不同诱导子对怀牛膝细胞生长及多糖含量的影响

为提高怀牛膝(Achyranthes bidentata)悬浮培养细胞中牛膝多糖的含量,以酵母提取物、榆黄蘑(Pleurotus citrinopileatus)及水杨酸作为诱导子,分别在同一时期以不同浓度或在不同时期以相同浓度添加至细胞培养物中,收获时测定细胞生长量和牛膝多糖含量。结果显示,在培养12天时添加2.5%(v/v)酵母诱导子,细胞干重最大,可达46.75 g·L–1,多糖含量为5.76 mg·g~(–1);在培养9天时添加5 mg GE·L–1榆黄蘑诱导子,收获时细胞中多糖含量可达6.56 mg·g~(–1),细胞干重达28.3g·L–1;1 mg·g~(–1)水杨酸对牛膝多糖的诱导效果不如以上2种诱导子明显。     

密花香薷总黄酮体外抗氧化及抗肿瘤活性研究

通过超声波法提取、D101大孔吸附树脂纯化密花香薷总黄酮,体外抗氧化试验和MTT(四甲基偶氮唑盐)法评价其抗氧化和抗肿瘤活性。结果表明,总黄酮对羟自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)和超氧阴离子自由基(O_2~-·)均具有清除能力,其中对O_2~-·的清除能力优于VC;MTT实验结果显示总黄酮对4株细胞均有不同程度的抑制效应,并呈现时间和剂量依赖性(P0.05)。其中对人宫颈癌Hela细胞48 h抑制效应最明显,IC50值为0.5 mg/m L;形态观察显示,在总黄酮作用下,SMMC-7721和Hela细胞逐渐变圆,粘附性降低,细胞表面皱缩,产生细胞碎片,显示出明显的细胞毒性,AO/EB染色观察发现随着总黄酮处理浓度的增加,凋亡细胞的数量也在逐渐增加。本研究结果表明密花香薷总黄酮具有很好的抗氧化活性,可作为一种天然抗氧化剂,且总黄酮对肿瘤细胞生长有一定的抑制效应,可作为抗肿瘤药物进一步研究。     

MT1受体在无蹼壁虎肝脏的分布

目的为观察褪黑激素受体1(melatoninreceptor1,MT1)免疫反应在无蹼壁虎肝脏分布。方法我们采用苏木素染色和免疫荧光单标的方法。结果发现无蹼壁虎肝脏主要由肝细胞和肝脏库普弗细胞组成;肝细胞单位区域细胞数右叶(rightlobe)(217·159±3·571个/mm2)较左叶(84·317±2·072个/mm2)明显多(P<0·05),库普弗细胞单位区域细胞数左叶(leftlobe)(50·276±2·257个/mm2)较右叶(18·241±1·563个/mm2)明显多(P<0·05);左、右叶库普弗细胞数占细胞总数的百分率明显不同(左叶:4·054%±1·642%,右叶:1·261%±0·536%)(P<0·05)。免疫组化结果显示MT1受体在肝细胞和库普弗细胞均有表达。MT1免疫阳性反应主要位于细胞膜和细胞质。MT1受体阳性反应肝细胞单位区域细胞数右叶(72·381±3·614细胞数/mm2)较左叶(38·153±2·684细胞数/mm2)明显多(P<0·05);库普弗细胞阳性反应单位区域细胞数左叶(12·541±0·572细胞数/mm2)较右叶(6·443±0·761细胞数/mm2)明显多(P<0·05)。MT1受体阳性反应细胞数在左、右叶库普弗细胞也存在明显的部位差异(P<0·05)。结论上述结果提示褪黑激素经褪黑激素受体的介导对无蹼壁虎肝脏左、右叶肝细胞和库普弗细胞生理功能的调控存在差异。     

姜黄素对宫颈癌细胞生长与增殖的影响研究

目的:探究姜黄素(Curcumin)对宫颈癌细胞He La生长与增殖的影响及其作用机制。方法:体外培养He La细胞,以0μmol·L~(-1)、5μmol·L~(-1)、10μmol·L~(-1)和20μmol·L~(-1)等不同浓度的姜黄素处理He La细胞;通过MTT和平板克隆实验,研究姜黄素对He La细胞生长与增殖的影响;通过免疫荧光共聚焦显微镜技术,研究姜黄素与上游结合因子(Upstream binding factor,UBF)在细胞中的定位情况;通过实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)实验,研究姜黄素对He La细胞核仁r DNA转录的影响;利用Western blot技术,研究姜黄素对He La细胞中UBF磷酸化的影响。结果:姜黄素对He La细胞有明显的生长抑制作用,并呈现出剂量依赖关系;姜黄素降低r DNA的转录水平,下调UBF磷酸化的量,且和UBF在核仁中存在共定位现象。结论:r DNA转录水平的降低和p-UBF的下调可能是姜黄素抑制He La细胞生长和增殖的作用途径之一。     

