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大豆胚轴信使核糖核酸(mRNA)的分离 总被引:1,自引:0,他引:1
信使核糖核酸(以下简称mRNA)是在细胞质中指导蛋白质合成的遗传物质。已有不少动物组织mRNA分离纯化,植物材料中的mRNA报导不多。我们用Oligo(dT)—纤维素柱层析法分离、纯化了大豆(Glycine max)胚轴的mRNA。引言 mRNA是从细胞核内DNA处接受遗传信息,携至细胞质中供作蛋白质生物合成的模板。但确定它存在的历史却起源于一个假说。那是1961年Jacob及Monod根据大肠杆菌乳糖操纵子控制某些诱导酶形成过程的现象而提出的学说。这个学说很快就由Brenner、Jacob和Meselson在研究感染 相似文献
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本文建立了一种快速分离和纯化mRNA的新方法.为避免RT-PCR实验中mRNA降解问题,我们使用磁性纳米粒子,快速儋有效的从培养的细胞、组织以及脐带血中分离出带有ploy(A) 结尾的mRNA用于实验.研究结果表明,磁性纳米粒子经过修饰连接Oligo(dT)16可直接分离mRNA,其方法操作简单,快捷、省时,可有效地用于基因表达的研究. 相似文献
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神经节苷脂纯化方法的改进 总被引:3,自引:0,他引:3
神经节苷脂(ganglioside,Gls)的分离与纯化是研究组织细胞Gls组成、含量及代谢的基本手段。由于Gls在神经以外组织中含量甚微,而且因组织、细胞的不同,影响Gls纯化的因素也不同.在实验过程中常常由于方法选择不当致使实验失敗.本文介绍一种改进的方法,它操作简单,适用于大鼠多种组织,因 相似文献
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肝癌亚细胞结构的蛋白质组分比较分析 总被引:2,自引:0,他引:2
运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,分离纯化亚细胞结构,可以提高低丰度蛋白质在双向电泳中检出的数量。通过对比分析肝癌细胞与正常肝细胞线粒体、细胞核蛋白质组的差异表达情况,为肝癌发病机理的研究提供更多、更有价值的信息。以体外培养的人体肝癌细胞QGY-7703与正常肝细胞LO2为研究模型,通过超离心的方法分离细胞的线粒体和细胞核。双向电泳分离线粒体和细胞核的蛋白质,图像分析筛选差异表达蛋白斑点,MALDI-TOF-MS鉴定蛋白质。从线粒体、细胞核的蛋白质电泳图谱中筛选出54个候选差异表达的蛋白质斑点,质谱鉴定出22种差异表达蛋白质,其中17种在肝癌细胞中表达上调,5种在肝癌细胞中表达下调。筛选出的差异表达蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、细胞骨架与核骨架的改变、mRNA的加工成熟及凋亡调控等许多方面,表明癌变细胞的组织结构和代谢状态都发生了很大的变化。 相似文献
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胶片吸附的激光显微切割技术及其在蛋白质组研究中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
组织显微切割在特定细胞亚群的比较研究中起着重要作用.新近发展的胶片吸附激光显微切割技术能从复杂的生物组织中快速准确地分离纯化出特定细胞亚群.在这项技术中,透明的乙烯乙酸乙烯基酯热塑性胶片覆盖于病理组织切片表面,CO2激光束特异性作用于目的细胞群表面的胶片,胶片对细胞较强的吸附作用使得选择性自动移取目的细胞群成为可能.目前,这项技术已在蛋白质组分析中获得成功应用,并有望对其产生较深远的影响. 相似文献
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特定蛋白质的信息核糖核酸(mRNA)的提纯,是分子生物学的重要研究课题。纯化的mRNA除用来作结构分析外,是一个非常重要的工具,经过同位素标记后,可以进行核酸的分子杂交(包括原位杂交)以探测细胞基因的组成和定位,也可以通过反转录酶合成互补性脱氧核糖核酸(。DNA)用以检测基因转录产物,研究基因表达的调控;进一步还可应用于遗传工程的研究。目前已有十种左右的mRNA得到提纯(佐野浩,1977)。本文报道了我们依据mRNA分子量大小和3‘末端聚腺漂岭核昔酸的结构特性,用亲和层析和制备型凝胶电泳,与ROsen等(1975)提纯卵清蛋白mRNA的方法近似,从小鼠肝中提纯白蛋白mRNA,为我们进一步研究肝癌细胞白蛋白基因表达失常提供必要条件。 相似文献
