用生物素-亲和素ELISA法检测人胚肺二倍体细胞培养的甲型肝炎病毒抗原

利用生物素-亲和素生物放大系统的原理,建立了新的检测细胞培养的甲型肝炎病毒抗原的方法。用生物素标记的抗甲肝IgG,与免疫偶联于固相的甲肝抗原作用,然后用亲和素-生物素辣根酶复合物(ABPC)与生物素化的IgG偶合,邻苯二胺(OPD)显色。该法在检测甲肝抗原中获得满意结果,灵敏度比普通ELISA法提高约10倍,非特异性显著降低。该法可进一步发展成为一种高特异性的,灵敏的甲肝临床诊断和流行病学调查的技术。     

生物素一亲和素系统试剂及其应用的研究I．试剂的制备和鉴定

本文报道生物索－亲和素系统(Bas)成套试剂的制备及其鉴定结果。活化生物素BNHs由生物素与羟基丁二酰亚胺脱水缩台而成。亲和素用cMc柱二次梯度层桁法从鸡蛋清中提取。生物素化羊抗兔(b—Sarg)和生物索化过氧化物酶(b-HRP)分别由Sarg和HRP与BNHs反应获得。经鉴定,上述四种试剂均符合要求。通过Abc ELIsA法检测兔抗人Ig表明,用全套自制的Bas试剂所得结果与进口产品一致,其灵敏度可达1：256000以上,超过常规ELIsA水平。现正进行Bas免疫酶法与其它免疫酶测定法的对比试验,并用Bas检测其它免疫反应体系,同时将研制成套Bas试剂盒。     

用亲和素-生物素复合物法研究流行性乙型脑炎病毒感染小鼠中枢神经系统后的抗原定位

利用亲和素-生物素免疫组织化学技术,研究了流行性乙型脑炎(简称乙脑)病毒抗原(P3,A2株)感染小鼠中枢神经系统后的定位。观察到乙脑病毒抗原分布具有一定选择性,主要集中在脑干、小脑、间脑和大脑皮质。病变分布与H-E常规病理染色一致。该方法敏感、特异。同时比较了兔免疫血清与乙脑单克隆抗体的应用效果。对组织化学冰冻切片漂浮法诊断病毒抗原进行了探讨。     

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先, 将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应, 观察荧光信号的放大情况; 然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式, 对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化, 包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后, 采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明, BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附, 并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限; 另外, 与传统的与生物素-亲和素检测技术相比, 采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度, 有望用于蛋白质芯片的检测。     

生物素—链霉亲和毒免疫学法测定地高辛的研究

采用国产链霉亲和素直接包被塑料板孔,生物素标记抗体,建立的竞争酶联免疫吸附试验的方法测定血中地高辛浓度,其测定灵敏度为０．９６４μｇ／Ｌ最低检测限为０．２２５１μｇ／Ｌ,测定三份低,中、高浓度的血甭标本,批内变异系数为８．９％、５．９％、２．４％;批间变民系数为１５．８％、１０．１％、９．２％,测定回收率在８９．１－１０７．２２％之间,此法与ＦＰＩＡ方法相关良好。     

生物素-亲和素偶联探针蛋白芯片检测技术

自行制备一种新型生物素-亲和素偶联探针分子并用于反相蛋白芯片的检测。首先, 将生物素-羊抗鼠IgG与亲和素按照不同比例混合后与鼠IgG蛋白芯片反应, 观察荧光信号的放大情况; 然后以鼠IgG-羊抗鼠IgG体系为研究模式, 对反相蛋白芯片的制备条件进行了考察和优化, 包括荧光分子的非特异性吸附、点样缓冲液的选择以及蛋白的活性等。最后, 采用此偶联探针对反相蛋白芯片进行了检测。结果表明, BSA缓冲液制备的反相蛋白芯片可以防止非特异性吸附, 并有利于保持固定蛋白活性和提高检测限; 另外, 与传统的与生物素-亲和素检测技术相比, 采用生物素-亲和素偶联探针对反相芯片的检测限可以提高4倍左右。表明亲和素-生物素偶联探针成本低、易于合成、并可以与其它的信号放大技术联用进一步提高检测的灵敏度, 有望用于蛋白质芯片的检测。     

