云南温泉高温菌的研究VII.腾冲酸性高温温泉中的极端嗜热性芽孢杆菌

从腾冲县4个酸性(pH 3.0—5.0)高温(85--96℃)温泉中分离到16株极端嗜热性芽孢杆菌。经鉴定,10株为嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stear6thermophilus),2株(YN86317和YN86326)为高温凝结芽孢杆菌(Bacillus thermoaoagulans sp. Nov.),4株(YN86325、YN86344、YN86344-2和YN86345)为 Baaillus spp.。     

云南温泉高温菌的研究Ⅲ保山县摆洛塘温泉中的极端嗜热细菌

用1~#、7~#PPY三种培养基,从保山摆洛塘温泉(86℃,pH7.0)分离到生长温度范围为35—75℃的极端嗜热细菌4株,即“YN8617”、“YN8618”、“YN86290”,YN86291”。经鉴定,“YN3617”和“YN86291”为Bacillus stearother mophilus,“YN86290”为Becillus caldolyticus;“YN3618”暂定为“Extremely thermophilic strains of B.Coagulans”。没有分离到水生栖热菌属(Thermus)的细菌。     

临沧地区温泉中的嗜热性芽孢杆菌及其特征

本文报道临沧地区温泉中的嗜热性芽孢杆菌及其特征。从该地区温泉中分离出Bacillusstearothermophilus和Bacillus thermosubtilis sp.nov.两个种。这些菌株都具有在自养型培养基上生长的能力。从这些温泉中没有分离出Thermus。     

保山地区碱性温泉中的高温菌

保山地区位于云南省西部,是全省温泉分布比较密集的地区之一。温泉作为地热资源已引起有关部门的重视,70年代已进行了地热资源的调查和开发利用研究。但是对于温泉中潜在的高温菌资源,尚未进行过系统考察、研究。现将我们对于保山地区pH8.0以上的高温温泉中的高温菌研究结果报告于后。       

嗜热芽孢杆菌XJT—9503高温中性蛋白酶的研究

嗜热芽孢杆菌ＸＪＴ－９５０３菌的发酵液经硫酸铵和丙酮分级沉淀分离纯化得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的高温中性蛋白酶制品。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ则得酶分子量为３００００。当以酪蛋白为底物时,酶反应最适温度为６５℃,最适ＰＨ为７,在ＰＨ６．５－９范围内稳定。在６５℃、０．０２ＭＰＨ７．５的磷酸缓冲液中的半衰期为５４ｍｉｎ。金属离了铜、汞、铝强列抑制酶活,钙离子、镁离子对酶活有促进作用     

嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶分解毛发角蛋白的研究

本文研究了嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)WF - 1 4 6高温蛋白酶对毛发角蛋白的水解作用。结果表明 ,在体积分数为 2 %的巯基乙醇存在的条件下 ,WF - 1 4 6高温蛋白酶对毛发角蛋白有明显的水解作用。对酶解液氨基酸分析表明 ,酶解液中含有对照液中没有的游离蛋氨酸和亮氨酸 ,且游离氨基酸总量是对照样品的 2 .4倍 ,达 1 5 8mg·L-1 。此外 ,酶解液中含有大量的肽     

表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌产高温蛋白酶的影响

研究了表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)WF146产胞外高温蛋白酶的影响。结果表明,表面活性剂Tween80在0.05%～0.1%(体积比)浓度范围内对WF146产酶有一定的促进作用。在培养基中添加0.1%Tween80可使发酵液酶活提高12.7%,Tween20和TritonX100则抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146产酶。另外,TritonX100抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146生长,而Tween80和Tween20不抑制其生长。     