怀牛膝细胞悬浮培养条件的优化

为进一步优化怀牛膝(Achyranthes bidentata)细胞悬浮培养条件,对接种量、继代周期、pH、光照及Cu~(2+)等多种影响因子的作用效果进行了研究,以提高怀牛膝细胞生长量及牛膝多糖含量。结果显示,接种量50 g·L~(–1)、继代周期14天,pH5–6和光照培养可以使细胞保持良好的生长状态及多糖合成能力;添加50μmol·L~(–1 )Cu~(2+),细胞的干重最大,可达44.63 g·L~(–1),多糖含量也最高,为4.02 mg·g~(–1)。     

桃果实细胞内糖酸分布对果实甜酸风味的影响

以成熟‘白凤’桃果实为实验材料,采用区室化分析方法计算细胞内液泡、细胞质和细胞间隙中各糖酸组分的含量,并用调查问卷的方式对成熟桃果实甜酸风味进行评价打分,研究果肉细胞内各糖酸组分含量及其分布对果实甜酸风味的影响。结果表明:(1)成熟桃果实中可溶性糖(蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇)在液泡、细胞质和细胞间隙的含量分别为27.3、11.6和9.0mg·g-1,有机酸(苹果酸、柠檬酸、奎宁酸和莽草酸)含量分别为2.09、0.94和0.35mg·g-1;蔗糖和苹果酸含量分别占果实可溶性糖和有机酸含量的80.6%和77.0%,是成熟桃果实中糖和酸的主要储存形式。(2)果实细胞内各糖酸组分通过细胞膜的渗透速率明显高于液泡膜。(3)块状处理桃果实液泡、细胞质与细胞间隙中的糖含量比、酸含量比及糖酸比分别为3.0∶1.3∶1.0、6.0∶2.7∶1.0、13.9∶12.4∶23.1,而匀浆处理果实的细胞结构被破坏,其不同细胞器中的比例分别为1.0∶1.0∶1.0、1.0∶1.0∶1.0、14.0∶14.0∶14.0;块状果实风味评价得分(2.99)明显高于匀浆处理果实(1.98)。研究认为,桃果实细胞中液泡、细胞质和细胞间隙之间糖酸含量以及糖酸比的差异可能是导致果实甜度风味变化的重要原因。     

狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞灌流培养中细胞特异性灌流速率的研究

目的 研究灌流培养中,不同的细胞特异性灌流速率(cell specific perfusion rate, CSPR)对狂犬病毒单克隆抗体CHO细胞生长及抗体蛋白表达的影响,摸索适合本细胞株灌流培养的CSPR。方法 在标号为CSPR 1～5[CSPR1;0.02 nL/(细胞·d)、CSPR2:0.03 nL/(细胞·d)、CSPR3:0.04 nL/(细胞·d)、CSPR4:0.05 nL/(细胞·d)、CSPR5:0.06 nL/(细胞·d),每组3个重复]的15个TPP管中按100万个/mL的初始密度接种相同的CHO种子细胞;摇床中,以转速225 r/min、CO₂浓度5.0%、湿度80%和温度37℃的条件培养细胞;以后每天取细胞样品,分别检测活细胞密度(viable cell density, VCD)、细胞活率、葡萄糖浓度、乳酸浓度和渗透压。接种3 d起,每天分别从CSPR 1～5的各管中,按0.02～0.06 nL/(细胞·d)的CSPR计算所需要更换的细胞悬液体积,将各管中的细胞悬液离心,取出相应体积的上清并补入相同体积的新鲜培养液重悬细胞后,继续培...     

利用Bac-to-Bac系统表达棉蚜的乙酰胆碱酯酶

Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统是一种高效真核表达系统。采用重组DNA技术构建棉蚜乙酰胆碱酯酶1(AChE1)表达质粒,应用该系统在昆虫Sf9细胞系中成功表达了棉蚜的AChE1。表达的AChE以可溶性形式释放于细胞培养液中,对其自然底物类似物ATChI的Km值为(144·5±28·6)μm;对抗蚜威、唑蚜威、氧化乐果和灭赐松等4种杀虫剂的敏感性指数(Ki值)分别为513、1883、5和23(mM·min)-1,与文献报道的测定结果基本一致。昆虫细胞被重组病毒感染后第2~3天所得产物的活性最高;该产物在-20℃保存90d后活性没有明显下降,4℃保存60d后下降40%,室温(22℃)保存7d后即下降70%。     