微生物发酵液中生物素含量的ELISA测定

生物素与亲和素具有很强的亲和力,本文利用这一特性建立了一种直接竞争抑制的酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）,用于检测微生物发酵液中生物素含量．当标准品生物素含量在０．５～２０μｍｏｌ／Ｌ范围内,它与抑制率（Ｉ）负对数呈线性关系,因此发酵液样品中生物素含量可从标准曲线上查得。该法简便、准确,而且不需对样品作任何预处理。     

生物素标记检测在基因探查中的应用

生物素标记检测技术用于分子杂交已有数年历史,并有很多成功的报道。其原理是用生物素标记的核酸探针进行分子杂交,尔后用免疫组化技术显示杂交结果。它具有快速、准确等优点,特别是避免了使用放射性同位索。它可用于细胞学、染色体及分子学标本,甚至石蜡切片。当然,此方法的灵敏度尚不及放射性探针,且常有本底过高。     

两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。     

结核性脑膜炎颅神经损害与脑脊液特点的关系研究

目的:探讨结核性脑膜炎颅神经损害与脑脊液特点的关系。方法:回顾性收集我院神经内科确诊的173例结核性脑膜炎患者临床资料,将所有患者分为伴颅神经损害和不伴颅神经损害两组,对其临床特点及脑脊液外观、压力及细胞学、生化、免疫球蛋白结果进行统计学分析。结果:颅神经损害者占所有病人的22.5%(39/173),视神经损害占61.5%(24/39),外展神经损害占53.8%(21/39),动眼神经损害占15.4%(6/39),听神经损害占15.4%(6/39);颅神经损伤组较无颅神经损伤组脑脊液压力、蛋白质及Ig G、Ig M、Alb明显升高(P0.01或0.001),且颅神经损害者头颅MRI脑膜强化较无颅神经损害者差异有统计学意义(P0.001),而脑脊液外观、白细胞计数及比例两组间并无发现显著差异。结论:结核性脑膜炎患者伴颅神经损害时,脑脊液压力、蛋白质及部分免疫球蛋白较无颅神经损害者明显升高,这将有助于结核性脑膜炎合并颅神经损害的临床诊断,对于有颅神经损害的结核性脑膜膜炎患者加强并早期启动抗结核治疗,以减少蛋白质沉积,从而降低颅神经损害的发生率。     

结核性脑膜炎与化脓性脑膜炎脑脊液与血浆生化指标比值的比较研究

目的:比较结核性脑膜炎与化脓性脑膜炎脑脊液与血浆生化指标比值。方法:选择2010年2月~2014年12月我院结核性脑膜炎患者82例,化脓性脑膜炎98例,检测脑脊液与血浆中的蛋白、糖及氯化物含量,并计算比值。结果:两组患者脑脊液蛋白、糖含量的差异无统计学意义(P0.05),化脓性脑膜炎组的氯化物含量高于结核性脑膜炎组(P0.05);两组血浆糖含量的差异无统计学意义(P0.05),化脓性脑膜炎组蛋白和氯化物含量明显高于结核性脑膜炎组(P0.05);化脓性脑膜炎组蛋白比值低于结核性脑膜炎组,氯化物比值则高于化脓性脑膜炎组,差异均有统计学意义(P0.05);两组间糖比值比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:脑脊液与血浆生化指标比值对鉴别诊断结核性脑膜炎与化脓性脑膜炎有重要意义。     