嗜热脂肪芽孢杆菌质粒的分离

从堆肥和污泥中分离到一批抗药性高温细菌,经电泳检查,发现6株高温细菌细胞中有质粒存在。其中,嗜热脂肪芽孢杆菌T653的细胞DNA提取液电泳图谱上,有三条非染色体DNA条带,用电镜直接观察,证明它们是T653细胞中的三个质粒。测得两个较小质粒的分子量分别为3.6×10~6和45×10~6道尔顿。研究了嗜热脂肪芽孢杆的T653的温度生长条件与其细胞中质粒的关系。T653细胞中三个质粒的明确功能有待进一步探讨。     

嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶的产生条件及酶学性质

对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilis)WF146的产蛋白酶的条件进行了研究,在58℃条件下,WF146在pH值为75的Fd培养基中振荡发酵培养48h后,发酵液中高温蛋白酶产量可达600u/mL以上。对该酶性质的研究表明,酶分子量为34kD,最适作用pH为80,最适作用温度为80℃,具有良好的pH稳定性及热稳定性。Ca2+对该酶的稳定性具有重要影响,PMSF、DFP及IAA能强烈抑制酶活力,而DTT对该蛋白酶活力无影响     

xyLE基因在嗜热脂肪芽孢杆菌中的表达

以嗜热脂肪芽孢杆菌CU21的表达型质粒pFDC11为载体,插入来自恶臭假单孢菌的编码邻苯二酚2,3-双加氧酶(CatO_2ase)的xylE基因,构建成重组质粒pFDX1转化入CU21受体,在48℃培养时得到了表达产物,表明常温细菌的xylE基因可以在高温菌启动子的带动下在高温菌宿主中表达。采用提高培养温度后选择卡那毒素抗性突变的方法,得到了在55℃及6O℃的CatO_2ase表达量明显提高的变异菌株CU21-161。本文同时报道一种用完整细胞悬浮液测定CatO_2ase活力的方法。     

嗜热脂肪芽孢杆菌DNA解链蛋白1的纯化及性质

以嗜热脂肪芽孢杆菌为材料,通过ＰｏｌｙｍｉｎＰ沉淀,硫酸铵分级及Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ,ＤＥＡＥ纤维素,磷酸纤维素,ＦＰＬＣ ＭｏｎｏＱ,ＦＰＬＣ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２等柱层析,得到部分纯化的ＤＮＡ解链蛋白１。ＢｓｔＨ１具有依赖ＤＮＡ和Ｍｇ＾２＋的ＡＴＰ酶活力,不同类型的核酸对ＢｓｔＨ１的ＡＴＰ酶活力的促进作用不同。     

同工酶研究在嗜热脂肪芽孢杆菌分类中的应用

嗜热脂肪芽孢杆菌是一个尚未被严格定义的种,它几乎包括芽孢杆菌属内所有能在65℃以上生长的细菌。用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法对151株嗜热脂肪芽孢杆菌的9种酶(G6PDH、LDH、MDH、IDH、AlaDH、LeuDH、过氧化氢酶、过氧化物酶、酯酶)的酶谱进行测定分析。根据其酶谱的差异,可将151株菌株分成两个类型。两型之间8个酶的13或14个基因产物的相异度约为91.8％,两型间的标准遗传距离是2.55。因此这两种类型的细菌也许可以被看作为两个不同的种。     

长白山温泉无氧芽孢杆菌的分离鉴定

[目的]对长白山温泉中嗜热微生物进行分离鉴定,并了解其生理生化特性.[方法]采用橄榄油富集培养基,稀释平板涂布法对长白山温泉样品进行分离得到一株嗜热菌CBS-5;在电子和光学显微镜下观察菌体形态和芽孢;应用生理生化试验、16S rDNA序列分析以及(G C)mol%含量等方法对菌株特性进行鉴定.[结果]菌株CBS-5为革兰氏阳性菌,无鞭毛,产端生芽孢,最适生长温度为65℃,最适pH7.7左右,能以蔗糖、麦芽糖和乳糖等作为唯一碳源生长,具有酯酶和过氧化氢酶活性,对卡那霉素、红霉素和硫酸新霉素等抗生素均无抗性.Tm法测定该菌的(G C)mol%含量为41.9%.脂肪酸成分分析表明在CBS-5中iso-15:0的含量最高,为24.20%,与无氧芽孢杆菌属成员一致.以该菌的16S rDNA序列为基础构建了系统发育树;16S rDNA序列同源性比对表明该菌与无氧芽孢杆菌属各种之间的同源性在95.1%-98.5%之间.[结论]菌株CBS-5(=JCM 15484)是一株嗜热无氧芽孢杆菌,具有产酶活性,对于研究和开发化工、食品和环境保护方面的工业用酶具有重要价值.     

