革兰阴性杆菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药分析

目的检测引起医院感染的革兰阴性杆菌携带产ESBLs和去阻遏AmpC酶状况,探讨各菌对临床常用抗生素的主要耐药机制及耐药性,为临床制定合理使用抗生素策略提供依据。方法采用全自动微生物分析仪（VITEK-32）做细菌鉴定和药敏试验,用纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,用三维法检测高水平表达染色体编码的AmpC酶。结果158株革兰阴性杆菌ESBLs检出率为26．6％,主要菌为大肠埃希菌（45．2％）、肺炎克雷伯菌（42．9％）、阴沟肠杆菌（11．9％）。AmpC酶检出率为10．1％,主要为鲍曼不动杆菌（43．8％）、阴沟肠杆菌（25％）;上述产酶细菌均对青霉素和一、二、三代头孢菌素、磺胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类耐药,对亚胺培南敏感。结论革兰阴性杆菌耐药机制主要是产超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶,这些产酶菌株均出现多重耐药。     

铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌超超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：了解多重耐药的铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌的主要耐药机制超超广谱β-内酰胺酶即超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和高产AmpC酶的产生情况。方法：建立一种简易快速地检测超超广谱β-内酰胺酶的K-B药敏试验法：首先选择5种药敏纸片：IMP、FOX、FEP、CTX、CD03,依据纸片的抑菌环直径综合判断分析。怀疑产AmpC酶的菌株,用OBs抑制试验进一步证实。结果：使用该法分别检测产AmpC酶、ESBLs的4株标准株和多重耐药的70株铜绿假单胞菌和30株阴沟肠杆菌,结果各种标准株检测无误。70株铜绿假单胞菌中产AmpC酶的有40株,产ESBLs的有18株,同时产AmpC酶和ESBLs的是5株,还有9株细菌两类酶检测均阴性,原因待分析。同时利用此试验法检测铜绿假单胞菌的诱导阳性率为42／70(60％)和阴沟肠杆菌的诱导阳性率为16／30(53．3％)。结论：此法简易快速,能较好地鉴别产ESBLs或和AmpC酶株,并适用于临床常规检验。     

产科感染革兰阴性菌株产超β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 了解引起产科感染革兰阴性杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs）及耐药情况。方法采用ESBLs确认试验检测ESBLs,头孢西丁三维试验检测AmpC和K-B进行药敏试验。结果 革兰阴性杆菌ESBLs、AmpC酶总检出率分别为32．0％、33．6％,单产ESBLs、单产AmpC、同产ESBLs＋高产AmpC酶和ESBLs＋诱导AmpC酶菌株依次占11．9％、13．5％、14．1％和6．03％．总分离株对亚胺培南、头孢哌酮-他唑巴坦的耐药率分别为5．28％、6．54％,其次为头孢吡肟,为25．0％。单产酶株较非产酶株,双产酶株较单产酶株具有较高的耐药率。结论 产酶是产科感染革兰阴性菌株多重耐药的主要原因之一,亚胺培南和头孢哌酮-他唑巴坦、头孢吡肟（FEP）对其具有良好的抗菌活性。     

小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌耐药性和基因型研究

目的探讨临海地区小儿呼吸道感染肺炎克雷伯杆菌产超β-内酰胺酶（ESBLs和AmpC酶）的耐药性及耐药基因型分布情况。方法采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌,按CLSI推荐的确证试验检测ESBLs和K-B纸片法测定药敏结果;采用头孢西丁纸片扩散法筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因,并对产物进行测序分析基因型。结果113株肺炎克雷伯杆菌ESBLs和AmpC酶总检测率分别为29．20％和18．58％,其中单产ESBLs、单产AmpC酶和同产AmpC酶＋ESBLs检出率分别为23．01％、12．39％和6．19％;AmpC酶阳性菌株的耐药基因型：16株为DHA-1型,5株为ACT-1型。药敏试验：所分离的肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南全部敏感,对喹诺酮类耐药率很低,对大多β-内酰胺类抗生素耐药率较高,并且产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产ES-BLS和AmpC酶菌株中更为严重。结论临海地区小儿呼吸道分离的肺炎克雷伯杆菌产ESBLs和AmpC酶检出率较高;AmpC酶以DHA-1基因型流行为主,产酶株呈现出高度多重耐药性。     

