报道存在有杆状病毒粒子。     

注意杆状病毒科分类的变化

杆状病毒由于被广泛用作目的基因的表达载体倍受重视。近年来证实某些杆状病毒对虾具有致病性 ,从而成为研究热点之一。目前公认的最重要的对虾致病病毒是对虾白斑综合征病毒 (ｗｈｉｔｅｓｐｏｔｓｙｎｄｒｏｍｖｉｒｕｓ ,ＷＳＳＶ) ,在我国养殖对虾中广为流行 ,引致重大经济损失。不少文献将ＷＳＳＶ称作对虾白斑病杆状病毒 ,其实并不准确。国际病毒分类委员会 (ＩＣＴＶ)在 1982年出版的第 4次病毒分类报告中将杆状病毒科 (Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ)分 4个亚群 :核多角体病毒亚群、颗粒体病毒亚群、Ｃ亚群及Ｄ亚群[1] 。第 5次病毒分…     

1996年中国对虾暴发性流行病病毒病原研究

１９９６年６月至８月,青岛地区养殖的中国对虾大面积暴发流行病,死亡率达９０％以上。发病对虾典型表征为甲壳白斑。病虾鳃组织匀浆滤液经微孔滤膜过滤除菌后,注射给健康对虾进行人工感染试验,９天内累计死亡率达１００％,发病症状及体征与自然发病对虾相似。电镜下自然发病对虾鳃、胃、头胸甲下表皮、淋巴样器官、触角腺等组织细胞核内发现大量杆状病毒,未见包涵体;人工感染对虾相同组织中可见大量同样病毒。切片中病毒粒子     

斑点杂交检测对虾白斑综合征病毒青岛株在螯虾体内的动态分布

近年来 ,我国学者对人工养殖对虾暴发性病毒病的病原进行了较为系统的研究[1～ 5] ,本试验应用螯虾这一动物模型[6] ,利用斑点杂交方法 ,研究了白斑综合征病毒 (ＷＳＳＶ ,前称无包埋体对虾病毒Ｎｏｎ -Ｏｃｃｌｕｄｅｄ -ＳｈｒｉｍｐＶｉｒｕｓＮＯＳＶ )青岛株在螯虾体内的动态分布 ,为研究该病毒的传播途径、增殖致病机理提供了参考。1　材料与方法1.1　实验动物克氏原螯虾 (Ｃａｍｂａｒｕｓｐｒｏｃｌａｒｋｉｉ ,以下简称螯虾 ) 40尾 ,购自南京某农贸市场 ,实验室饲养一周以上 ,健康存活。1.2　种毒处理及接种白斑综合征病毒青岛株 (…     

PCR法检测对虾皮下和造血器官坏死杆状病毒

皮下和造血器官坏死杆状病毒（ＨＨＮＢＶ）［１］、对虾杆状ＤＮＡ病毒（ＰＲＤＶ）［２］和白斑杆状病毒（ＷＳＢＶ）［３］是近年来引起全球对虾暴发性死亡的病原。这三种病毒同属杆状病毒属Ｃ杆状病毒亚群中的新病毒,在流行病学和病理学特征上十分类似,因此,我们...     

渤海西岸急性致死性对虾病的病毒病原研究

目前,在全世界养殖及野生对虾中已发现至少有10～20种病毒。近年来,我国沿海省份相继发生养殖对虾大批死亡现象,造成大部分虾场严重减产甚至绝收,对滩涂对虾养殖业造成巨大经济损失。虾病已成为对虾养殖业的重要限制因素。因此研究虾病的病原,传染途径,对有效防治暴发流行性虾病,发展对虾养殖业具有重要意义。本文报导我们对渤海西岸养殖的中国对虾暴发流行病病原的部分研究结果。1材料与方法1．五病好和病虾组织的超薄切片观察病虾取自辽宁锦西首钢前所虾场加工厂冰冻中国对虾,以及上海东海水产研究所固定保存的活病虾组织。从已死…     

