不同倍性鱼的血细胞和精子DNA含量比较

我们以前的研究表明, 以红鲫 (2n=100) 为母本及湘江野鲤 (2n=100) 为父本的杂交后代的F1-F2 为二倍体 (2n= 100)。在二倍体 F2 个体中, 存在能分别产生二倍体卵子和二倍体精子的雌、雄个体, 二倍体卵子和二倍体精子结合, 形成了两性可育的四倍体鱼 (F3)。目前四倍体鲫鲤已连续繁殖了 12 代 (F3-F14), 形成了一个遗传性状稳定的四倍体鱼群体 (4n= 200) (Liu et al.,2001; 孙远东等, 2003)。雌性四倍体鲫鲤产生的二倍体卵子经紫外线照射的散鳞镜鲤精子激活后,无须染色体加倍处理, 可发育为全雌性二倍体雌核发育后代 (G1) (2n=10…     

滇池高背鲫和方正银鲫酯酶、乳酸脱氢酶同工酶的比较研究

本研究以方正银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)普通鲫(Carassius auratus)和滇池高背鲫(Carassius sp.)的各种组织器官为材料,进行酯酶(Esterase)和乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱的分析比较。结果表明:9种不同组织中酯酶同工酶谱带各不相同,有明显的组织特异性。滇池高背鲫的酯酶谱图有3种表型。方正银鲫和滇池高背鲫同一组织的LDH同工酶酶谱也有明显差异。等电聚焦凝胶电泳(T=7.5％,C=5％)的结果又表明这二种鱼的肝脏、脑、卵的酯酶同工酶酶谱及电泳扫描图亦有差异。这些结果揭示滇池高背鲫与方正银鲫至少在生化水平上已有明显的分化,很可能起源于不同的地区,由不同的祖先,独立演化而形成。滇池高背鲫与云南普通鲫的LDH酶谱较为接近,这说明滇池高背鲫最可能起源于云南本地的普通鲫。     

三个鲫品系DNA含量的比较研究

采用流式细胞术 (FCM)对红鲫、彭泽鲫、异育银鲫进行红血球DNA含量的检测分析比较 ,以鉴定它们的倍性。结果显示 ,红鲫红血球的DNA含量是 3 0pg ,彭泽鲫是 4 7pg ,异育银鲫是 4 8pg。显而易见 ,彭泽鲫的DNA含量是二倍体红鲫的 1 57倍 ,异育银鲫的DNA含量是红鲫的 1 6倍。采用肾细胞直接制作染色体的方法进行红鲫、彭泽鲫、异育银鲫的染色体倍性鉴定 ,结果红鲫的染色体数目是 10 0 ,为二倍体 (2n =10 0 ) ,彭泽鲫的染色体数目是 162 ,为三倍体 (3n =162 ) ,异育银鲫的染色体数目是 156— 162 ,为三倍体 (3n =156— 162 )。研究证明 :不同品系鲫的DNA含量高低与染色体的倍性有显著的正相关性     

滇池高背鲫和方正银鲫酯酶和乳酸脱氢酶的比较研究

本研究以方正银鲫酯酶(Carassius auratus gibelio Bloch)普通鲫(Carassius auratus)和滇池高背鲫(Carassius sp.)的各种组织器官为材料, 进行酯酶(Esterase)和乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱的分析比较.结果表明:9种不同组织中酯酶同工酶谱带各不相同,有明显的组织特异性.滇池高背鲫的酯酶谱图有3种表型.正方银鲫和滇池高悲鲫同一组织的LDH同工酶谱也有明显差异. 等电聚焦凝胶电泳(T=7.5%,C=5%)的结果又表明这二种鱼的肝脏, 脑, 卵的酯酶同工酶谱及电泳扫描图有差异. 这些结果揭示滇池高背鲫与方正银鲫至少在生化水平上已有明显的分化, 很可能起源于不同的地区,由不同的祖先,独立演化而形成. 滇池高背鲫与云南普通鲫的LDH酶谱较为接近,这说明滇池高背鲫最可能起源于云南本地的普通鲫.     

