基因工程药物的审批

基因工程药物的审批丁锡申（中国药品生物制品检定所）近年来,基因工程药物的发展十分迅速,研制单位越来越多,上市品种也不断增加。要经过哪些报批手续才能上市？这是研究者十分关心的问题之一。药品是一种特殊的商品,它直接关系到人民的身体健康。故在上市之前要经过一系列严格的试验和审批,审批周期要比一般商品长得多,从开始报批到取得试生产文号,即可以上市销售,最短要经过２-３年的时间。这一点研制单位必须要有?...     

基因工程药物的过去、现在和将来

生物技术的开发迅猛异常、日新月异。生物技术的核心是基因工程,基因工程技术最成功的是用于生物治疗的新型药物的研制。已有近３０种基因工程药物投入市场,产生了巨大的社会效益和经济效益。生物技术用于疾病的预防和疑难病症的治疗已经成为现实。以下就其现状和我国基因工程药物的研究与发展,作一分析。     

Pipeline Report新靶标药剂不断上市第2代药物也在加速开发

本讲的主题是风湿性关节炎治疗药（生物制剂）。目前市场的中心是肿瘤坏死因子α的靶向药剂。在美国，PEG化以及置换了氨基酸的第2代药物的开发在加速。同时也在探寻能够以低成本制造出高价值生物制剂的技术。[编者按]     

我国基因工程药物产业化进程中存在的问题

我国基因工程药物产业化进程中存在的问题丁锡申（中国药品生物制品检定所）我国基因工程药物的研究和开发起步较晚,从“六五”开始至“八五”末期有了较快的发展,尤其在国家“八六三”高技术发展计划的优先支持下,确定了以产品为目标的策略,增力。了资金投入,优选了重卢、目标产品,使基因工程药品的研究和开发进入了一个蓬勃发展的新时期,产业化的进程,形势十分喜人。     

治疗性单克隆抗体药物的现状及发展趋势

治疗性单克隆抗体药物经历了三十多年的发展,已经成为生物医药的最重要组成部分之一.在疾病治疗上具有广阔的应用前景,成功用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病.截至2012年已有29种治疗性单克隆抗体药物通过FDA审批并上市销售.治疗性单抗的安全性和有效性很大程度上由其作用的靶点决定,上市和在研的单抗药物有些靶向相同的靶点,有些有自己独特的作用靶点,新的作用靶点也在不断出现.以治疗性单抗的作用靶点为切入点,对目前上市销售和研发中的此类药物进行了简要总结.详述了肿瘤坏死因子α、白细胞分化抗原20、表皮生长因子受体及血管内皮生长因子等4种靶点的特点及相关单克隆抗体药物的情况,并对我国单抗药物的现状进行了分析,提出未来发展对策.     

以TNFα为基础并靶向于白细胞介素15受体的融合蛋白的构建及功能研究(英文)

IL 1 5及IL 1 5R阳性细胞在成人T淋巴细胞性白血病 (ATL)、多发性骨髓瘤及炎症性自身免疫性疾病病理过程中起着重要作用 .应用基因重组技术 ,构建、表达靶向于IL 1 5受体的两种融合蛋白 ,为研制特异的可消除IL 1 5R高表达细胞的导向药物奠定基础 .将人IL 1 5成熟肽基因及IL 1 5R拮抗剂 (IL 1 5M)基因片段分别与人工改造的人肿瘤坏死因子突变体 (TNFαM)基因按正确的阅读框架融合 ,定向克隆在pET1 6b表达载体T7启动子的下游 ,得到质粒pET IL 1 5 TNFαM和pET IL 1 5M TNFαM .从大肠杆菌相应重组菌株中通过Ni2 + NTA亲和层析分别纯化出两种融合蛋白IL 1 5 TNFαM和IL 1 5M TNFαM .IL 1 5 TNFαM和IL 1 5M TNFαM对IL 1 5R阳性红白血病细胞K5 6 2的杀伤作用分别是TNFα的 4和 1 5倍 ,两种蛋白对IL 1 5R阴性细胞系Jurkat的杀伤作用则没有明显差异且均弱于TNFα .这些结果说明 ,两种融合蛋白特别是IL 1 5受体拮抗型蛋白IL 1 5M TNFαM对与IL 1 5 IL 1 5R异常表达相关的疾病可能具有潜在的治疗价值     

