痰液肺癌细胞Ras基因和P63基因的表达与分子生物学意义

目的研究骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中Notch表达的研究。方法别用免疫细胞化学方法和Western-blot方法检测167例患者痰液中Ras基因和P63基因的表达情况,分析其对早期肺癌诊断的意义。结果肺癌患者痰液中的Ras基因在痰脱落细胞中有明显高表达,阳性率为75%。P63基因在肺癌痰细胞中阳性表达率为34.78%。结论利用Ras基因标记物可以标记出痰液中的肺非典型增生细胞和肺癌细胞,有利于肺癌的早期发现和诊断,并且可以作为肺癌的普查指标或手段。     

p53与Ras协同及其在肿瘤发生中的作用

肿瘤发生是抑癌基因失活和原癌基因激活共同作用的结果。p53基因被认为是目前最重要的抑癌基因, 50%以上的肿瘤中存在p53基因的点突变现象; 而Ras基因是肿瘤中突变率较高的原癌基因, 其突变率在某些肿瘤中高达30%~90%。研究发现, 肿瘤发生过程中抑癌基因p53与原癌基因Ras之间存在复杂的相互协同作用。根据目前的文献报道, p53与Ras之间的协同作用可以分为3种：第一, p53对Ras的调节作用; 第二, Ras对p53的调节作用; 第三, p53和Ras共同调控某些与肿瘤发生相关的关键基因。了解p53与Ras之间的3种调控作用将有助于我们进一步认识p53失活与Ras激活协同促进肿瘤发生的分子通路和机制, 同时也将为癌症的个性化治疗和药物靶点的选择提供重要依据。因此, 文章将对近年来所发现的p53与Ras的各种协同作用机制及其与肿瘤发生的关系进行概括和综述。     

Ras信号通路通过激活转录因子Myc促进核内复制细胞生长

【目的】果蝇Ras信号通路在细胞增殖与生长过程中发挥着重要的作用。Myc基因是bHLH转录因子家族基因,可调控细胞生长、竞争和再生增殖等生理过程。本研究旨在明确Ras信号通路与Myc的关系,探索Ras信号调控核内复制细胞生长的作用机制。【方法】生物信息学分析转基因家蚕Bombyx mori后部丝腺Myc基因的转录水平,并通过qPCR验证;在黑腹果蝇Drosophila melanogaster Kc细胞中,分别转染pAc5.1-HisB-Ras~(V12)-V5或pAc5.1-HisB-Raf-Flag过表达Ras~(V12)或Raf后,通过qPCR和Western blot技术分别检测Myc基因在mRNA和蛋白水平的相对表达量;在黑腹果蝇幼虫脂肪体和唾液腺中,结合黑腹果蝇遗传工具和分子生物学手段,验证Ras信号通路对Myc基因的调控作用。【结果】家蚕后部丝腺过表达Ras1~(CA)上调Myc转录水平。激活Ras信号使得黑腹果蝇Kc细胞内Myc在转录水平和蛋白水平上的表达量上调;黑腹果蝇幼虫唾液腺和脂肪体中,游走期Myc基因的表达量高于取食期;过表达Myc或激活Ras信号可以促进细胞核内周期进程;激活Ras信号促进Myc表达。【结论】Ras信号通路激活Myc表达,促进细胞核内周期进程,促进器官发育。     