不同倍性鱼垂体细胞和超微结构比较

对繁殖季节和繁殖季节后的二倍体红鲫(Carassius auratus red var.)、三倍体湘云鲫以及四倍体鲫鲤脑垂体细胞的显微和超微结构以及组织化学特性进行了比较研究. 结果表明, 3种鱼脑垂体中都存在6种不同类型分泌细胞, 但是不同倍性鱼的垂体细胞大小存在明显差异, 就同一类细胞体积而言, 四倍体鱼垂体细胞大于三倍体垂体细胞, 三倍体垂体细胞大于二倍体垂体细胞. 在繁殖季节, 四倍体鲫鲤中腺垂体的GTH细胞所占比例最大, 其次是二倍体红鲫, 最少的是三倍体湘云鲫, 该现象与四倍体鲫鲤的性腺发育提前、三倍体湘云鲫不育有关联; 另一方面, 三倍体湘云鲫中腺垂体中STH细胞所占比例最高, 其次是二倍体, 最少的是四倍体鲫鲤, 这与三倍体湘云鲫生长速度最快、四倍体鲫鲤生长速度相对缓慢有关. 另外, 三倍体湘云鲫中腺垂体GTH细胞中的分泌颗粒和分泌小球在繁殖季节没有大量排出, 而四倍体鲫鲤和二倍体红鲫明显有大量排出, 说明三倍体湘云鲫的不育性与GTH中的激素不排出有关. 以上结果说明, 不同倍性鱼类在垂体结构方面表现出的差异与它们的生长速度、性腺发育等方面具有关联性.     

17种金线Ba核DNA含量及倍性的研究

采用血涂自、Feulgen染色和显微分光光度技术,测定了金线Ba属（Sinocyclocheilus）17个种的核DNA含量。结果显示,除侧条金线Ba(S.lateristritus）中采自云南沾益炎方山那边的样本之2C值为7.79 pg外,其余的核DNA 2C值都集中分布在4.19-4.86pg范围,大体与其近缘四倍体种2C值相同或相近,是其近缘二倍体种2C值的大约2倍 此我们推断,这17种金线Ba很有都是四倍体,个别种还含有八倍体的类型,金线Ba属可能是整属的四倍体起源。     

17种金线鲃核DNA含量及倍性的研究

采用血涂片、Feulgen染色和显微分光光度技术 ,测定了金线属 (Sinocyclocheilus) 17个种的核DNA含量。结果显示 ,除侧条金线 (S .lateristritus)中采自云南沾益炎方山那边的样本之 2C值为 7 79pg外 ,其余的核DNA 2C值都集中分布在 4 19～ 4 86pg范围 ,大体与其近缘四倍体种 2C值相同或相近 ,是其近缘二倍体种 2C值的大约 2倍。据此我们推断 ,这 17种金线很可能都是四倍体 ,个别种还含有八倍体的类型 ,金线属可能是整属的四倍体起源。     

雌核发育银鲫和两性生殖彩鲫精子蛋白组份的比较研究

对雌核发育银鲫和两性融合彩鲫精子蛋白组份进行了比较分析。通过分级抽提得到精子的不同组份精浆、精头的膜、鞭毛和脱膜精头等,然后经不同的凝胶电泳系统,比较分析了银鲫精子和其两性亲缘种彩鲫精子相应组份可溶性蛋白成份的差异。研究表明,经分级抽提的银鲫精子和彩鲫精子的各个组份都含有其特定的蛋白谱带。精浆蛋白在两种鱼之间和两种鱼的不同个体之间都存在一定差异。精头膜、鞭毛和脱膜精头的可溶性蛋白在同种鱼不同个体间高度一致,但在两种鱼之间表现出差异。两种鱼精头膜的可溶性蛋白在SDS－PAGE电泳图谱上基本一致,而在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上则具有各自的特征性谱带。鞭毛可溶性蛋白的SDS－PAGE分析在雌核发育银鲫中揭示出一条特异的蛋白带。脱膜精头的可溶性蛋白在SDS－PAGE电泳图谱上差异明显,存在几条特征性蛋白带,并经Acid-Urea PAGE系统分析,证实这些特征性蛋白为碱性蛋白。这些发现为进一步鉴定雌核发育银鲫雄鱼精子的特异性蛋白和揭示其分子机制打下了基础。     