人IL-6和TNF突变体重组融合蛋白表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

本文利用PCR技术,对人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因进行了改造,并将其与人白细胞介素-6(hIL-6)成熟肽编码区cDNA进行融合,构建了5′IL-6-TNF△融合蛋白的表达质粒pBVIL6-TNFA△。DNA序列分析证明,PCR扩增片段核苷酸序列与引物设计序列及相应的cDNA序列完全一致;重组子用限制性内切酶酶切鉴定,含有正确的IL6-TNF△融合cDNA片段;表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,分子量约为37kD,与预计的相符合;生物学活性分析初步表明,该融合蛋白具有抗肿瘤活性。     

Genentech开发动向

在医药方面,Genentech已将胰岛素基因工程制品投入市场;人生长激素及α干扰素正在等待食品及药物管理局批准;γ干扰素及血纤蛋白溶酶激活剂(tissue plasminogen activator)正在进行第二期临床试验。     

人骨髓间充质干细胞过表达白细胞介素-34对THP-1细胞的调节作用

构建人IL-34真核表达载体并将其转染到人骨髓间充质干细胞,观察高表达IL-34的骨髓间充质干细胞对THP-1细胞的影响。PCR扩增IL-34 DNA,并将其克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP;将构建成功的重组体转染到骨髓间充质干细胞,Western blotting和ELISA分析IL-34在细胞中的表达;用高表达IL-34的骨髓间充质干细胞培养上清液来培养THP-1细胞,Real-time PCR分析THP-1细胞中IL-10和TNFα的表达变化。经双酶切和测序鉴定,成功构建了pIRES2-EGFP-IL-34重组体;转染至骨髓间充质干细胞的IL-34可以促进THP-1细胞表达IL-10和TNFα。结果表明,骨髓间充质干细胞表达分泌的IL-34对THP-1有调节作用。     

非小细胞肺癌治疗用药开发的发展态势分析

<正>在全球非小细胞肺癌的严峻挑战面前,医药企业以酪氨酸激酶受体抑制剂、血管内皮生长因子受体桔抗剂、表皮生长因子受体拮抗剂的开发为重点,进行了大量的新药开发。至今,全球至少已对400个抗非小细胞肺癌药物进行过研究,包括200多个小分子药物和100多个生物技术药物。尽管其中的许多药物已停止开发。但仍有一些药物正处于临床研究阶段。从技术手段、竞争态势以及应用前景3个角度,对非小细胞肺癌治疗用药的发展态势进行了分析。     

急性白血病患者化疗前后外周血IL-2、TNF-alpha和VEGF 水平变化及与临床预后的关系

目的：探讨急性白血病患者（AL）化疗前后外周血白细胞介素-2 (IL-2)、肿瘤坏死因子-alpha(TNF-alpha)、血管内皮生长因子(VEGF) 水平变化及与临床预后的关系。方法：选2010年3 月-2013 年12 月在我院行化疗治疗的53 例AL患者（AL 组）,并同期抽选我 院47 例健康体检者为对照组,采用放射免疫以及酶联法检测两组外周血IL-2、TNF-alpha和VEGF水平,并探讨AL患者化疗前后外 周血IL-2、TNF-alpha、VEGF水平变化及与临床预后的关系。结果：AL 组化疗前外周血TNF-alpha、VEGF水平明显高于对照组（P<0.05）, IL-2 水平明显低于对照组（P<0.05）。AL组化疗6 个月后外周血IL-2、TNF-alpha和VEGF 含量与化疗前比较差异均有统计学意义 （P<0.05）。AL 组化疗6 个月后长期缓解未复发者42 例、复发者11 例;复发患者的外周血TNF-alpha、VEGF水平较未复发组高,IL-2 较未复发组低,组间差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：检测AL患者的外周血IL-2、TNF-琢、VEGF含量可作为诊断及判断预后 的重要指标。     

EGF类生长因子来源的新型靶向肽在抗肿瘤药物蛋白中的应用

许多肿瘤细胞表面表皮生长因子受体EGFR都存在过表达现象。考察了牛痘病毒生长因子(VGF)中的EGFR结合域(S3)与人的肝素样表皮生长因子(HB-EGF)来源的肝素结合域(命名为HE)重组后对肿瘤细胞的选择性。通过重组表达带有靶向和穿膜结构域的EGFP-S3-HE和EGFP-S3-HE-TATm两种融合蛋白与正常细胞和肿瘤细胞的共孵育实验来研究其对肿瘤细胞的特异性靶向吸附和穿膜效应。进一步将S3-HE-TATm靶向穿膜序列与苦瓜来源的核糖体失活蛋白MAP30融合,可显著提高MAP30对肿瘤细胞的抑杀作用,但这种抑杀作用却对正常细胞仍保持在较低水平。由此表明S3-HE-TATm是一种新型优异的肿瘤细胞靶向药物运输载体,可用于肿瘤治疗的进一步开发研究。     