胃癌细胞中Ras 基因的表达、突变分析及新剪接型Kras△E2 的发现

目的：传统Ras家族由Kras,Hras 和Nras 基因组成,这类基因的点突变经常在人类肿瘤中发现,突变热点位于12,13,61 位 密码子。ERas 基因是2003 年在鼠胚胎干（ES）细胞中发现的,其cDNA编码的蛋白与Kras,Hras 和Nras分别有46%,43%和47% 的相似性,故属于新的Ras 家族成员,近几年发现ERas 基因的表达与胃癌密切相关,而传统Ras 基因在胃癌细胞中的表达及突 变情况系统报道较少,本文旨在研究传统Ras基因Kras,Hras,Nras及其家族新成员ERas 基因在胃癌细胞中的表达和突变情况。 方法：选用7 株不同来源不同分化程度的胃癌细胞系,利用RT-PCR 及real-timePCR 检测Ras基因在这些胃癌细胞系中的表达, 并通过测序对传统Ras基因突变热点12,13,61 位密码子及ERas 基因全长进行突变分析。结果：①Ras基因在这些胃癌细胞系中 均有不同程度的表达,其中Hras 和Nras 基因在各株细胞中表达水平均一,而Kras 和ERas 基因则呈差异性表达;②在这些胃癌 细胞中传统Ras基因突变热点12,13,61位密码子不存在突变,ERas基因全长亦未检测到突变．③发现Kras 基因一新的剪接型, 特点为第一、三外显子直接拼接,缺失第二外显子,命名为Kras△E2。结论：与在其他肿瘤中不同,传统Ras 基因在胃癌细胞中不 存在突变热点,家族新成员ERas 基因全长亦无突变,在国际上首次报道新剪接型Kras△E2,从而得出创新性结论：Ras基因家族 在胃癌细胞中并不是通过热点突变导致持续活化而致癌,而可能是通过ERas 基因表达量的调节或形成新的剪接型Kras△E2 而 致癌。另外,Kras 基因是一被受国际关注的肿瘤基因,新剪接型的发现可能会对Kras 基因致癌机制产生新的认识,意义重大。     

胃癌细胞中Ras基因的表达、突变分析及新剪接型Kras△E2的发现

目的：传统Ras家族由Kras,Hras和Nras基因组成,这类基因的点突变经常在人类肿瘤中发现,突变热点位于12,13,61位密码子。ERas基因是2003年在鼠胚胎干（ES）细胞中发现的,其cDNA编码的蛋白与Kras,Hras和Nras分别有46％,43％和47％的相似性,故属于新的Ras家族成员,近几年发现ERas基因的表达与胃癌密切相关,而传统Ras基因在胃癌细胞中的表达及突变情况系统报道较少,本文旨在研究传统Ras基因Kras,Hras,Nras及其家族新成员ERas基因在胃癌细胞中的表达和突变情况。方法：选用7株不同来源不同分化程度的胃癌细胞系,利用RT—PCR及real-timePCR检测Ras基因在这些胃癌细胞系中的表达,并通过测序对传统Ras基因突变热点12,13,61位密码子及ERas基因全长进行突变分析。结果：QRas基因在这些胃癌细胞系中均有不同程度的表达,其中Hras和Nms基因在各株细胞中表达水平均一,而Kras和ERas基因则呈差异性表达;②在这些胃癌细胞中传统Ras基因突变热点12,13,61位密码子不存在突变,ERas基因全长亦未检测到突变．③发现Kras基因一新的剪接型,特点为第一、三外显子直接拼接,缺失第二外显子,命名为Kras△E2。结论：与在其他肿瘤中不同,传统Ras基因在胃癌细胞中不存在突变热点,家族新成员ERas基因全长亦无突变,在国际上首次报道新剪接型Kras△E2,从而得出创新性结论：Ras基因家族在胃癌细胞中并不是通过热点突变导致持续活化而致癌,而可能是通过ERas基因表达量的调节或形成新的剪接型KrasAE2而致癌。另外,Kras基因是一被受国际关注的肿瘤基因,新剪接型的发现可能会对Kras基因致癌机制产生新的认识,意义重大。     

靶向Ras蛋白的抗癌药物

Ras蛋白是Ras信号通路调控的关键分子,与30%人类肿瘤的发生和进展密切相关,研发针对Ras蛋白的抗癌药物具有重要意义。经过数十年的努力,过去因技术限制和对Ras性质及结构认识不足导致的Ras靶向药物研发缓慢的局面如今已有新突破。目前已有多种抗Ras蛋白的单克隆抗体和单链抗体问世。Ras蛋白的这些抗体通过与Ras蛋白特异结合使其失去调控Ras信号通路的作用,目前正在解决这些抗体穿透肿瘤细胞膜进入细胞的难题。已合成多种Ras蛋白抑制剂,如化合物SML-10701、3144、DCAI、AMG 510、MRTX 849和Cyclorasin等,其中AMG 510已进行Ⅲ期临床试验,其他的抑制剂在细胞膜穿透能力和肿瘤抑制效果方面有较大改善。Ras翻译后修饰抑制剂GGTI-2418、NSC1011和Cysmethynil等通过影响Ras蛋白的细胞内定位而阻断Ras信号通路,提高这类抑制剂抑制效果的研究仍在继续。本文从抗Ras蛋白抗体、Ras蛋白抑制剂和Ras翻译后修饰抑制剂三个方面综述近些年Ras蛋白靶向药物的研究进展,为ras基因驱动肿瘤的治疗提供参考。     