人工复合三倍体锂与亲本相对DNA含量及倍性分析

本文通过显微荧光光度术了人工复合三倍体锂的红细胞及亲本红鲤,红鲫与散鳞镜鲤个体的红细胞和精子的相对ＤＮＡ含量。结果表明;每一种亲本的精子ＤＮＡ含量是其红细胞ＤＮＡ含量的二分之一,人工复合三倍体鲤ＤＮＡ含量等于三个亲本精子ＤＮＡ含量之和,为三个亲本血液红细胞ＤＮＡ含量之和和二分之一。     

洞庭青鲫与其他六个鲫鱼品系线粒体DNA控制区的比较分析

运用PCR扩增、克隆、测序等技术,在获得洞庭青鲫和彭泽鲫线粒体DNA控制区全序列的基础上,对洞庭青鲫、彭泽鲫、普通鲫、红鲫、白鲫、A系和D系银鲫等7个鲫鱼品系线粒体DNA控制区的碱基组成、变异情况、序列结构和系统进化进行了比较分析。结果表明,7个鲫鱼品系线粒体DNA控制区碱基的平均组成为A:(32.7±0.16)%,C:(20.4±0.37)%,G:(14.1±0.08)%,T:(32.8±0.36)%,序列分歧率为0—5.7%,其中红鲫和白鲫的分歧率最大(5.7%),彭泽鲫、A系和D系银鲫之间最小(0)。洞庭青鲫与白鲫的分歧率为5.6%,与彭泽鲫、A系和D系银鲫为2.2%,与红鲫和普通鲫分别为0.8%和0.7%。对比哺乳动物线粒体DNA控制区结构,并参照其他鱼类序列,将7个鲫鱼品系的控制区分为终止序列区、中央保守区和保守序列区三个区域。同时识别了7个鲫鱼品系中一系列保守序列,并给出了它们的一般形式。序列差异和系统进化分析表明,在7个鲫鱼品系中,洞庭青鲫与普通鲫和红鲫的亲缘关系最近,与彭泽鲫、A系和D系银鲫亲缘关系次之,与白鲫的亲缘关系最远,而彭泽鲫、A系和D系银鲫三者在线粒体DNA控制区的相似性和分歧率上则表现为是同一个鲫鱼品系。       

鲫鱼(Carassius auratus)外周血细胞显微和亚显微结构的观察

本文记载了用光镜和电镜观察鲫鱼外周血细胞所得的结果。 用光镜观察以Wright氏染液染色的血涂片,可区分出下列各种类型的血细胞:红血细胞,淋巴细胞,血栓细胞,单核细胞,中性、嗜酸和嗜碱粒细胞。此外,在外周血液中还可以看到少量未成熟的红血细胞。 在外周血液中,嗜酸和嗜碱粒细胞的数量极少。但在头肾和脾等造血组织中这类细胞的数量较多。 鲫鱼外周血液中各种血细胞的超微结构,基本上和人类以及其他鱼类相应血细胞的超微结构相似。     

雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤卵母细胞成熟的细胞学比较研究

对雌核发育银鲫和两性融合发育红鲤的卵母细胞成熟过程,进行了详细的细胞学比较研究。在银鲫卵母细胞成熟过程中,绝大部分卵母细胞的核物质,在胚泡破裂(GVBD)后的第一次成熟分裂时期,出现明显的不同于红鲤卵母细胞核的行为,其染色体逐渐清晰地分为三群,这三群染色体的发育既彼此独立又相互联系,最终形成一首尾相接的三极纺锤体。随后,三极纺锤体扭转、重叠、合并成为一个正常的中期纺锤体。但极少数银鲫卵母细胞也出现了类似于红鲤卵母细胞的成熟单星光,并进而发育成两极纺锤体,形态类似红鲤第一次成熟分裂中期纺锤体。在银鲫上述两类卵母细胞的成熟过程中均未观察到“第一极体”外排的现象。由此,我们确认,银鲫卵是通过第一次成熟分裂异常,卵核染色体不减数来维持染色体倍性的;并且,根据上述特殊现象,我们对银鲫卵子第一次成熟分裂异常的机制进行了初步分析。       

