树脂在生化物质分离纯化上的应用——Ⅰ.抗菌素

<正> 分离纯化上用的树脂包括吸附树脂及离子交换树脂。吸附树脂是以吸附为特征的一类树脂。一般是按照制备大孔型离子交换树脂骨架的方法制得,未经功能基反应,不带离子交换功能基的多孔树脂骨架。也叫多孔小白球。有些是由带极性基团单体制成的,也就是离子交换树脂。两者很难严格分开。吸附树脂是一类具有多孔性海绵状立体结构的小球粒,也就是树脂吸附剂。按链节分子结构可分为非极性、中极性、极性、强极性四类。     

树脂在生化物质分离纯化上的应用——Ⅲ 核酸和氨基酸

<正> 五、核苷酸1、5’—单核苷酸分离核糖核酸经酶降解为四种单核苷酸(即5’—AMP、5’—CMP、5’GMP、5’—UMP),可应用离了交换树脂将其一一分离开来。使用阳树脂和阴树脂,只要控制一定条件,即可达到分离目的。图1,2是应用阳树脂和阴树脂分离四种单核苷酸的色谱曲线。     

树脂在生化物质分离纯化上的应用——Ⅳ 生物药品及生药制品等

<正> 七、肝素肝素是重要药物,常用于治疗、预防血栓已很普遍,医疗用途在日益扩大中。药理作用除抗凝血、抗脂肪血和抗止血外,尚有抑制酶、如DNA聚合酶、肌球蛋白ATP酶。玻璃酸酶、弹性酶等作用,也有抗肿瘤、抗菌和抗病毒作用。肝素存在于肥大细     

微生物蛋白质谷氨酰胺酶的初步分离纯化

蛋白质谷氨酰胺酶可以特异性地水解蛋白质和多肽的谷氨酰胺残基,研究了产吲哚金黄杆菌产生的微生物蛋白质谷氨酰胺酶的代谢曲线和初步的分离纯化。发酵过程中pH升高,氨浓度增加,到14 h时酶活达到最高为0.359 U/mL。发酵液离心去上清液经3 kD滤膜超滤4倍时,纯化倍数和得率都最高。超滤液加入4倍体积无水乙醇沉淀蛋白质,酶的得率最高为72.7%。沉淀用缓冲液复溶后,经过SP-Sepharose Fast Flow离子交换层析分离,得到单一峰。经过多步纯化后酶得率为31.72%,纯化倍数为124倍,经SDS-PAGE电泳鉴定为单一条带,分子量约为20 kD。     

超滤技术在蛋白质分离纯化中应用

超滤是一种非常实用的膜分离技术,在生物工程制药领域,可有效去除发酵液中的内毒素,实现蛋白质溶液快速脱盐、脱醇和浓缩等。本文仅对超滤技术在蛋白质分离纯化中的应用进行综述。     

糖-蛋白质相互作用在酶固定及蛋白质识别与分离中的应用

近些年来,糖-蛋白质相互作用的研究越来越受到研究人员的重视,它在生命过程中发挥着重要的作用,是生命体中信号传导、免疫应答、细胞黏附、病菌感染、受精、增殖、分化等许多细胞识别过程的基础。依据糖的类型不同对糖-蛋白质相互作用作了三个方面的应用总结:应用于酶的固定化,主要有壳聚糖,淀粉,琼脂糖,纤维素等多糖;应用于蛋白质的识别,主要是一些糖类芯片;应用于蛋白质的分离,主要有琼脂糖,肝素/硫酸类肝素,葡聚糖等。最后,对糖-蛋白质相互作用在生物化学领域的意义作了展望。     

青霉素酰化酶在快速蛋白液相色谱仪上的分离纯化

由大肠杆菌AS1.76产生的青霉素酰化酶具有水解青霉素G产生6-APA,水解重排酸产生7-ADCA的作用,并且也具有合成青霉素类或头孢霉素类的作用。为了研究酶的物理化学性质,我们用Pharmacia FPLC系统对比酶进行了分离纯化,得到了聚丙烯酰胺凝胶电     

纳豆激酶的分离纯化及生化研究

用固体发酵工艺制得的纳豆中含有大量溶栓活性成分———纳豆激酶。经过生理盐水浸提 ,(NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,Sephadex柱层析等步骤 ,可以得一层析纯的纳豆激酶。冷冻干燥品经SDS—PAGE电泳显示有二组分存在     