ERas基因在胃癌中的表达及其作用机制的研究进展

胚胎干细胞（EScells）为多能干细胞,来自哺乳动物胚胎早期。ES细胞表达的Ras（ERas）基因促进其体外增殖和肿瘤形成。该基因产物Ras蛋白关联和激活多个下游效应,调控多种细胞反应来参与细胞增殖,存活与分化。ERas基因位于x染色体短臂（Xpll．23）,其cDNA编码的蛋白包含227个氨基酸,与传统ras基因Hras,Kras和Nras分别有43％,46％和47％的相似性,故属于新的ras家族成员,与传统ras基因不同的是ERas基因非常活跃但不带有任何突变。近几年发现ERas基因的表达与胃癌密切相关,本文就ERas基因在人胃癌细胞和组织中的表达及其机制的最新进展做一综述,主要包括三个方面：1,ERas基因在胃癌细胞和组织中的表达情况及其功能。2,ERas基因在胃癌细胞中的表观遗传调控。3,ERas基因与胃癌肝和淋巴结转移的关系。     

ERas 基因在胃癌中的表达及其作用机制的研究进展

胚胎干细胞（ES cells)为多能干细胞,来自哺乳动物胚胎早期。ES细胞表达的Ras(ERas)基因促进其体外增殖和肿瘤形成。该 基因产物Ras蛋白关联和激活多个下游效应,调控多种细胞反应来参与细胞增殖,存活与分化。ERas 基因位于X染色体短臂 （Xp11.23）,其cDNA 编码的蛋白包含227 个氨基酸,与传统ras 基因Hras,Kras 和Nras 分别有43%,46%和47%的相似性,故属 于新的ras家族成员,与传统ras 基因不同的是ERas 基因非常活跃但不带有任何突变。近几年发现ERas基因的表达与胃癌密切 相关,本文就ERas基因在人胃癌细胞和组织中的表达及其机制的最新进展做一综述,主要包括三个方面：1,ERas 基因在胃癌细 胞和组织中的表达情况及其功能。2,ERas 基因在胃癌细胞中的表观遗传调控。3,ERas 基因与胃癌肝和淋巴结转移的关系。     

基于RNA-Seq分析Ras1~(CA)在家蚕后部丝腺过表达对细胞周期通路基因的影响

【目的】本文旨在挖掘野生型家蚕Bombyx mori和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺中的转录本差异,分析和验证细胞周期通路中的差异表达基因,从而探讨Ras1CA过表达转基因家蚕提高蚕丝产量的分子机制。【方法】利用转录组学比较野生型和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺中的基因转录本差异,经实时荧光定量PCR(q RT-PCR)验证。【结果】野生型家蚕和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺组织中有2 636个差异表达基因,其中细胞周期信号通路中有42个差异表达基因,包括细胞周期依赖性激酶(CDK)、细胞周期素(Cyclin)以及转录因子等。通过q RT-PCR检测cdk1、cyclin D1、cyclin D2、cdc7、cdh1、dp-1,2等6个基因在野生型和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺组织中的相对表达量,发现转基因家蚕中的表达量均显著高于野生型(P<0.05),其中cyclin D2的表达差异极显著(P<0.01)。q RT-PCR结果与转录本差异一致,表明Ras1CA过表达后,能够促进细胞周期通路基因的表达。【结论】野生型家蚕和Ras1CA过表达转基因家蚕后部丝腺中有大量差异表达基因,且Ras1CA能够在转录水平上调控细胞周期通路,影响后部丝腺组织的细胞分裂和器官生长,从而促进蚕丝蛋白的合成。     