雌核发育银鲫的受精生物学研究——天然雌核发育银鲫繁殖方式的讨论

本文研究了同源雌核发育银鲫精子在4种类型的雌核发育银鲫卵中的发育特征。初步揭示了天然雌核发育银鲫根据精子的来源不同而分别具有二种不同的繁殖方式,对其在维持雌核发育银鲫种群生存,促使克隆分化等方面的独特的生物学意义进行了讨论。     

鲫鱼后鳃体结构与功能的研究

本文对鲫鱼后鳃体的形态结构及其功能进行了初步研究。结果表明,鲫鱼后鳃体是一种内分泌腺体。腺体由滤泡组成,滤泡上皮包括二种颗粒细胞(亮细胞和暗细胞)和一种支持细胞。对不同性腺期的鲫鱼后鳃体的观察表明,后鳃体滤泡细胞随性腺发育增加高度,滤泡增生,腺体体积增大。而性腺成熟后期,后鳃体滤泡上皮有崩溃现象。揭示后鳃体可能与性腺发育有关。用免疫组织化学的非标记过氧化物酶技术对鲫鱼后鳃体进行激素降钙素的定性定位研究,观察到滤泡上皮的颗粒细胞发生阳性反应,由此证明颗粒细胞可分泌降钙素。     

四类不同倍性鲫鱼在胚胎发育期间同工酶基因表达的比较分析

用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳比较分析了单倍体、二倍体、三倍体和复合四倍体4类不同倍性鲫鱼以及单倍体和二倍体鲤鱼在胚胎发育时期4种同工酶(EST,LDH,MDH,SOD)酶谱。结果表明,单倍体鲫鱼和单倍体鲤鱼胚胎与各自的二倍体胚胎相比,同工酶酶谱看不出差异;天然三倍体银鲫胚胎的MDH和SOD同工酶酶谱与二倍体鲫相似,但EST和LDH同工酶比二倍体增多了酶带,有的酶带如EST5和EST6还可在鲤鱼胚胎中找到相应的表达产物,提供了天然雌核发育三倍体银鲫杂交起源的证据;复合四倍体由于含有鲤鱼的一个外来基因组,其胚胎的基因表达有些与杂种类似,在所分析的4种同工酶酶谱中,都可观察到来自鲤鱼基因的影响。此外,在由源于不同复合四倍体个体的卵子发育形成的胚胎间,还观察到同工酶基因表达的异质性。     

细菌性败血症引起鲫凝血障碍的研究

以嗜水气单胞菌感染体重７０ｇ左右的鲫并检测了感染鱼和对照鱼的血液学及播散性血管内凝血判定指标等参数。结果表明细菌性败血症病鱼严重贫血,存在明显的凝血障碍,在疾病发展过程中存在播散性血管内凝血现象。这一些象导致了病鱼全身性出血,并在疾病的病理生理过程中起了重要作用。     

野生鲫和五个金鱼品种的判别分析和聚类分析

对野生鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ）和五个金鱼品种（Ｃａｒａｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｖａｒ．）的亲缘关系进行了比较研究。（１）两组判别分析表明,以１７个形态变异性状的指标衡量野生鲫鱼和金鱼以及金鱼各品种之间的差异,说明金鱼的种下分化是明显的（Ｆ〉〉Ｆ０．０１）。（２）对６个品种（包括鲫鱼）各２０尾鱼（计１２０个个体）进行１７个指标的聚类分析,结果大部分个体（占各品种的５０￣１００％）