一氧化氮对盐胁迫下烟草细胞渗透调节能力的影响

一氧化氮(NO)作为信号分子广泛参与植物的生长发育、逆境胁迫响应过程。为了明确NO对细胞渗透调节作用,该研究以NaCl为盐胁迫因子,以烟草悬浮细胞为材料,研究了NO对盐胁迫下细胞渗透调节能力的影响。结果显示:(1)NaCl胁迫能诱发烟草细胞内源NO的生成,且100mmol·L-1 NaCl诱发了细胞内源NO的快速产生,在1h达到峰值,NO产生量约为对照的2倍,之后NO产生量快速下降,直至3h才逐渐回升,并在48h内维持在较高水平。(2)外源NO显著增强了烟草细胞的抗渗透胁迫能力,且150μmol·L-1 NO供体硝普钠(SNP)处理显著提高了NaCl胁迫下细胞的活力和再生能力(提高幅度分别为78.6%和63.2%),降低了细胞死亡率(降幅约为48.5%);SNP处理下的NaCl胁迫细胞能更大程度降低渗透势,延缓水势的降低,维持细胞压力势。(3)外源NO显著促进了NaCl胁迫细胞中脯氨酸的合成和积累,且150μmol·L-1 SNP处理将NaCl胁迫细胞中的脯氨酸含量提高25.9%;SNP处理也影响了脯氨酸代谢关键酶的活性和基因表达水平,即提高了谷氨酸脱氢酶(GDH)、精氨酸酶和鸟氨酸转氨酶(OAT)的活性,降低了脯氨酸脱氢酶(PDH)的活性,同时使GDH、OAT和PDH基因的表达表现出与酶活性相似的变化趋势。研究表明,NO参与了盐胁迫下烟草细胞的渗透调节,通过调控脯氨酸代谢可能是NO参与渗透调节的重要机制。     

金樱子总黄酮体外抗氧化活性的研究

本文研究了金樱子总黄酮(RLTF)体外清除自由基的能力,并观察其对过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)抗氧化作用的影响。采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸法、DPPH法分别测定RLTF对超氧阴离子自由基(O-·2)、羟自由基(·OH)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率;Hoechst染色法分析各组细胞凋亡情况;MTT法测定细胞活力;分光光度法检测各组细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性。结果显示,在20~200μg范围内,随着样品加入量增大,RLTF对·OH和DPPH·的清除率逐渐增大,而对O-·2的清除率则是先增大后减少;RLTF对O-·2的清除作用偏低,对·OH的清除率与芦丁相当,对DPPH·的清除能力则强于芦丁而弱于Vc。Hoechst染色观察结果表明RLTF预处理细胞后,能明显提高细胞的抗凋亡作用。与H2O2损伤组比较,不同浓度RLTF预处理组的细胞活力均显著升高(P0.01);不同浓度RLTF预处理组细胞中的SOD、CAT和GSH-Px活性均明显增加(P0.01),且呈剂量依赖性。上述结果表明,RLTF具有较强的自由基体外清除能力,能有效提高氧化损伤HUVEC细胞中SOD、CAT、GSH-Px的酶活性,其可能通过清除细胞内自由基和提高细胞抗氧化酶活性来提高细胞的抗氧化活性。     

镍对体外培养内皮细胞的影响

目的:研究不同浓度的镍对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响。方法:用两种镍化合物(NiCl2·6H2O、NiSO4·6H2O)分别制成含Ni(Ⅱ)浓度为1000、500、250、125、62.5μmol/L及31.25μmol/L的溶液,作用于体外培养的HUVEC细胞株,72h后MTT法测试细胞增殖活性,确定NiCl2·6H2O与NiSO4·6H2O的TC50,并分别以TC50的Ni(Ⅱ)作用培养的HUVEC细胞株,MTT法检测不同时间点(24h、48h、72h、96h、120h)的细胞相对增殖活性;2,4-二硝基苯肼法检测作用72h时培养上清液及细胞裂解液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,计算Ni(Ⅱ)化合物作用下细胞LDH的释放率,评价Ni(Ⅱ)对其影响;HE常规染色观察两种镍化合物作用72h后的细胞形态;AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:两种化合物作用HUVEC细胞TC50为125μmol/L,随着浓度的不断增加,细胞毒性增强;同一浓度的Ni(Ⅱ)对细胞活性的影响随着作用时间增加而增强;两种镍化合物对细胞LDH释放率的影响无明显差异(P>0.05);NiSO4·6...     