中国对虾一种球状病毒的分离提纯及其核酸蛋白特性的研究

从感染致病的中国对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓ）中分离到一种球状病毒,其育径约为２０±４ｎｍ。进行人工感染实验,对虾死亡率为６６％;用脱氧核糖核酸酶（ＤＮａｓｅ）,核糖核酸酶（ＲＮａｓｅ）及二苯胺染色法对病毒核酸进行处理,证明该病毒核酸为脱氧核糖核酸,用Ｓｌ核酸酶（Ｓｌｎｕｃｌｅａｓｃ）对该核酸进一步消化处理,进一步证实该病毒含单链ＤＮＡ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示,该病毒含４条结构多肽,其分子量分别为８６ｋＤ,７９ｋＤ,７０ｋＤ及２５．５ｋＤ。根据上述特性分析,该病毒可能属于细小病毒科（ｐａｒ－ｖｏｖｉｒｉｄａｅ）,故暂定名为中国对虾细小病毒（ＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｓｉｓＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ简称ＰｃＰＶ）。     

白斑综合征病毒浙江分离株在动物模型克氏原螯虾组织中的分布

应用对虾白斑综合征病毒浙江分离株(WSSV-ZJ)人工口服感染实验动物模型克氏原螯虾,研究其在消化道组织和血淋巴细胞内分布及病理变化的特点。结果显示,在受感染濒死螯虾的胃、中肠和循环血淋巴中观察到大量病毒粒子,是病毒侵染的主要靶组织;此外,在肝胰腺组织的细胞中观察到少量病毒粒子。该病毒主要侵染结缔组织细胞、上皮细胞和循环血淋巴细胞等敏感细胞的细胞核。电镜和光镜观察及应用原位杂交检测表明,浙江株病毒粒子在螯虾体内的形态大小、分布特点和靶细胞组织的病理与其他地理株相似或相同。     

Role for dopamine in malonate-induced damage in vivo in striatum and in vitro in mesencephalic cultures

Defects in mitochondrial energy metabolism have been implicated in the pathology of several neurodegenerative disorders. In addition, the reactive metabolites generated from the metabolism and oxidation of the neurotransmitter dopamine (DA) are thought to contribute to the damage to neurons of the basal ganglia. We have previously demonstrated that infusions of the metabolic inhibitor malonate into the striata of mice or rats produce degeneration of DA nerve terminals. In the present studies, we demonstrate that an intrastriatal infusion of malonate induces a substantial increase in DA efflux in awake, behaving mice as measured by in vivo microdialysis. Furthermore, pretreatment of mice with tetrabenazine (TBZ) or the TBZ analogue Ro 4-1284 (Ro-4), compounds that reversibly inhibit the vesicular storage of DA, attenuates the malonate-induced DA efflux as well as the damage to DA nerve terminals. Consistent with these findings, the damage to both DA and GABA neurons in mesencephalic cultures by malonate exposure was attenuated by pretreatment with TBZ or Ro-4. Treatment with these compounds did not affect the formation of free radicals or the inhibition of oxidative phosphorylation resulting from malonate exposure alone. Our data suggest that DA plays an important role in the neurotoxicity produced by malonate. These findings provide direct evidence that inhibition of succinate dehydrogenase causes an increase in extracellular DA levels and indicate that bioenergetic defects may contribute to the pathogenesis of chronic neurodegenerative diseases through a mechanism involving DA.     

2018年中国植物科学若干领域重要研究进展

2018年中国植物科学继续呈现快速发展的态势, 我国科学家在国际植物科学主流学术刊物发表论文数量大幅增加, 取得了多项具有重要影响的成果。调控植物生长-代谢平衡实现可持续农业发展入选2018年度中国科学十大进展; 中国被子植物区系进化历史研究入选2018年度中国生命科学十大进展。以水稻为代表的农作物和果蔬等经济作物研究在国际上已呈现出明显的优势, 若干领域已从“追赶”状态跨越到“领跑”地位。该文对2018年中国科学家在植物科学若干领域取得的重要研究成果进行了概括性评述, 旨在全面追踪和报道当前中国植物科学领域的发展前沿和热点, 展示中国科学家所取得的杰出成就。     