通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组

细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色,比如细胞-细胞相互作用、信号转导和物质运输.分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化,有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位.成功地进行膜蛋白分析最重要的是获得足够浓度与纯度的膜蛋白.这里报告一种分离高纯度膜蛋白的方法,主要包括三个步骤：（1）生物素化活细胞表面的膜蛋白,（2）链亲和素琼脂糖亲和吸附,（3）强烈的清洗条件去除非特异吸 附的胞质蛋白.最后用化学方法洗脱生物素标记的膜蛋白进行双向电泳分离分析.用该方法 制备了HeLa细胞的膜蛋白.免疫印迹结果表明,生物素标记的膜蛋白基本上都是低丰度蛋白. 这样制备得到的膜蛋白双向电泳分离出2 400多个蛋白质点,而且大多数点的亮度相近,分 布得相对分散没有聚集成群.这种图谱非常便于比较分析找到差异蛋白.多次重复制备膜蛋白 、电泳表明该方法的重复性和稳定性很好.     

生物素标记钙调素用于植物钙调素结合蛋白的检测

用生物素标了己了花椰菜ＣａＭ。生物素标记的ＣａＭ具有与天然ＣａＭ相似的Ｃａ２＋依赖电泳特性,可激活ＣａＭ依赖性磷酸二酯酶,能够检测出５０ｎｇ的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物ＣａＭ结合蛋白的生物素－覆盖法（Ｂｉｏｔｉｎ－ｏｖｅｒｌａｙ）并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内６４ｋＤ蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必需设置酶标亲和素处理的对照。用生物素－覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形成过程中的ＣａＭ结合蛋白时可检出２,４－Ｄ诱导的ＣａＭ结合蛋白。     

亲和素-生物素间接偶联的压电DNA传感器研究

采用3 3′-二巯基硫代丙酸的金电极自组装技术,用乙基3-（3-二甲氨基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基磺基琥珀酰亚胺（NHS）偶联剂将亲和素固定于金电极上,联于生物素标记的探针,制备成压电DNA传感器的检测电极,和杂交液中的待检葡萄球菌肠毒素B的ssDNA进行杂交,通过频率信号检测DNA杂交的量,达到检测的目的.采用不同长度的基因片段进行了研究,制作的传感器一致性、特异性都较好;杂交后的电极,电极再生后,传感器可以重复使用.     

生物素标记寡核苷酸探针检测B群轮状病毒

用５′端接氨基标记法,用生物素对Ｂ群轮状病毒（ＧＢＲＶ）ＩＤＩＲ株具有群特异性的３片段基因上２３ｂｐ寡核苷酸序列进行标记,经高效薄层层析板（ＨＰＴＬＣ）纯化,制备了Ｂ群轮状病毒生物素寡核苷酸探针,探针显色灵敏度达１０Ｐｇ,与ＧＢＲＶ、ＫＢ６３株基因杂交可检测到１００ｐｇ靶序列,而与Ａ群和Ｃ群轮状病毒及无关基因均不产生杂交信号,该探针可用于Ｂ群轮状病毒的检测、鉴定,以及同群不同毒株间基因相关性研究。     

生物素标记钙调素用于植物钙调素结合蛋白的检测

用生物素标记了花椰菜ＣａＭ。生物素标记的ＣａＭ具有与天然ＣａＭ相似的Ｃａ＾２＋依赖电泳特性,可激活ＣａＭ依赖性磷酸二酯酶,能够检测出５０ｎｇ的磷酸二酯酶。利用它建立了检测植物ＣａＭ结合蛋白的生物素－覆盖法并证实酶标亲和素可与胡萝卜愈伤组织内６４ｋＤ蛋白质非特异结合,因此将此法运用于植物材料时必要设置酶标亲和素处理的对照。用生物素－覆盖法检测胡萝卜愈伤组织形态过程中的ＣａＭ结合蛋白时可检出２,４－Ｄ     

生物素-亲和素微模式表面的制备与细胞定位

细胞在模式化表面的定位培养对于组织工程、生物传感器技术和细胞生物学基础研究具有重要意义。研究基于软光刻技术的生物素-亲和素微模式表面快速制备方法,并用所制备的模式进行牛主动脉血管内皮细胞的定位培养。表明该技术可在细胞尺度上有效地控制细胞生长的空间位置。 