金雀异黄素合成品诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的体外研究

目的:探讨金雀异黄素合成品诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制。方法:采用2.5mg·L~(-1)、5.0mg·L~(-1)、10.0mg·L~(-1)和20.0mg·L~(-1)的金雀异黄素处理人胃癌细胞SGC-7901后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,电镜下观察细胞形态变化,RT-PCR法检测凋亡相关基因表达。结果:10.0mg·L~(-1),20.0mg·L~(-1)金雀异黄素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,凋亡率与剂量正相关(相关系数r=0.9830),10.0mg·L~(-1)金雀异黄素诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡的形态学改变,2.5mg·L~(-1)、5.0mg·L~(-1)、10.0mg·L~(-1)和20.0mg·L~(-1)金雀异黄素使Bcl-2mRNA表达下调,Fas mRNA表达上调。结论:金雀异黄素能诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡,降低Bcl-2 mRNA表达,增加Fas mRNA表达为其诱发SGC-7901细胞凋亡的机制之一。     

海湾扇贝血细胞的表面结构及超微结构

通过光镜、扫描电镜和透射电镜的观察对海湾扇贝血细胞的形态、表面结构及超微结构进行了研究。根据细胞的大小、形态结构可将血细胞分成四种类型:Ⅰ型小透明细胞,大小约(2·38±0·08)μm,约占比例30%-35%;Ⅰ型大透明细胞,大小约(4·41±0·33)μm,约占比例15%-25%;Ⅱ型小颗粒细胞,大小约(4·15±0·26)μm,约占比例20%-25%;Ⅱ型大颗粒细胞,大小约(8·26±0·52)μm,约占比例25%-30%。血细胞在血淋巴中的平均密度为(3·75±0·65)×107cell/ml。其中Ⅰ型透明细胞占55·3%,Ⅱ型颗粒细胞占44·7%。表面结构观察结果显示有5种形态:圆形血细胞,梨形或梭形血细胞,松果形血细胞,阿米巴样细胞,大型细胞,表面结构与功能密切相关。透射电镜观察结果表明血细胞主要归属于两大类型:Ⅰ型透明细胞和Ⅱ型颗粒细胞。超微结构显示颗粒细胞的细胞质颗粒可区分成三种类型:Ⅰ型高电子密度颗粒,Ⅱ型低电子密度颗粒和Ⅲ型中等电子密度颗粒,并推测Ⅰ型高电子密度颗粒是细胞吞噬的异物(微生物等)或细胞内的废物(沉积颗粒,衰老的胞器或碎片);Ⅱ型低电子密度颗粒是溶酶体类的胞内分泌颗粒,来源于高尔基复合体或内质网;Ⅲ型中等电子密度颗粒可能是次级溶酶体,由Ⅰ型颗粒向Ⅱ型颗粒融合并注入裂解酶类而形成[动物学报51(3):486-494,2005]。     

中国细胞生物学学报

正·中国科技核心期刊主管中国科学院·CSCD中国科学引文数据库收录期刊主办中国科学院分子细胞科学卓越创新中心·CA化学文摘(美)收录期刊 (生物化学与细胞生物学研究所)·JST日本科学技术振兴机构数据库收录期刊中国细胞生物学学会《中国细胞生物学学报》简介《中国细胞生物学学报》(原细胞生物学杂志)创刊于1979年,月刊,由中国科学院分子细胞科学卓越创新中心(生物化学与细胞生物学研究所)和中国细胞生物学学会共同主办,     

纤维粘连蛋白及层粘连蛋白与肿瘤细胞的浸润和转移

纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)及层粘连蛋白(laminin,LN)是近年来受到广泛重视的细胞外基质非胶原糖蛋白。FN主要由中胚层来的细胞产生,亦可由上皮细胞及内皮细胞生成;LN则主要由上皮细胞及内皮细胞合成。FN以可溶及不溶两种形式分别存在于各种体液及细胞外基质(包括某些基膜);LN则以不溶的形式     

CO_2、高温对宁麦三号不育系花粉败育时期影响的细胞学观察

关于植物雄性不育花粉败育过程,Leser等(1972)已有评述,认为花粉败育的形式和时期是多种多样的。随植物不同而异。并已知败育时期受遗传和环境相互作用所制约。wilson(1968)曾报道了具有 T·timopheevi 细胞     