HPLAC及其在酶的分离和纯化中的应用

叙述了高效液相亲和色谱法(HPLAC)在酶的分离和纯化中的应用,以及组成吸附剂常见的基质、间隔臂、配体的性能和分离过程中的洗脱技术。     

菊粉酶基因的异源表达、分离纯化及酶学性质

为进一步提高菊粉酶在生物技术领域的应用,研究了来源于马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus YX01的菊粉酶性质。通过在毕赤酵母GS115宿主细胞中异源表达该菊粉酶基因(inu),获得了一种外切型菊粉酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证其分子量为86.0 k Da。进一步在该菊粉酶上增加6个His标签,采用聚乙二醇(PEG)20 000透析浓缩和Ni-NTA Agarose静态亲和吸附作用的方法,完成菊粉酶的分离纯化,纯化倍数和酶回收率分别为3.6和33.1%。比较发现粗酶液与纯酶的酶学性质相似,且菊粉酶的最适反应温度为60℃,最适p H值为4.62,并测得该酶的Km和Vmax值,以菊粉为底物时,Km和Vmax值分别为80.53 g/L和4.49 g/(L·min);以蔗糖底物时,Km和Vmax值分别为183.10 g/L和20.20 g/(L·min)。金属离子Mn2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Cu2+、Zn2+和Fe2+的抑制作用最为显著。这些研究为进一步提高菊粉酶在工业化的应用奠定了基础。     

多通道流动电泳技术及其在蛋白质、酶和抗体纯化中的应用研究

提出一种新型制备电泳方法即多通道流动电动电泳技术,建立了微机控制的电泳设备,考查了操作条件对设备分离效率的影响。应用该技术进行牛血清清蛋白(BSA)-牛血红蛋白(HBB)混合物的连续分离,每小时从含BSA、HBB各37.0mg的蛋白质混合物中分离出13.6mg的BSA和20.0mg的HBB。应用该技术进行尿激酶粗品的纯化,可将其比活力由4000IU/mg提高到4×10~4IU/mg以上,产量在10×10~4IU/h以上。将该技术与(NH_4)SO_4沉淀方法结合,从15ml免疫鼠血清中分离出12.5mg高纯度尿激酶抗体IgG,产量为2.1mg/h。上述结果证明多通道流动电泳技术具有分离速度快、精度高和可操作性好等优点,在生物产品分离领域中具有广阔的应用前景。     

多通道流动电泳技术及其在蛋白质、酶和抗体纯化中的应用研究

提出一种新型制备电泳方法即多通道流动电动电泳技术,建立了微机控制的电泳设备,考查了操作条件对设备分离效率的影响。应用该技术进行牛血清清蛋白(BSA)-牛血红蛋白(HBB)混合物的连续分离,每小时从含BSA、HBB备37．Omg的蛋白质混合物中分离出13．6mg的BSA和20．Omg的HBB。应用该技术进行尿激酶粗品的纯化,可将其比活力由4 000IU／mg提高到4×10⁴IU／mg以上．产量在10×10⁴IU／h以上。将该技术与(NH₄)SO- 沉淀方法结合,从15ml免疫鼠血清中分离出12．5mg高纯度尿激酶抗体IgG,产量为2．1mg／h。上述结果证明多通道流动电泳技术其有分离速度快、精度高和可操作性好等优点,在生物产品分离领域中具有广阔的应用前景。     

恒河猴心房利钠多肽的分离、纯化及活性研究

<正> 1983年以来,人们相继从人和大鼠等动物的心房中分离到心房利钠多肽(ANP)。但对非人灵长类动物——恒河猴的ANP了解甚少。由于ANP对机体循环系统的调节起着重要作用,其强大的降压、利钠、利尿的生理功能,在心血管疾病的防治方面具有重要意义。我们曾报导过恒河猴心房肌细胞中存在着大量的ANP样物质,随后对此物质进行了分离、纯化及活性检测,现简报如下。     

单克隆抗体技术在纤溶酶分离纯化中的应用

目的探讨单克隆抗体技术在蛇毒纤溶酶分离纯化中的应用.方法用单抗技术制备亲和层析柱,来分离纯化纤溶酶.结果分离出的纤溶酶纯度高,无神经毒出血毒等毒性.结论运用单抗技术的亲和层析柱能有效分离纤溶酶.     

壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以实验室分离的产壳聚糖酶的LS菌株出发,制备壳聚糖酶粗酶液,经(NH_4)_2SO_4盐析、透析、DEAE-Sephadex A25阴离子交换、Sephadex G-100凝胶过滤分离纯化后,SDS-PAGE显示为一条带,壳聚糖酶被纯化了22.4倍,回收率为34.2%。同时对其酶学性质进行了初步研究,发现该酶在低于35℃和pH 6.O～7.5范围内较稳定,最适反应温度为55℃,反应pH 5.0～5.5;Zn~(2 )、Ag~ 、Ca~(2 )、Co~(2 )、Mn~(2 )对该酶有明显的促进作用,而Fe~(3 )、Hg~(2 )对该酶有强烈的抑制作用;该酶的米氏常数(K_m)为2.50 mg/mL,最大反应速度(V_(max))为4.19μmol/(mL·min);SDS-PAGE测定的相对分子质量为30.9×10~3。     

蕃茄蛋白酶抑制剂Ⅱ_a、Ⅱ_b的分离纯化及性质研究

经硫酸铵分级、CM-纤维素柱层析和Sephadex G-75柱层析,从野生型秘鲁蕃茄未成熟果实的匀浆液中分离纯化了蛋白酶抑制剂Ⅱa、Ⅱb。纯化的蛋白酶抑制剂经SDS-PAGE鉴定呈单一带,分子量均为17kD。Western blotting结果表明蛋白酶抑制剂Ⅱa、Ⅱb均与马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ有血清学上的交叉反应。抑制蛋白酶活性测定显示两种蛋白酶抑制剂都表现強的抑制胰凝乳蛋白酶的活性,但对胰蛋白酶的抑制活性蛋白酶抑制剂Ⅱb強于蛋白酶抑制剂Ⅱa。     

蛋白质谷氨酰胺酶的发酵及初步分离和应用研究

研究了不同发酵条件对于产吲哚金黄杆菌（Chryseobacterium indologenes）生产蛋白质谷氨酰胺酶能力的影响,酶的分离和初步的应用。通过考察种子的生长曲线,发酵的温度、转速、摇瓶装液量,碳源和氮源,得出最大产酶能力的发酵条件为：30℃,200r/min,装液量25ml/250ml,蔗糖为碳源,多聚蛋白胨为氮源,发酵10~12h。初步分离研究表明在4倍超滤浓缩和4倍乙醇沉淀条件下,酶活力回收率均为最高,分别为84.99%和76.07%。该酶与酪蛋白37℃温育2h时,酪蛋白的脱酰胺度为41.03%,到24h后,脱酰胺度不再增加,并且酪蛋白的溶解性也有所增加。     

胶原蛋白酶产生菌的筛选及酶的分离纯化

从堆积骨骼的土样中筛选出高产胶原蛋白酶的MBL13菌株,经鉴定为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus。对其所产的胶原蛋白酶BCC进行分离纯化,并进行酶学性质的研究。从菌株的发酵液中纯化出分子量约为38.0kDaBCC酶。酶反应的最适温度为40℃,最适pH为8.0。在50℃以下稳定,60℃保温1h酶活仅保留10%;在pH7.0～8.5活性较稳定;金属离子Ca2+、Zn2+、Mg2+对酶有激活作用,金属离子Cu2+对酶有显著的抑制作用。EDTA和EGTA能抑制该酶,表明BCC酶为一种金属蛋白酶。酶的底物特异性表明该酶为骨胶原蛋白酶,且对Ⅰ型骨胶原蛋白水解能力极显著高于Ⅱ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白。将纯化的BCC酶应用于骨胶原蛋白的水解可以得到不同链长的多肽,其水解能力高于标准品胶原酶Ⅰ型。本研究为工业酶提供了新的菌株和新型胶原蛋白酶,为胶原蛋白酶的开发提供了重要的理论依据。     

栝楼籽中一种新的具有蛋白质生物合成抑制活性的多肽——Trichokirin-S1的分离、纯化和性质

改进了常规的核糖体失活蛋白的分离纯化方案 ,首先采用抽提蛋白体的方法 ,提高了分离效果 ,然后再经硫酸铵分级沉淀、FPLCMonoS阳离子交换层析和Superose12凝胶过滤层析等步骤 ,从栝楼种子中分离到一种新的多肽———trichokirin S1。经MALDI TOFMS质谱分析测得其分子量为 114 2 6。该肽的N端氨基酸序列为PRRKEG GSFDECCSE ,与一种存在于南瓜籽中的小分子核糖体失活蛋白 β moschin具有很高的同源性。trichokirin S1对核糖体失活的机制与天花粉蛋白 (TCS)一致 ,是rRNAN 糖苷酶催化型的 ,对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 0 .71nmol L ,因而有可能开发成免疫毒素的高效“弹头”。