2017年中国植物科学若干领域重要研究进展

2017年中国植物科学继续保持高速发展态势, 重大成果频出, 具体表现在中国植物学家在国际顶级学术期刊发表的文章数量平稳上升。中国植物科学领域的研究工作者成果精彩纷呈, 如新型广谱抗病机制的发现、水稻广谱抗病遗传基础及机制和疫霉菌诱发病害成灾机制研究等。2017年中国生命科学领域十大进展评选中, 有两项植物科学领域的研究成果入选。水稻生物学、进化与基因组学和激素生物学等领域学科发展突出。另外, 值得一提的是, 长期从事高等植物与代谢途径调控分子网络研究和水稻品种设计育种的李家洋院士的研究成果“水稻高产优质性状形成的分子机理及品种设计”荣获2017年国家自然科学一等奖。这一具有重大国际影响的开创性贡献标志着中国植物科学在该领域的国际科学前沿居于引领和卓越地位。该文对2017年中国本土科学家在植物科学若干领域取得的重要研究成果进行了系统梳理, 旨在全面追踪和报道当前中国植物科学领域发展的最新前沿动态, 与广大读者共同分享我国科学家所取得的辉煌成就。     

我国葫芦科植物离体培养研究进展

葫芦科植物包括多种瓜类蔬菜,对其进行离体培养研究具有重要的理论和实践意义。综述了国内在葫芦科植物器官培养、体细胞胚胎发生、花药培养、原生质体培养和体细胞杂交及离体遗传转化等方面取得的研究进展,并对葫芦科植物离体培养、遗传转化与育种的前景作了展望。     

SSTR5 ablation in islet results in alterations in glucose homeostasis in mice

Somatostatin (SST) peptide is a potent inhibitor of insulin secretion and its effect is mediated via somatostatin receptor 5 (SSTR5) in the endocrine pancreas. To investigate the consequences of gene ablation of SSTR5 in the mouse pancreas, we have generated a mouse model in which the SSTR5 gene was specifically knocked down in the pancreatic beta cells (betaSSTR5Kd) using the Cre-lox system. Immunohistochemistry analysis showed that SSTR5 gene expression was absent in beta cells at three months of age. At the time of gene ablation, betaSSTR5Kd mice demonstrated glucose intolerance with lack of insulin response and significantly reduced serum insulin levels. Insulin tolerance test demonstrated a significant increase of insulin clearance in vivo at the same age. In vitro studies demonstrated an absence of response to SST-28 stimulation in the betaSSTR5Kd mouse islet, which was associated with a significantly reduced SST expression level in betaSSTR5Kd mice pancreata. In addition, betaSSTR5Kd mice had significantly reduced serum glucose levels and increased serum insulin levels at 12 months of age. Glucose tolerance test at an older age also indicated a persistently higher insulin level in betaSSTR5Kd mice. Further studies of betaSSTR5Kd mice had revealed elevated serum C-peptide levels at both 3 and 12 months of age, suggesting that these mice are capable of producing and releasing insulin to the periphery. These results support the hypothesis that SSTR5 plays a pivotal role in the regulation of insulin secretion in the mouse pancreas.     

2018年中国植物科学若干领域重要研究进展

2018年中国植物科学继续呈现快速发展的态势, 我国科学家在国际植物科学主流学术刊物发表论文数量大幅增加, 取得了多项具有重要影响的成果。调控植物生长-代谢平衡实现可持续农业发展入选2018年度中国科学十大进展; 中国被子植物区系进化历史研究入选2018年度中国生命科学十大进展。以水稻为代表的农作物和果蔬等经济作物研究在国际上已呈现出明显的优势, 若干领域已从“追赶”状态跨越到“领跑”地位。该文对2018年中国科学家在植物科学若干领域取得的重要研究成果进行了概括性评述, 旨在全面追踪和报道当前中国植物科学领域的发展前沿和热点, 展示中国科学家所取得的杰出成就。     

我国葫芦科植物离体培养研究进展

葫芦科植物包括多种瓜类蔬菜,对其进行离体培养研究具有重要的理论和实践意义.综述了国内在葫芦科植物器官培养、体细胞胚胎发生、花药培养、原生质体培养和体细胞杂交及离体遗传转化等方面取得的研究进展,并对葫芦科植物离体培养、遗传转化与育种的前景作了展望.     