608份胆汁标本中分离细菌菌谱及其药敏结果分析

了解胆系感染常见的病原菌及其药敏情况,为抗菌治疗提供依据。采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2及API系统进行细菌鉴定,药敏试验采用K—B纸片法,应用WHONET5．4对药敏结果进行分析。608份胆汁标本中共分离细菌和真菌431株,其中革兰阴性杆菌320株（占74．2％）、革兰阳性球菌91株（占21．1％）、真菌20株（占4．6％）;排在前3位的菌株分别是大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌。胆系感染以革兰阴性杆菌为主,尤以肠杆菌科细菌为主,上述细菌对碳青霉烯类、酶抑制剂类以及三代头孢菌素的敏感率均较高。     

EDTA纸片法和三维试验检测阴沟肠杆菌AmpC酶的比较

目的比较EDTA纸片法及头孢西丁三维试验检测阴沟肠杆菌AmpC酶的符合程度。方法收集近几年阴沟肠杆菌株97株临床菌株,应用EDTA纸片法和三维试验分别检测97株阴沟肠杆菌的AmpC酶,并进行比较。结果 97株受检菌中,75株EDTA纸片法和三维试验均阴性,20株两种方法均阳性,2株菌EDTA纸片法阴性,而三维试验阳性。两种检测方法阳性符合率为90.9%,阴性符合率为100%,总符合率为97.9%。结论 ED-TA纸片法检测阴沟肠杆菌与三维试验的符合率高,且操作简便,较适合于临床实验室应用。     

第3代头孢耐药的阴沟肠杆菌AmpC酶及ESBLs的表型测定

目的检测3代头孢耐药的阴沟肠杆菌,了解阴沟肠杆菌对3代头孢耐药的机制,以利于耐药性的控制与指导临床用药。方法收集2002年1月-2004年6月浙江省人民医院,来自各种标本对3代头孢耐药的阴沟肠杆菌165株,用三维试验检测ESBLs与AmpC酶。结果165株阴沟肠杆菌中,产ESBLs120株,占72．7％,产AmpC酶有40株,占24．2％,同时产2种酶的有1株,占0．6％,2种酶均不产的有4株,占2．5％。体外抗生素敏感试验显示,亚胺培南、头孢替坦、头孢吡肟、环丙沙星的耐药率分别为1．2％、66．0％、92．1％和92．1％,氨苄西林、头孢唑啉的耐药率达到100％。结论该院对3代头孢耐药的阴沟肠杆菌主要产ESBLs,药物敏感试验表明亚胺培南敏感率最高（97．6％）,头孢替坦次之（27．3％）,而对其它抗菌药物敏感率较低。     

铜绿假单胞菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解铜绿假单胞菌临床分离株ESBLs和AmpC酶的产生及对常用抗菌药物敏感性,指导临床合理选用抗生素。方法常规培养分离细菌,采用VITEK-60型全自动细菌鉴定仪鉴定细菌;按NCCLS推荐的双纸片确证法和K-B纸片扩散法检测ESBLs和药敏试验;采用头孢西丁纸片扩散法筛选疑产AmpC酶阳性菌株,确诊采用三维试验。结果铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶总检出率分别为40.8%和38.2%,其中,单产AmpC酶、单产ESBLs和同产AmpC酶+ESBLs检出率分别为19.7%、26.3%和14.5%。药敏试验显示:产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同产AmpC酶和ESBLs菌株中更为严重。结论台州地区临床分离的铜绿假单胞菌产ESBLs和AmpC酶菌株检出率较高。产AmpC酶和ESBLs的菌株呈高度耐药,临床上对产酶菌株引起感染的治疗应根据细菌药敏试验结果,合理选择有效的抗菌药物联合治疗,减少产酶菌株的产生和流行。     