重组人骨保护素对聚乙烯颗粒刺激的人工关节置换术患者外周血IL-6和TNF-α表达的影响

目的：探讨重组人骨保护素（rhOPG）对聚乙烯颗粒刺激的人工关节置换术患者外周血IL一6和TNF一0l表达的影响,分析rhOPG防止关节置换术后假体无菌性松动的应用价值。方法：收集2009年1月-2011年3月我院收治的人工关节置换术患者的外周血清60份,采用梯度离心法分离出单个核细胞,并将其随机分成5组,每组12份。对照组：单个核细胞,模型组：单个核细胞＋1X109／mL聚乙烯颗粒,低剂量组：单个核细胞＋1×109／mLL聚乙烯颗粒＋10ng／mLrhOPG,中剂量组：单个核细胞＋1X109／mL聚乙烯颗粒＋100ng／mLrhOPG,高剂量组：单个核细胞＋l×109／mL聚乙烯颗粒＋1000ng／mLrhOPG。通过酶联免疫酶联免疫法（ELISA）＇~4定各组细胞上清液中白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量,并进行组间比较。结果i（1）模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的IL-6、TNF-α．含量均显著高于对照组（P〈0．05）。（2）低剂量组、中剂量组、高剂量纽的IL-6、TNF—α浓度均较模型组低（P〈0．os）。（3）随着rhOPG浓度的增加,IL-6和TNF．仪含量逐渐降低,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论irhOPG可抑制聚乙烯颗粒刺激的人工关节置换术患者外周血1L-6和TNF—α．的表达,可有助于防治人工关节置换术后的无菌性关节松动。关键词：人工关节置换术;重组人骨保护素;假体松动;白细胞介素-6;肿瘤坏死N子     

一种新型免疫亲和层析介质的研究

以国产琼脂糖介质为原料,合成了含肼琼脂糖介质。抗体Fc段的糖基经氧化后,可与此种含肼琼脂糖介质偶联,制成高亲和率的免疫亲和层析介质。与溴化氰法相比,这种对抗体上的糖特异的偶联方法制成的免疫亲和层析介质,容量高、稳定性强。用这种含肼琼脂糖介质分别与肿瘤坏死因子和γ-干扰素等的抗体偶联,制成的免疫亲和层析介质可用于分离纯化相应的基因工程产物抗原。     

IFN-γ、IL-12及TNF-α在脊柱结核病人血清和病灶中的表达以及对疾病的影响

目的:检测IFN-γ、IL-12及TNF-α在脊柱结核病人血清和病灶中的表达水平,探讨血清和病灶中IFN-γ、IL-12及TNF-α的表达水平与脊柱结核的相关性。方法:2014年12月至2016年3月期间,纳入符合标准的脊柱结核病人46例为实验组,椎体骨折病人48例为对照组。应用ELISA检测两组人群血清中IFN-γ、IL-12、TNF-α的平均浓度;病灶标本免疫组化染色检测其IFN-γ、IL-12、TNF-α的平均光密度值。结果:实验组血清中IFN-γ,IL-12,TNF-α平均浓度分别为26.82±7.81 pg/mL,25.93±12.84pg/mL,68.13±16.24 pg/mL,对照组血清中平均浓度分别为46.89±7.81 pg/mL,49.45±22.38 pg/mL,26.65±10.11 pg/mL;实验组病灶中IFN-γ,IL-12,TNF-α平均光密度值分别为0.273±0.076,0.380±0.054,0.306±0.052,对照组病灶中平均光密度值分别为0.092±0.024,0.183±0.034,0.180±0.031。实验组与对照组血清及病灶中IFN-γ、IL-12及TNF-α的表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:脊柱结核病人的血清IFN-γ、IL-12浓度呈低表达,TNF-α浓度呈高表达;脊柱结核病人病灶中IFN-γ、IL-12及TNF-α表达增加;检测脊柱结核病人IFN-γ、IL-12及TNF-α血清水平含量能为其机体免疫力的状态、判断结核病情程度和进展及为临床诊断提供参考依据。     