科研快讯

<正>Cancer Discov:科学家开发出治疗肺癌的潜在疗法据美国国家癌症研究所数据显示,三分之一以上的人类癌症,包括胰腺癌、肺癌以及结肠癌在内等癌症都是由于Ras家族基因突变而诱发的,长期以来科学家们一直致力于研究Ras家族基因,其或许是一种潜在的药物靶点,并不会对对癌症药物产生反应,但是近日,刊登在国际杂志Cancer Discovery上的一篇研究报道中,来自罗格斯大学癌症研究所的研究人员通过研究阐明,对     

DAB2IP与肿瘤的发生发展

基因DAB2IP（disabled homolog 2-interacting protein,DAB2 interacting protein）,也被称为AIP1（ASK1-interacting protein 1）,其编码的蛋白是Ras GTPase活化蛋白家族[Ras GTPase-activating protein（GAP）]的新成员之一.作为一个肿瘤抑制基因,DAB2IP常在前列腺癌、乳腺癌、肺癌、肝癌等肿瘤中表达下调,其机制与启动子甲基化及Ezh2相关.DAB2IP不仅参与肿瘤的增殖、存活和凋亡过程,还与肿瘤转移密切相关.     

小细胞肺癌中转录因子E2F1调控的靶基因（英文）北大核心CSCD

本研究组前期研究结果表明,转录因子E2F1在大约95%的小细胞肺癌组织中表达上调,而且与其浸润、转移密切相关,但是E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因未见报道。本研究旨在探索E2F1在小细胞肺癌细胞株H1688中调控的靶基因。染色体免疫共沉淀联合测序(chromatin immunoprecipitation sequencing,Ch IP-seq)结果显示,在小细胞肺癌H1688细胞中,E2F1能够调控5 326个靶基因的表达,其中4 700个是结构基因,626个基因编码长链非编码RNA。基因功能注释(gene ontology,GO)和基因富集图谱(enrichment map)分析显示,E2F1调控的靶基因功能主要集中在3个方面:细胞周期调控、染色体和组蛋白修饰以及蛋白转运。MEME4.7.0软件分析显示,E2F1通过结合6个序列调控相关靶基因和长链非编码序列的表达。以上结果阐明了E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因,为进一步研究E2F1在小细胞肺癌发生、发展、浸润与转移、复发和耐药中的作用提供了实验依据。     

小细胞肺癌中转录因子E2F1调控的靶基因（英文）

本研究组前期研究结果表明,转录因子E2F1在大约95%的小细胞肺癌组织中表达上调,而且与其浸润、转移密切相关,但是E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因未见报道。本研究旨在探索E2F1在小细胞肺癌细胞株H1688中调控的靶基因。染色体免疫共沉淀联合测序(chromatin immunoprecipitation sequencing,Ch IP-seq)结果显示,在小细胞肺癌H1688细胞中,E2F1能够调控5 326个靶基因的表达,其中4 700个是结构基因,626个基因编码长链非编码RNA。基因功能注释(gene ontology,GO)和基因富集图谱(enrichment map)分析显示,E2F1调控的靶基因功能主要集中在3个方面:细胞周期调控、染色体和组蛋白修饰以及蛋白转运。MEME4.7.0软件分析显示,E2F1通过结合6个序列调控相关靶基因和长链非编码序列的表达。以上结果阐明了E2F1在小细胞肺癌中调控的靶基因,为进一步研究E2F1在小细胞肺癌发生、发展、浸润与转移、复发和耐药中的作用提供了实验依据。     

肿瘤抑制基因ARHI的研究进展

ARHI是Ras超家族中第一个被报道的肿瘤抑制基因,定位于人染色体lp31,属小GTP结合蛋白,与Ras拥有相似的GTP／GDP结构域,却具有抑癌作用。ARHI是母源性印迹、父源性表达,可参与细胞周期调控和信号通路转导,从而负向调节细胞生长。在正常人类多种组织中都存在ARHI基因的表达,但在肿瘤组织中其表达却下调。ARHI的表达异常可能与印迹基因的杂合性丢失,DNA甲基化和染色体乙酰化修饰等转录水平的调节失常有关。     