CLSI三代头孢菌素新旧折点对判定肺炎克雷伯茵药物敏感性及产ESBLs菌株分布的影响

目的了解CLSI2010（S20）及2009（S19）头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）新旧折点变化对本地区肺炎克雷伯菌药物敏感性及产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株分布的影响。方法收集安徽医科大学第一附属医院临床分离的50株肺炎克雷伯菌;纸片扩散法测定菌株对CTX及CAZ的敏感性,CLSI表型确证试验确定产ESBLs菌株,改良三维试验检测CTX和／或CAZ耐药、非产ESBLs菌株的产酶情况。结果在S19折点下,CTX和CAZ耐药率分别为54．0％、30．0％;在S20折点下,耐药率分别为68．0％、42．0％。产ESBLs菌株总检出率为64．0％（32／50）。旧折点下,分别有81．3％、43．8％的产ESBLs菌株分布在CTX和CAZ耐药菌株中;新折点下,升高至100％、62．5％。2株对CTX和／CAZ耐药、非产ESBL菌株中,1株同时产ESBLs和AmpC酶,1株仅产AmpC酶。结论根据S20,肺炎克雷伯菌对CTX和CAZ的耐药率较S19均有所增高;并提高了耐药表型与产ESBLs菌株的一致性。产AmpC酶可影响表型确证试验对产ESBLs菌株的检出。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中产AmpC酶的情况及其耐药性。方法收集产ESBLs肺炎克雷伯菌临床株126株,应用Tris-EDTA纸片法检测AmpC酶。用琼脂稀释法测定菌株对11种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。结果126株ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌中12株检出AmpC酶,检出率为9.5%。AmpC阳性菌株对头孢西丁、头孢他啶、氨曲南、氨苄西林/舒巴坦和阿莫西林/克拉维酸的耐药率达100%,对阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为83.3%和33.3%,其中头孢西丁、头孢他啶、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸、阿米卡星和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率显著高于AmpC阴性株（P〈0.05）。结论深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌中检出AmpC酶阳性株,其耐药性强于单产ESBLs菌株。     

阴沟肠杆菌产AmpC酶菌和非产酶菌的耐药性研究

目的：探讨阴沟肠杆菌分布特征及产AmpC酶菌和非AmpC酶菌的耐药性。方法：对临床分离的158株阴沟肠杆菌分布科室、感染部位及对16种抗生素耐药性进行分析,并通过酶粗提物头孢西丁三维试验结合PCR法检测AmpC酶。结果：标本来源主要为患者的痰液、尿液、创口分泌物等,科室以重症监护室为多,感染部位以呼吸道为主,耐药性较高的抗生素为头孢西丁、头孢噻肟、头孢曲松等,158株阴沟肠杆菌中产AmpC酶菌株共33株,产AmpC酶阳性率占总菌株数20．9％,产AmpC酶菌株对各种抗生素的耐药率比不产AmpC酶的明显增高。结论：阴沟肠杆菌的耐药与产AmpC酶有关,治疗首选亚胺培南。     

头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌AmpC基因和ESBLs检测及耐药性分析

目的了解深圳地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌头孢菌素酶(AmpC酶)基因型分布、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特点。方法收集深圳地区三家大型综合医院临床标本分离对头孢西丁耐药的肺炎克雷伯菌73株。用碱裂解法提取菌株的质粒,采用多重PCR扩增AmpC基因,应用DNA测序确定其基因型。并对所有菌株进行ESBLs表型确证试验;用K-B法对其进行药物敏感试验。结果 48株(65.8%)AmpC基因扩增阳性,经DNA测序显示,其中46株为DHA-1型,1株为CMY-2型,1株同时产DHA-1和CMY-2型;73株肺炎克雷伯菌中49株ESBLs阳性,其中36株AmpC基因和ESBLs均为阳性。AmpC和(或)ESBLs阳性菌株对多数药物的耐药率高于AmpC和ESBLs均阴性者。结论本地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶检出率高,基因型主要为DHA-1,同时产AmpC酶和ESBLs菌株较常见。     

