12种不同产地铁皮石斛指纹图谱研究及重金属元素含量测定

以12种不同产地铁皮石斛新鲜茎段为材料,以Ultimate XB C18(4.6mm×250mm,5μm)乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长270nm,柱温30℃。通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会)进行相似度分析,并建立12个不同产地铁皮石斛指纹图谱。经微波消解处理材料后,采用ICP-AES原子吸收光谱法测定不同产地铁皮石斛新鲜茎段中重金属铜、镉、铅、汞的含量,分析不同产地铁皮石斛质量,为建立铁皮石斛质量标准提供理论依据。结果表明:(1)不同产地铁皮石斛指纹图谱共有23个特征峰,相似度为0.918~0.987,其中产自安徽大别山、云南文山的铁皮石斛相似度分别为0.918、0.935,相比其他产地具有一定的差异性。(2)通过聚类分析将12种不同产地铁皮石斛分为4类:安徽霍山、江苏南京、云南石屏、云南玉溪、云南思茅为一类,云南文山、浙江仙居为一类,云南红河、广西天峨、安徽大别山、福建宁化为一类,浙江天台单独为一类。(3)产自云南玉溪的铁皮石斛茎段中铜含量超标26.25%,产自福建宁化和江苏南京的镉含量分别超标27.33%和122.30%,其它产地铜、镉、铅、汞含量在国家现行安全值以内。     

广西产拳卷地钱HPLC指纹图谱研究

为了对广西产拳卷地钱药材进行质量控制,采用HPLC指纹图谱法对8批药材进行了研究,色谱条件为安捷伦ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(B)-0.1%磷酸水溶液(D),梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温为25℃。结果表明:建立了参考指纹图谱,共有峰6个,8批广西产拳卷地钱药材HLPC指纹图谱相似度均大于0.75,其精密度、重复性、稳定性实验均符合指纹图谱技术要求。HPLC指纹图谱分析,数据稳定可靠,方法简便高效,可为广西产拳卷地钱质量评价提供参考。     

四川GAP基地虎杖药材HPLC指纹图谱研究

为了建立虎杖GAP基地药材HPLC指纹图谱,采用梯度洗脱法,对虎杖野生与种植药材进行了HPLC代测定。流动相为乙腈-0．1％磷酸水溶液线性梯度洗脱,检测波长为230nm;记录时间：70min;采用中南大学出版的指纹图谱相似度比较软件进行比较。通过软件的比较,虎杖野生与种植药材的指纹图谱相似度均大于0．90。说明运用梯度洗脱能很好分离虎杖的各类成分,本文所建立的方法可作为虎杖药材质量标准制定的参考依据。     

叶下珠药材HPLC指纹图谱的比较研究

采用反相高效液相色谱法,对叶下珠药材不同产地、不同采收期、不同部位指纹图谱进行测定和比较分析,并与中成药叶下珠胶囊的HPLC指纹图谱进行了比较研究。结果显示:(1)建立了叶下珠药材的HPLC特征指纹图谱,标定18个共有峰,利用对照品指认4个峰;11批(来源地不同)叶下珠样品的HPLC图谱相似度(相合系数,均值)在0.89~0.99之间。(2)7批不同采收期的叶下珠药材的HPLC指纹图谱相似度在0.94以上,各共有峰的峰面积大多随生长期而增加,至10月5日达到最高,建议叶下珠药材应于每年的10月上旬进行采收。(3)不同部位叶下珠药材HPLC指纹图谱相似度分析发现,叶、果的相似度较高(0.98~0.99),根、茎的相似度较低(0.86~0.87),说明根、茎中各成分含量较低,建议采收叶下珠药材的地上部分即可。(4)比较叶下珠胶囊和叶下珠药材的指纹图谱,发现二者的化学成分非常相似,但峰面积差异较大,其差异可能是由于加工过程所致。该研究所建立的HPLC指纹图谱分析方法简便、重现性好,可用于叶下珠药材及中成药的鉴定与质量评价。     