Survivin基因在肺癌中的作用

Survivin是凋亡蛋白抑制因子(inihibitor of apoptosis protein,IAP)家族中的一员,发挥强大的抑制凋亡功能,同时也参与细胞周期调控,使该基因在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。Survivin基因特异性的表达于大多数常见的恶性肿瘤(如肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等),而在正常成人组织中不表达或低表达。大量的研究涉及Survivin基因与肺癌的关系,目前的研究认为,Survivin基因可能成为一个提示预后不良的肿瘤标志物,可为肺癌的诊断提供新的方法。而且很多研究已经进入临床试验阶段,使得Survivin基因在肺癌治疗方面的应用前景广泛。随着研究的不断深入,Survivin有望成为肺癌治疗的理想靶点。本文对Survivin基因在肺癌中作用的研究进展作如下简要综述。     

微RNA与肺癌

微RNA(microRNA,miRNA)是一类长度为21～22nt的非编码RNA分子,其通过转录后基因沉默调控靶基因的活性,在包括肺癌在内的肿瘤发生中起重要作用。随着对miRNA靶基因及miRNA分子行为认识的提高,miRNA很有可能成为癌症治疗新的途径。本文介绍了miRNA的生成,miRNA在肺癌中的作用机理及诊断治疗方面的最新进展。     

白念珠菌Ras/cAMP/P KA途径研究进展

白念珠菌引起的真菌感染严重威胁着人类健康。Ras/cAMP/PKA途径在白念珠菌菌丝发育、生物被膜形成、有性生殖以及耐药性中起着重要的调控作用,该通路由GTPases(Ras1和Ras2)、腺苷环化酶(Cyr1)、cAMP水解酶(Pde1和Pde2)以及PKA激酶(包括催化亚基Tpk1和Tpk2,调节亚基Bcy1)构成。环境因子通过Ras/cAMP/PKA途径调控下游转录因子,进而调节白念珠菌多种生物学行为。文中综述了近年来白念珠菌Ras/cAMP/PKA信号通路感应胞外环境因子和调控细胞行为等方面的研究进展。     

Ras的结构和功能及其参与的信号传导

从ras基因发现以来,因为它和癌症的相关性,引起了人们对其基因和蛋白研究的普遍关注.通过这些研究不仅知道了ras基因的癌变作用机制,而且对Ras蛋白与磷酸化途径的关系有了一个比较清晰的了解.同时关于Ras蛋白所参与的信号传导途径的研究使得对细胞内的整个信息通路的开关和调节有了更进一步的认识.Ras蛋白参与的信号传导途径还和其他的通路有相关性,如G蛋白的β、γ亚基二聚体可以激活Ras途径.因此对Ras途径的研究不仅可以了解Ras自身的调节途径,而且对细胞内整体的信息传导的研究是十分必要的.     

微RNA调节肺癌转移的分子机制

微RNA(microRNA,miRNA)是一类长约22 nt的非编码小分子RNA,在转录后水平上通过基因沉默调节靶基因的活性。近年来,miRNA与肿瘤转移关系的研究成为探讨肿瘤转移调控机制的热点。越来越多的研究提示miRNA在肿瘤转移过程中发挥着重要作用。肺癌转移是影响肺癌预后的关键,是一种复杂的多因素、多步骤、多基因参与调控的过程。研究miRNA对肺癌转移的作用有助于我们找到阻断肺癌转移的靶点。本文就miRNA和肺癌转移关系的研究进展作一综述。     

Ras影响肿瘤的另一种机制:自噬

自噬是细胞在应激条件下或营养缺乏时,清除和降解过量或不必要的蛋白质、受损或老化的细胞器,从而维持代谢平衡的一种机制。ras是经典的癌基因,活化的Ras蛋白既可通过激活Rac1/Mkk7/JNK或Raf-1/MEK/ERK通路促进自噬,也可通过激活PI3K/Akt/m TOR1通路抑制自噬。根据细胞所处环境的不同,Ras诱导自噬对肿瘤的形成和发展产生抑制或促进作用。Ras抑制剂也可诱导自噬影响肿瘤的发展。通过干预ras基因调控肿瘤细胞自噬功能,是一种潜在的肿瘤治疗策略。