革兰阴性杆菌产AmpC酶诱因分析及监测

目的:探讨革兰阴性杆茵AmpC酶的诱导与三代头孢用药时间长短的关系,调查高产AmpC酶菌株在我市医院及不同病室的分布,指导临床用药。方法:采用头孢西丁初筛、FOX三维确证试验检测革兰阴性杆菌产AmpC酶率;以稀释渐进突变法对耐药突变株进行筛选;并回顾性调查比较临床高产AmpC酶和非高产AmpC酶患者用药的时间。结果:革兰阴性杆菌AmpC酶总检出率为13.9%,其中绿脓假单胞菌为43.6%,摩根氏菌为25.0%,阴沟肠杆菌为20.9%,弗氏枸橼酸杆菌为14.2%,粘质沙雷菌为13.3%,奇异变形杆菌为7.7%,鲍曼不动杆菌为10.1%,产气肠杆菌为6.9%,肺炎克雷伯菌为5.5%,大肠艾希菌为1.9%;头孢他啶(CAZ)和头孢噻肟(CTX)对持续高产AmpC酶突变株的选择能力最强,头孢吡肟(FEP)选择性较弱,亚胺培南(IPM)无选择性;临床高产AmpC酶患者三代头孢平均用药时间为8.62±1.63d(3-18d),非高产AmpC酶患者平均用药时间4.91 1.53d(1-11d),p<0.05,两者差异有统计学意义。结论:不同抗生素诱导产生高产AmpC酶的突变株存在种属差异性,且诱导能力的变化存在时空变化。     

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶基因检测及耐药性分析

目的 了解下呼吸道感染肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和质粒AmpC酶的产生情况及耐药性,研究AmpC酶的基因型别.方法 用纸片扩散确证法检测ESBLs;用酶提取三维试验检测AmpC酶,聚合酶链反应（PCR）扩增AmpC酶的基因,DNA序列测定检测AmpC酶的基因型;K-B法检测细菌耐药性.结果 58株下呼吸道感染肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性21株,AmpC酶阳性5株,其中3株ESBLs和AmpC酶均阳性,5株AmpC酶阳性菌中,4株扩增出DHA基因,经测序均为DHA-1,1株扩增出MIR基因.产酶菌株的耐药性明显高于非产酶株.结论 肺炎克雷伯菌中ESBL＊s和AmpC酶均有较高的检出率,AmpC酶以DHA基因型为主.产ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因.     

肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布检测与耐药特性的相关性研究

目的研究肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的基因分布与耐药特性的相关性。方法收集2008年1月至2013年12月临床分离的100株肺炎克雷伯菌,采用K-B法进行体外药敏试验,采用ESBLs确证试验和AmpC三维试验确定产酶表型,采用聚合酶链式反应进行ESBLs酶及AmpC酶基因的检测。结果60株检测出ESBLs酶,其中60株内检出ESBLs基因阳性56株,主要为SHV型基因;检出AmpC酶的检测6株,主要为DHA型基因。其中两种基因同时阳性者1株。除哌拉西林/他唑巴坦,单产AmpC酶、ESBLs及两种基因同时阳性菌（SSBLs）对其他17种常用抗生素的耐药率均高于不产酶菌株。结论医院肺炎克雷伯菌的主要耐药机制为ESBLs酶及AmpC酶基因。ESBLs耐药基因检出率高,ESBLs阳性株耐药率明显高于ESBLs基因阴性株。     

产AmpC酶阴沟肠杆菌的基因分析及其耐药性

探讨昆明地区阴沟肠杆菌的耐药性及与结构基因ampC和调节基因ampD的相关性。通过K-B法检测阴沟肠杆菌的药敏情况,头孢西丁三维试验检测AmpC酶,PCR法扩增ampC和ampD基因。结果显示74株阴沟肠杆菌经头孢西丁三维试验检测,产AmpC酶的有17株,检出率为22.3%,而且产酶菌株抗生素敏感率低于非产酶菌株。ampC基因扩增阳性率为89.2%(66/74);64株ampD基因阳性率为86.5%(64/74)。实验证实昆明地区产酶阴沟肠杆菌耐药状况严重,与结构基因ampC和调节基因ampD密切相关。     