大黄药材蒽醌成分的HPLC指纹图谱研究

以大黄酚为参照物,利用高效液相色谱梯度洗脱,测定了10批大黄样品,建立以大黄药材蒽醌及衍生物成分为特征的指纹图谱,色谱柱为YMC-ODS-AQC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.2%磷酸水(B),检测波长270 nm,柱温25℃,流速1.0 mL/min,通过高压液相指纹色谱分析,鉴定了13个色谱峰的化学成分,找出24个共有峰,相似度均大于0.92。本文所建立的方法可作为大黄药材质量控制。     

不同品种玫瑰花药材的HPLC指纹图谱研究

目的:建立中药玫瑰花的高效液相色谱指纹图谱,为科学评价和有效控制其质量提供可靠的方法。方法:用HPLC-UV方法测定了11份玫瑰花样品,采用中国药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价2004A系统建立了玫瑰花药材指纹图谱,并进行相似度评价和聚类分析。结果:11份玫瑰花样品的HPLC指纹图谱有18个共有峰,有10份样品相似度都在0.8以上,聚类分析时归为一类。结论:建立了玫瑰花不同品种的HPLC指纹图谱,并比较了其之间的差异,该方法稳定、可靠、精密度高、重复性好,可为中药玫瑰花的质量评价体系的建立提供科学依据。     

猫须草HPLC指纹图谱研究

为建立猫须草药材HPLC指纹图谱分析方法,采用高效液相色谱法,以Phenomenex Synergi 4u hydro-RP 250×4.60 mm为色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,检测波长254 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温40 ℃。结果表明,建立的猫须草药材HPLC指纹图谱,确定了15个共有峰,各猫须草样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均在0.9以上。该方法简单、准确、重复性好,为更好地控制猫须草药材质量提供有效可靠的方法。     

刺五加HPLC/UV指纹图谱研究

采用HPLC/UV法对刺五加药材进行指纹图谱的研究。得到分离度,精密度和重复性均较好的刺五加药材HPLC/UV指纹图谱。结果表明,本方法可用于刺五加药材的指纹图谱测定,并为其全面质量控制提供参考。     

药用菊三七的HPLC指纹图谱

目的:建立药用菊三七的HPLC指纹图谱,为中药材质量控制提供有效的方法。方法:CBL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水溶液梯度洗脱;检测波长212 nm;柱温25℃;流速1.0 mL.m in-1;分析时间90 m in。结论:成功建立起其指纹图谱,并认为该方法稳定可靠,可以对该植物将来作为药物制剂的原材料进行质量控制提供参考。     

金线莲HPLC指纹图谱研究

以14批不同来源金线莲药材为原料,采用高效液相色谱法(HPLC),乙腈-甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,建立栽培及野生金线莲(Anoectochilus roxburgii)的指纹图谱,结合相似度分析,探讨金线莲与银线莲(Goodyera hachijoensis)的差异。结果表明,金线莲HPLC指纹图谱标定了24个共有峰,并指认了金线莲苷和葫芦巴碱、鼠李素-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素、Batatasin-Ⅲ等6个共有峰。除3批药材外,其余11批相似度均高于0.910,相似度总体较好。银线莲图谱相似度仅达0.529、0.721、0.698,均低于14批金线莲样品间的相似度。根据相似度评价,认为金线莲与银线莲存在差异,该结果可为分析评价金线莲与银线莲差异提供参考。     

铁皮石斛cDNA文库的构建及分析

首次报道铁皮石斛cDNA文库的构建及其分析.以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛叶片中提取总RNA,分离纯化mRNA,LD-PCR法反转录合成双链cDNA,以λTripEX2为载体,构建铁皮石斛cDNA文库.原始文库的滴度为4.3×105 pfu/mL,总克隆数为3.1×105,重组率为97.6%,扩增后文库总滴度为6.8×109pfu/mL,对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定,结果插入片段多分布在0.5～2.0kb之间,绝大部分在1.2～1.7kb左右,文库质量鉴定结果表明,构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段.cDNA文库的构建为铁皮石斛药用成分相关功能基因的研究奠定了基础.     