膝关节炎患者关节置换术后细菌感染严重程度与IL-1β、TNF-α、IL-6水平的相关性

目的探讨膝关节炎患者关节置换术后细菌感染严重程度与IL-1β、TNF-α、IL-6水平的相关性。方法选取2016年8月至2018年8月于我院进行治疗的70例膝关节炎关节置换术后细菌感染患者作为试验组,参照Michel Lequesen推荐的膝关节炎严重性判断标准将膝关节炎关节置换术后细菌感染患者分为极严重组、非常严重组、严重组、中度组和轻度组。选取同期来我院体检中心进行体检的健康者50例为对照组。采用全自动生化免疫分析仪测定血清IL-1β、IL-6及TNF-α水平。结果试验组患者血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平均明显高于对照组(均P<0.05)。极严重组患者血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著高于非常严重组、严重组、中度组和轻度组(均P<0.05)。非常严重组患者血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著高于严重组、中度组和轻度组(均P<0.05)。严重组患者血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著高于中度组和轻度组(均P<0.05)。IL-1β、TNF-α、IL-6水平与膝关节炎关节置换术后细菌感染严重程度呈显著正相关(均P<0.05)。结论膝关节炎关节置换术后细菌感染患者血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平明显升高,并且病情越严重,IL-1β、TNF-α、IL-6水平越高。     

多烯磷脂酰胆碱对妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清IL-17，TNF-α，TGF-β水平的影响

目的:分析多烯磷脂酰胆碱对妊娠期肝内胆汁淤积症患者血清白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)水平的影响及临床疗效。方法:选择我院2014年6月~2016年6月收治的102例妊娠期肝内胆汁淤积症患者,按抽签法分为对照组与观察组,各51例。对照组行常规治疗,观察组在对照组治疗基本上加以多烯磷脂酰胆碱治疗,比较两组治疗前后IL-17、TNF-α、TGF-β、血管内皮生长因子(VEGF)、总胆汁酸(TBA),直接胆红素(DBi L)、总胆红素(TBi L)、谷草转移氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、瘙痒评分的变化、有效率及妊娠结局。结果:治疗后,观察组血清IL-17、TNF-α、TGF-β、VEGF、TBA、DBi L、TBi L、AST、ALT水平及瘙痒评分均显著低于对照组,有效率明显高于对照组,不良妊娠结局率显著低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:多烯磷脂酰胆碱可有效提高妊娠期肝内胆汁淤积症的临床疗效,降低血清IL-17、TNF-α、TGF-β水平,改善妊娠结局。     

奥曲肽治疗急性弥漫性腹膜炎术后患者的临床疗效及对血清内毒素和TNF-α、IL-6水平的影响

目的:探讨奥曲肽治疗急性弥漫性腹膜炎术后患者的临床疗效及对血清内毒素和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法:收集我院2014年5月~2016年5月收治的86例急性弥漫性腹膜炎患者,按照不同治疗方式分作对照组与研究组,每组43例。两组均采用手术治疗,对照组术后予以常规治疗,研究组基于对照组加以奥曲肽治疗,两组均持续治疗14天。比较两组临床疗效,治疗前后血清内毒素和TNF-α,IL-6水平的变化及不良反应发生情况。结果:治疗后,研究组总有效率显著高于对照组(P0.05);两组血清内毒素和TNF-α、IL-6水平均较治疗前显著下降,且研究组上述指标明显低于对照组(P0.05)。研究组不良反应发生率显著低于对照组(P0.05)。结论:奥曲肽可显著提高急性弥漫性腹膜炎术后患者的临床疗效,有效降低血清内毒素和IL-6、TNF-α水平,且安全性较高。     

过敏性紫癜患儿血清IL-21，TGF-β1，TNF-α及IgA1水平与紫癜性肾炎发生的相关性研究

目的:探讨过敏性紫癜患儿血清白细胞介素-21(IL-21)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白A1(IgA1)与紫癜性肾炎发生的相关性。方法:选择我院2015年11月~2016年5月收治的57例过敏性紫癜患儿,其中29例普通过敏性紫癜患儿,28例紫癜性肾炎,同期选择30例健康体检儿童作为对照组。观察并比较三组患儿血清IL-21,TGF-β1,TNF-α,IgA1,免疫球蛋白A(IgA),补体C3及C4水平。结果:过敏性紫癜肾炎组IL-21,TGF-β1,TNF-α,IgA1及IgA高于普通过敏性紫癜组,差异有统计学意义(P0.05);普通过敏性紫癜组IL-21,TGF-β1,TNF-α,IgA1及IgA高于对照组(P0.05);过敏性紫癜组IL-21,TGF-β1,TNF-α,IgA1及IgA高于对照组(P0.05)。三组患儿补体C3及C4比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:IL-21,TGF-β1,TNF-α及IgA1均参与过敏性紫癜及紫癜性肾炎的发生及发展过程。