Changes in aquatic vegetation in Rhine floodplain streams in Alsace in relation to disturbance

Abstract. Changes are described in aquatic vegetation in oligotrophic, groundwater-fed Rhine floodplain streams in Alsace (eastern France), resulting from disturbance. Disturbance factors include changes in nutrients, either permanent ones - effluent from a waste water treatment plant or trout hatcheries - or periodic ones: flooding. Regular inputs of high levels of phosphate and ammonia modified the macrophyte vegetation in these streams. The floristic composition, which was characteristic of oligotrophic waters upstream of the eutrophicated sector, changed to that of a eutrophic situation as originally found downstream. Periodic disturbance by floods which normally occur once a year, irregularly eutrophicates the small streams, causing the development of a mixture of eutrophic and oligotrophic species. Six macrophyte communities are distinguished, indicating different trophic levels. The aquatic vegetation is adapted to the variations of phosphate and ammonia levels. Hence, aquatic macrophytes can be used as bio-indicators of fluctuations in water nutrient levels in relation to the type of disturbance.     

Apoptosis in experimental myocardial infarction in situ and in the perfused heart in vitro

We report the appearance of apoptotic cells in experimental myocardial infarction (rabbit heart) in in situ and in vitro preparations. Apoptosis was recognized by intravital staining with Hoechst 33342 (Ho342), by nick-end labeling (TUNEL) and by DNA laddering. A steady rise in the relative number of apoptotic cardiomyocytes (apoptotic index) was noted in in situ preparations. Apoptosis was first noted 6 h after the onset of ischemia with its highest value occurring after 72 h. Apoptotic nuclei were absent in remote areas of the left and right ventricles. Apoptotic nuclei within the infarcted area showed diminished intensity of Ho342 fluorescence. Three days after ischemia, a border zone adjacent to the infarcted area consisting of apoptotic macrophages was recognized. A novel finding was the appearance of apoptotic cardiomyocytes in the isolated perfused ischemic heart. Occurring as early as 50 min after the onset of ischemia, a high apoptotic index was present adjacent to the ligature placed around the coronary artery. This observation provides the opportunity to selectively examine factors leading to apoptosis in the ischemic heart under controlled experimental conditions.     

节肢动物内共生细菌研究进展

节肢动物门是动物界最大的门,占整个动物种数的80%,全世界约有120万现存种。节肢动物在生长发育过程中会感染多种微生物,这些微生物会与其形成协同进化和互利共生的关系。内共生细菌是一类广泛分布于节肢动物体内的共生微生物,能够进行垂直传播和水平传播,对宿主的生长发育、生殖代谢、适应性、免疫功能和进化等诸多方面均具有重要的作用。目前,随着现代分子生物学理论和技术的发展,节肢动物内共生细菌相关研究主要集中在对其宿主的生殖调控功能、与其宿主、宿主寄主植物以及其宿主体内微生物和宿主天敌间互作关系等方面。因此,利用内共生细菌对昆虫种群动态的生殖调控功能,阻断热带蚊虫带来的疾病或植物病害的传播并对宿主昆虫进行种群压制或种群替换,可达到防控害虫的目的。本文从节肢动物内共生细菌的传播方式、对其宿主生物学效应以及内共生细菌与其宿主、宿主寄主植物、宿主天敌和宿主体内微生物互作关系等多方面进行概述,并对内共生细菌今后研究方向进行展望,以期为生物进化、物种形成和种群压制提供参考。