铁皮石斛茎段诱导丛生芽的研究

以铁皮石斛Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.的茎段作外植体,比较不同的培养基、激素等因素对茎段分化丛生芽的影响,以及不同浓度的香蕉汁和活性炭对试管苗生根的影响。结果表明：1／2MS较好,BA作用优于KT、ZT,最适浓度为2．0mg/L;丛生芽培养于1／2MS 10％香蕉汁 0．5％AC的培养基上,生根效果最好。     

一株铁皮石斛内生真菌的色素稳定性研究

本研究以铁皮石斛体内分离筛选得到一株产橙红色色素的内生真菌X1为研究对象,为明确该菌株的种属及其所产天然色素的稳定性,采用分子生物学的方法,鉴定该菌株归属于Neurospora sp.一种。该菌株所产橙色素在400 nm波长处有最大吸收峰;从温度、pH、光照、氧化剂与还原剂四个单因子,对该株菌进行色素稳定性研究。结果表明该色素在紫外光下放置6 h橙色素光吸收值增大,说明有增色效应;在pH 2～8,20～100℃下不受太大影响;H_20_2和Na_2SO_3对该色素有较强的破坏力;Fe³⁺、Zn²⁺、Cu²⁺、Ca²⁺和Mn²⁺对该色素具有保色或增色作用;10%NaCl和15%葡萄糖溶液对色素均有增色效应。该研究对内生真菌分离及真菌色素提取工艺具有一定的理论指导意义。     

酶法提取铁皮石斛多糖工艺优化及对挥发性成分的影响研究

铁皮石斛具有重要的药用价值,但其资源有限,因此对其充分开发和利用具有重要的意义。本文利用α-L-鼠李糖苷酶辅助提取铁皮石斛多糖,通过对酶解温度、酶解时间及加酶量三个因素进行优化,提高铁皮石斛多糖提取率;结果显示,在酶解温度为40℃、酶解时间为1 h、加酶量为2.5%时,多糖提取率为38.4%,而不加酶处理多糖提取率仅为21.7%,酶法处理大大增加了铁皮石斛的多糖提取率。同时,运用顶空固相微萃取技术结合气相色谱质谱联用仪(HS-SPME-GC-MS)分析比较α-L-鼠李糖苷酶对铁皮石斛挥发性成分的影响;GC-MS分析表明,铁皮石斛加酶处理前后共发现31种挥发性成分,主要成分均为己醛、1-辛烯-3-醇、异薄荷醇和3-辛烯-2-酮,并且醛类化合物在加酶处理前后的样品中相对含量均最高,且加酶处理后产生6种新的挥发性成分。该研究结果表明α-L-鼠李糖苷酶的使用可显著增加对铁皮石斛多糖提取率,并为铁皮石斛挥发性成分的研究和开发利用提供一定的参考依据。     

In vitro flowering of Dendrobium candidum

Dendrobium candidum, a wild orchid species from China, normally requires three to four years of cultivation before it can produce flowers. The effects of plant hormones and polyamines on flower initiation of this species in tissue culture were investigated. The addition of spermidine, or BA, or the combination of NAA and BA to the culture medium can induce protocorms or shoots to flower within three to six months with a frequency of 31.6%-45.8%. The flowering frequency can be further increased to 82.8 % on the average by pre-treatment of protocorms in an ABA-containing medium followed by transfer onto MS medium with BA. The induction of precocious flowering depends on the developmental stage of the experimental materials (protocorms, shoots and plantlets) used, and usually occurs only when mt formation is inhibited.     

铁皮石斛组织培养及试管苗营养器官和原球茎的结构观察

以铁皮石斛的茎尖为外植体,诱导产生原球茎,进一步培养形成幼苗.结果表明:原球茎诱导以1/2 M S+6-BA 0.3 m g.L-1+KT 0.1 m g.L-1+LH 1.0 g.L-1为最优,而生根培养以M S+NAA 0.05 m g.L-1+KT0.1 m g.L-1+叶酸2.0 m g.L-1+L a稀土10 m g.L-1为佳.对铁皮石斛试管苗营养器官及原球茎的解剖学研究表明,根由复表皮、皮层和维管柱组成,皮层发达,初生木质部五原型,中央具髓;茎由表皮、基本组织和散生维管束构成;叶为等面叶,在上下表皮处分布有厚壁组织;原球茎是由顶端分生组织后面的薄壁细胞脱分化形成胚性细胞经球状胚发育而来.     