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从大豆的叶片、种子、茎和根制备了来降解的、具有生物活性的PoJy(A)+mRNA。建立了高效翻译的麦胚无细胞系统。通过对不同组织mRNA翻译产物双向聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱(2D图谱)的比较,找出了每种组织的专一性或高丰度的蛋白质斑点。这些结果有助于克隆组织专一性的DNA调控序列和转基因植物的研究。 相似文献
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表阿霉素对肝癌亚细胞蛋白质组影响的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
表阿霉素是临床应用的抗癌药物之一,它干扰DNA的复制和转录,并能诱导癌细胞凋亡。表阿霉素对癌细胞蛋白质表达谱的影响,涉及到表阿霉素药理作用的机制,对此进行研究,有助于抗癌药物作用机制的理解。运用亚细胞蛋白质组学的研究策略,对比分析表阿霉素干预前后,肝癌细胞线粒体、细胞核蛋白质组的表达差异。通过超离心分离纯化细胞器,双向电泳分离蛋白质,图像分析筛选差异表达蛋白,MALDI-TOF-MS分析鉴定蛋白质。从线粒体、细胞核两个亚细胞组分中一个鉴定了15种差异表达蛋白,其中5种在表阿霉素干预后的肝癌细胞中表达上调,10种干预后表达下调。这些差异表达蛋白质涉及到细胞的能量代谢、蛋白质合成、细胞骨架的改变、mRNA的加工成熟、细胞应急状态的形成及凋亡调控等许多方面。 相似文献
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激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection, LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue, NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells, NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin 8 (CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物. 相似文献
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根据端粒酶含有蛋白质组分和RNA组分的特点,采用寡核苷酸亲和纯化法从HeLa细胞蛋白粗提物中分离纯化人类端粒酶,纯化产物以TRAP法检测其延伸端粒活性,并采用RNA印迹法进行鉴定,然后从纯化产物中分离蛋白质组分,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其蛋白质亚基成分,可见到4种蛋白质亚基成分,与蛋白质分子质量标准比较,有两条位置接近212.2 ku,一条接近116.0 ku,一条接近42.7 ku.结果表明,蛋白质寡核苷酸亲和纯化法一步性分离纯化HeLa细胞端粒酶可得到端粒酶活性片段. 相似文献
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静国忠 《中国生物工程杂志》1982,2(3):19-22
重组DNA技术的新进展已为研究特定的动物基因开辟了一条进途径。由于几个理由,我们选择了胶原蛋白基因作为研究基因结构和调节的模型。这个基因编码了一组有趣的蛋白质,在动物组织中,这些蛋白质是细胞外基质的主要成份,其主要功能是为细胞之间相互接触提供一个结构骨架。 相似文献
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蛋白质作为生命物质基础之一,存在于自然界中复杂的混合体系中。蛋白质在细胞中的含量极低,将其从复杂体系中分离出来并保持其活性,难度较大,因此分离纯化蛋白质的方法受到生命科学领域广泛关注。本文首先阐述了蛋白质的预处理,其次阐述了蛋白质分离纯化的各种方法如沉淀、层析、离心等,重点阐述了蛋白质新纯化的各种原理,以及每种方法的适用范围。有助大家更全面、更彻底的了解蛋白纯化技术的发展,以期为今后开展蛋白质的制备及应用提供一定理论依据和实验指导。 相似文献
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蛋白质结构功能的研究是分子生物学领域中的一个重要方面。遗传工程、蛋白质工程的相继发展,到最后表达产物的分离、纯化和鉴定仍然需要蛋白质化学作为基础。近年来生物科学中很多重要的进展是由于细胞和细胞器中极少量的蛋白质或多肽的分离分析和了解结构功能后而取得的。这些都促进了蛋白质化学的发展。特别是应用了一些新的微量方法导致对基本细胞过程有了较好的了解,这包括:多肽激素及其相关的释放因子、生长因子和肿瘤、生物能力学、质子泵、离子泵和通道、拓扑基因学、蛋白质分泌、分子病毒学和免疫学、膜蛋白分析和受体研究等。 相似文献
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