嗜热芽孢杆菌噬菌体的分离及特征研究

目的：从腾冲热海温泉中分离嗜热芽孢杆菌噬菌体,并初步分析其特征。方法：采用双层平板法分离纯化嗜热芽孢杆菌噬菌体,对分离得到的噬菌体进行电镜形态观察,按照感染复数（MOI）分别为0．01、0．1、1．0、10和100加入噬菌体纯培养液和宿主菌,55℃、160r／min培养8h后测定噬菌体滴度,并进行噬菌体的热稳定性和pH稳定性分析。结果：从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体为二十面体型;其感染宿主菌NHH4形成清晰的噬菌斑,最适MOI为1．0,最适感染温度为55℃,最适感染pH值为7．5。将这株噬菌体命名为TBIP1。结论：从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体TBIP1为典型的二十面体型,当MOI为1．0时,TBIP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高。     

嗜热脂肪芽孢杆菌HY—69耐热中性蛋白酶的性质研究

嗜热脂肪芽孢杆菌ＨＹ－６９的耐热中性蛋白酶已纯化。研究了纯酶的性质,该酶分子最为２４ｋｄ,由６个构成一个六聚体。酶的等电点９．１５。最适作用ｐＨ为７．５,最适作用温度为８５℃;该酶具有很好的耐热性,９０℃时酶活半寿期为２２ｍｉｎ,８０℃保温３小时,酶活仍保持６３％;酶的ｐＨ稳定性也好,该酶是金属蛋白酶,活性中心含锌离子,酶的热稳定性依赖于钙离子。测定了酶的氨基酸组成和Ｎ末端氨基酸序列。     

嗜热脂肪芽孢杆菌DNA解链蛋白BstH2的纯化及性质研究

以嗜热脂肪芽孢杆菌为材料,通过ＰｏｌｙｍｉｎＰ沉淀、硫酸铵分级及ＤＥＡＥ纤维素、磷酸纤维素、Ｂｌｕｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ、ＦＰＬＣ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２等柱层析,得到了部分纯化ＤＮＡ解链蛋白ＢｓｔＨ２。ＢｓｔＨ２具有受ＤＮＡ促进的ＡＴＰ酶活力,没类型的核酸对ＢｓｔＨ２的ＡＴＰ酶活力的促进作用没。ＢｓｔＨ２在５５℃有最高ＡＴＰ酶活力。这种活力受大肠杆菌单链ＤＮＡ结合蛋白的抑制及随     

嗜热脂肪芽孢杆菌与北京棒状杆菌细胞融合初探

对两种不同属间的细菌,嘈热脂肪芽孢杆菌与北京棒状杆菌原生质体的形成,再生及融合进行了研究。初步确定了适应此两种出发菌株的破壁、再生及融合的最佳条件。在此条件下,其破壁率均可达98%以上;LT1菌与LT2菌的再生率分别可达52%与51%;融合率可达2.55×10(?)。试验结果表明,此两种不同属间的细菌细胞融合是完全可能的。10(?)以上的融合率应用于工业遗传育种是完全可行的。     

分离嗜热脂肪芽孢杆菌单个菌落的方法

本文研究了平板培养基的量、培养温度、培养湿度、培养基类型、培养时间对运动性较强的嗜热脂肪芽孢杆菌WF—146平板分离的影响。结果表明,控制好上述因素,嗜热脂肪芽孢杆菌WF—146在平板上培养可较好形成单菌落。