184株铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的：研究铜绿假单胞菌的耐药性,以指导临床合理用药。方法：对184株铜绿假单胞菌选用16种常用抗生素进行药敏试验。药敏试验采用WHO推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法按NCCLS标准进行,同时对184株铜 绿假单胞菌进行诱导型β－内酰胺酶的检测。结果：184株铜绿假单胞菌中检出诱导酶115株,占62．2％,所有菌株无一例对全部抗生素敏感。亚胺培南、氨曲南、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、诺氟沙星、哌拉西林、头孢哌酮、头孢他啶对铜绿假单胞菌的抗菌活性较强,敏感率为76．1％－92．9％,而三代头孢中的头孢噻肟和头孢曲椴的敏感率仅为8．7％和12．0％。诱导酶株组对三代头孢中的头孢哌酮、头孢他啶的耐药率比非产酶株组低、尤其头孢他淀的耐药率比产酶株组明显降低,仅为3．4％;亚胺培南和派拉西林的耐药率也比非产酶株组低,耐药率分别为6．5％和5．1％。结论：对于产诱导型β－内酰胺酶的铜绿假单胞菌株应选用亚胺培南、氟喹诺酮类及氨基糖甙类抗生素,常规的体外药敏试验不能完全正确的反映细菌的耐药性。通过诱导酶的检测,可以较好地弥补敏试验的不足。     

产妇会阴切口感染肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶基因型检测与分析

摘要：目的 回顾性分析我院产妇会阴切口感染分离的肺炎克雷伯菌质粒介导AmpC酶基因型。方法 采用K-B纸片扩散法对临床分离的肺炎克雷伯菌进行AmpC酶初筛;头孢西丁三维试验确证产AmpC酶;采用UNIQ-10柱式质粒小量抽提试剂盒提取细菌质粒;采用聚合酶链反应（PCR）和DNA测序检测分析质粒AmpC酶基因型别。结果 三维试验检出15株产AmpC酶菌株,经PCR扩增15株菌株均在405 bp处出现阳性条带,经DNA测序证实为DHA-1型质粒AmpC酶。结论 我院存在质粒介导AmpC酶流行菌株,质粒AmpC酶主要以DHA-1型为主。     

革兰阴性杆菌产AmpC酶的初筛检测及意义

目的：探讨革兰阴性杆菌产AmpC酶的初筛检测及意义，并了解本院革兰阴性杆菌产生Am-pC酶的情况。方法：实验用头孢西丁三相试验进行检测。结果：从136株对第三代头孢菌素等多种抗生素耐药的革兰阴性杆菌中共检出46株产AmpC酶，检出率为33.8%，主要为肠杆菌属、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。结论：头孢西丁三相试验操作简便，可作为革兰阴性杆菌产AmpC酶的初筛检测，可为临床合理用药提供依据。     

长沙某医院产质粒AmpC酶型肺炎克雷伯菌的多重PCR检测与分析

为了了解湖南长沙某医院临床分离的肺炎克雷伯菌中质粒介导AmpC β-内酰胺酶的产生情况及其基因型,收集了该医院2008年3月至2010年10月临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌104株,用头孢西丁纸片扩散法对这些菌株进行表型初筛,用多重PCR确定ampC耐药基因型;结果发现其中有19株对头孢西丁纸片不敏感,疑为产AmpC酶菌株;再经多重PCR扩增,有12株菌分别在约400 bp（11株）和约350 bp（1株）出现了阳性条带,特异性PCR证明此12株菌分别携带了DHA型（11株）和ACC型（1株）ampC耐药基因;产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率为11.5%（12/104）。该医院产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率较高,应对其检测与监测给予足够重视,以指导临床合理选用抗菌药物。