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1对氧自由基和脂质过氧化的影响

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1的体外抗氧活性研究表明,铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1能明显抑制.OH和O2.-,并呈现良好的量效关系,其IC50分别为1.181和0.727mg/mL;多糖DCPP1a-1可降低体外温育和Fe2 、H2O2诱导的小鼠肝组织匀浆MDA的产生,能抑制小鼠肝线粒体MDA的生成;在1和2mg/mL浓度下能减轻线粒体的肿胀程度,显示出一定的量效关系。表明原球茎多糖DCPP1a-1具有较强的抗氧化活性。也初步显示出离体培养的铁皮石斛可能为石斛多糖的开发提供新的药源。     

铁皮石斛原球茎多糖DCPP1a-1的理化性质及抗肿瘤活性

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-52)和凝胶柱(Sephadex G-200)色谱分离纯化,得灰色粉末状多糖DCPP1 a-1。采用薄层层析、高效液相色谱、紫外光谱、红外光谱和高碘酸钠氧化等方法进行组成结构分析;并研究了DCPP1 a-1的体内抗肿瘤作用。结果表明,DCPP1 a-1为均一组分,具有α-吡喃糖苷键,分子中1→6键、1→2/1→4键、1→3键所占的比例分别为4.0%,52.1%和44.9%,平均分子量为189kD,由甘露糖和葡萄糖按7.015∶1的摩尔比组成,是首次从原球茎中分离出的新型多糖。多糖DCPP1 a-1的三个剂量组50、150、250 mg/kg对H22肝癌小鼠有不同程度的抑瘤作用,抑瘤率分别为28.6%、19.3%和15.7%。其中以低剂量组的抑瘤效果最好(P<0.05),并显著提高了胸腺和脾指数(P<0.05)。     

铁皮石斛快速繁殖和离体种质保存的研究

对铁皮石斛种子发芽、原球茎增殖、丛芽分化和壮苗培育进行了试验、观察和分析,研究了培养基、植物激素、光强和添加剂等对其分化和生长的影响。结果显示种子在1/2MS+蔗糖2%的培养基上,30d萌发95%以上。原球茎在1/2MS+椰子汁25%+蔗糖3%的培养基上,45~60d原球茎增殖速度可达1∶10。丛芽分化较适宜的培养基为1/2MS+BA2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+蔗糖3%,45~60d芽丛增殖速度为1∶4~5。试管苗在MS+香蕉泥20%+蔗糖2%培养基上,大约60d苗快速长高,茎粗壮且根系发达。离体保存材料可采用试管丛芽和原球茎两种方式,以保持其遗传多样性。保存方法是在15℃左右条件下,保存离体材料,继代间隔期为12~18个月;也可以采用室温保存,在1/2MS+蔗糖1%培养基上,继代间隔期可延长至10~12个月。     

紫花地丁HPLC指纹图谱研究

目的:建立紫花地丁药材HPLC指纹图谱,提供药材质量控制的可靠方法。方法:采用HPLC方法,以Agi-lent C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-0.5%醋酸水溶液进行梯度洗脱;检测波长353 nm,流速1.0mL/min。结果:检测了12批不同来源的紫花地丁药材,确立了18个共有峰,建立了紫花地丁对照指纹图谱,计算各被测样品的HPLC指纹图谱的整体相似度,并指认了菊苣苷、七叶内酯、东莨菪素、早开堇菜苷4个特征峰,比较了上述成分在不同药材中的含量。结论:所建立的指纹图谱具有良好的精密度、重现性和稳定性,可作为紫花地丁药材质量控制标准。