体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化的研究

通过体外诱导人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)向多巴胺(dopamine,DA)神经元分化,探讨人BMSCs来源的DA神经元的功能特征及其分化机制,为临床上细胞移植替代治疗诸如帕金森氏病(parkinson’sdisease,PD)等神经精神性疾病提供一种理想的细胞来源。通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞,贴壁培养纯化BMSCs。50μmol/L脑源性神经营养因子(brain derivedneurotrophy factor,BDNF),10μmol/Lforskolin(FSK)和10μmol/LDA联合对BMSCs进行诱导。电子显微镜观察诱导2周后细胞是否具有神经元的超微结构特点;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测DA神经元分化过程中的标志物酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达以及转录因子Nurr1、Ptx3和Lmx1b的表达;高效液相色谱(highperformance liquid chromatogram,HPLC)检测诱导2周后的细胞多巴胺的释放水平。结果表明,诱导2周后,电镜下细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体以及神经微丝的形成。RT-PCR结果显示NSE(neuron specificenolase)、Nurr1、Ptx3、Lmx1b和TH的mRNA均有表达;免疫细胞化学染色结果表明诱导2周后TH阳性细胞(24·80±3·36)%的表达较诱导3d后(3·77±1·77)%明显提高(P<0·01);HPLC检测到诱导2周后的细胞DA释放水平[(1·22±0·36)μg/mL(n=6)]高于未经诱导的细胞[(0·75±0·22)μg/mL(n=6)(t=-2·79,P=0·038)]。由此得出,BDNF、FSK和DA可以在体外诱导人BMSCs向DA神经元分化,并具有DA神经元的功能特征,是临床用于治疗神经精神性疾病的理想细胞来源。     

污染水域鲫鱼外周血细胞形态和数量的变化

为探讨污染环境对鱼类外周血细胞形态及数量的影响,本研究选择相对无污染的刘家峡水库和污染较严重的黄河白银段为研究地点,以鲫鱼(Carassius auratus)为研究对象,常规方法制血涂片,Giemsa染色,统计红细胞微核率、核异常率和各类血细胞数量,并用带有数码采集头(Motic B5 Professional Series)的显微镜拍照各类细胞。结果表明,与刘家峡水库相比,黄河白银段鲫鱼红细胞数量显著减少(P<0·05),核异常率(P<0·05)和微核率(P<0·01)显著增加;白细胞总数和淋巴细胞数量显著增加(P<0·05),而嗜中性粒细胞(P<0·01)和血栓细胞(P<0·05)数量显著减少,单核细胞数量虽有减少趋势但两地差异不显著(P>0·05)。表明黄河白银段污染对鲫鱼外周血细胞数量及红细胞微核率和核异常率具有显著的影响。     

利用Chlorella vulgaris C9-JN2010去除蓝藻-猪粪沼液废水中氮磷的研究

利用普通小球藻Chlorella vugaris C9-JN2010处理蓝藻-猪粪沼液废水,以实现废水无害化利用。实验考察了氮磷比和沼液浓度对小球藻生长及处理废水效果的影响,结果表明:在氮磷比(20:1)和沼液浓度(5%)条件下培养小球藻,藻细胞生长和废水处理效果最佳,最高细胞干重及生产强度分别为900.1 mg·L~(-1)和85.1 mg·L~(-1)·d~(-1),废水中总氮、总磷、氨氮的去除率分别为84.6%、95.9%和90.5%,对应去除强度分别为5.43 mg·L~(-1)·d~(-1)、0.30 mg·L~(-1)·d~(-1)和4.75 mg·L~(-1)·d~(-1)。利用小球藻可较彻底的去除蓝藻-猪粪沼液废水中氮、磷等营养,达到污水处理效果。     

血卟啉单甲醚对食管癌细胞 Eca-109 的光动力学杀伤效应

目的:探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(PDT)对人食管癌细胞杀伤效应的最佳作用参数,为HMME-PDT的临床应用提供一定的参考依据。方法:以4μg·m L-1HMME与人食管癌Eca-109细胞孵育不同时间后,利用形态学软件分析其荧光强度;进一步予不同浓度(0.5μg·m L-1~8μg·m L-1)HMME与细胞孵育1.5小时后,在特定波长下以不同能量的激光(2、4、8 J·cm-2)照射,采用CCK8法检测细胞的存活率。结果:HMME在细胞内的荧光强度于给药1.5 h后达到高峰。在一定范围内,随着HMME浓度与激光剂量的增加,细胞存活率逐渐下降,当HMME浓度增高到4μg·m L-1时,光照强度增高到4 J·cm-2,进一步提高药物浓度与激光剂量,细胞存活率并不随之降低。结论:不同的孵育浓度、不同的孵育时间及不同的光照剂量密度可以显著的影响HMME-PDT对人食管癌Eca-109细胞的体外效应。