DNA序列测定的化学断裂法

Maxam和Gilbert化学断裂测定DNA序列法最近巳发表(PNAS,vol.74:2,p.560-564,1977)。此法利用四组不同化学反应,在一个末端以~(32)p标记的DNA分子上专一的破坏一种碱基,使DNA链部分地断裂,以形成一系列在该碱基重复出现的部位断开的、长短不一的带~(32)p标记末端的DNA片段。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中,这些片段根据大小依次被分离,并显示出该碱基在链上断裂的位置。以分别对腺嘌     

六斑月瓢虫模板DNA的制备及16SrDNA序列扩增

本文对酒精浸泡的六斑月瓢虫Menochilus sexmaculata(Fabricius)标本进行基因组DNA的提取,用线粒体16 SrDNA引物扩增出长度约为500bp的PCR产物,为进一步开展瓢虫的分子系统学研究打下基础.     

一种简便经济制备银染序列分析模板质粒DNA的方法

用改良碱裂解法提取的质粒DNA,经RNA酶消化后做银染列分析的模板,所得测序结果清晰、准确,从而使银染法模板的制备更加经济简便。     

关于一则“科技简讯”的质疑

2005年《生物学通报》第3期第23页刊载了摘自《科学时报》2005年2月18日的一篇文章：美国科学家最近培育出一种转基因土豆,能起到乙肝疫苗的作用……培育出了一种无须冷藏,可以食用的乙肝疫苗土豆,解决了这一问题……人吃下这种土豆后,抗原蛋白会触发人体的免疫反应,产生乙肝抗体抵抗乙肝病毒。     

DNA的“第一夫人”——罗莎琳德·富兰克林

2010年4月25日是DNA双螺旋结构发现的57周年纪念日,全世界都在举行隆重的纪念活动。在我们为沃森和克里克的伟大发现欢欣鼓舞的时候,我们也应该纪念曾经为这一发现做出突出贡献、被称为DNA的"第一夫人"的罗莎琳德·富兰克林(Rosalind Franklin)。本文简要介绍了富兰克林短暂而又富于贡献的一生,希望大家能够了解她为DNA双螺旋结构的发现所作的功勋。     

黑茶中“金花菌”线粒体基因组序列测定及系统发育分析

本研究对黑茶中优势微生物“金花菌”线粒体基因序列进行测定与生物信息分析,并探究其与近缘种微生物的系统发育关系。结果表明,“金花菌”线粒体基因组是一条全长77 649bp的环状DNA分子,其ATCG 4种碱基所占比例分别为34.14%、37.64%、15.61%、12.61%,具有显著的A-T偏向性。基因组共编码42个基因（15个蛋白质编码基因,2个rRNA基因和25个tRNA）,与近缘种相比缺失了trnT-TGT且多了1个trnM-CAT拷贝,排列顺序上则较为保守。蛋白质编码基因编码频率较高的氨基酸分别为Leu、Ile、Ser、Phe和Val;RSCU频率最高的4个密码子依次是UUA、AUA、UUU和AAU。25个tRNA基因均可形成典型三叶草结构,并存在有35处G-U错配。系统发育分析表明：与“金花菌”分类地位上最密切是Aspergillus pseudoglaucus。依据菌株形态学与系统发育分析的结果,本研究支持将“金花菌”归类于Aspergillus属并使用A. cristatus这一名称的分类观点。     

“缺口翻译”法制备~(32)P 标记DNA探针和几种核酸杂交技术

定性或定量检测天然DNA或重组DNA中某些特殊的顺序片段,分子杂交是最常用的方法。近几年,核酸的分子杂交技术日趋完善,以不同材料为支持物的固相杂交技术取得了更为迅速的发展。核酸分子杂交方法的灵敏性主要取决于同位素标记杂交探针的比放射性强度。因此制备高比放射性探针是提高灵敏性的关键。用缺口翻译方法制备较稳定的高比放射性强度的杂交探针,大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ是一个理想的工具。本文介绍我们建立并改进“缺口翻译”制备P标记的探针方法,以及几种重要的核酸固相杂交技术。     

国产“水山姜”的分类学研究—来自核糖体DNA ITS区序列的证据

用直接测序法对国产黑果山姜Alpinia nigra(Gaertn.)Burtt以及“水山姜Alpinia aquatica (Koen.)Rose”。的核糖体DNA中的内转录间隔区（ITS）序列进行了测定,结果显示两者序列完全一致;ITS1长度为178bp,ITS2长度为232bp,5.8S编码区长度为164bp,GC含量为56.9%,形态学特征结合DNA分子证据,认为《中国植物志》记载的水山姜实为黑果山姜。     

“DNA的信使”认识误区辨析及教学建议

高中生物学教材和教师教学用书都认为DNA一般是双链,所以不能通过核孔,忽略了基因组DNA被结合蛋白物理束缚而不能随意移位,作为主要遗传物质也不需移位。mRNA能充当DNA信使的核心原因是,能忠实而灵活地携带DNA上所需要表达的遗传信息并与核糖体识别结合。在辨析认识误区的基础上,基于生物学核心素养的培养提出教材编写和教学建议。     

“DNA的粗提取与鉴定”的教学设计及实施

课题"DNA的粗提取与鉴定"在高中生物学教学中很难开展实验课程,笔者带领兴趣小组通过探究实验提高了实验成功率;通过分层推进小组合作学习,使学生在课堂上体验了植物和动物DNA的粗提取与鉴定。     

“一锅双酶”法制备L-天冬氨酸的工艺条件优化

L-天冬氨酸作为一种大宗氨基酸产品,在医药、食品和化工等方面有着广泛的用途。笔者所在实验室成员前期已经构建1株含有顺丁烯二酸异构酶与L-天冬氨酸氨基裂解酶、且可直接将顺丁烯二酸铵转化成L-天冬氨酸铵的工程菌,对其培养基、发酵条件以及制备条件进行优化。得到的优化发酵培养基:蛋白胨20 g/L,酵母浸粉5g/L,Na Cl 1.45 g/L,富马酸10 g/L,NH4NO38 g/L,乳糖6 g/L,氨水调节pH至7.5。最佳发酵培养条件:发酵罐的转速150 r/min,通气量1.5 L/min,最佳的接种量0.5%(体积分数)。通过发酵罐对优化后的培养基进行扩大培养,得出1 L发酵液可以转化1 kg顺丁烯二酸铵,优化后相同培养体积的菌体转化的底物量提高了1倍。为实现一锅双酶法制备L-天冬氨酸工艺的规模放大奠定了基础。     

关于用“小液流法”测定植物组织水势的改进意见

植物水势的研究是近年来植物生理学较为活跃的领域之一。我们在进行油菜不同叶龄幼苗叶片水势的实验时,采用了“小液流法”。(见华东师范大学生物系植物生理教研组主编,植物生理学实验指导,第12—14页。)“小液流法”与“重量法”(见同书第14—16页)比较,具有实验时间短、直观性强、实验结果计算快速、所需仪器简单等优点,宜于在教学实验时采用。但通过大量实践,我们认为该实验步骤中的某些环节需待改进。 1.关于染色剂的使用问题众所周知,溶液的水势受溶质颗粒(离子和分子)与水分子的比例数值所影响。比例越大,则水势值越小,这是因为溶质     

“无添加”防腐剂MIC值的测定结果及应用

本文根据最小抑菌浓度(MIC)测定方法测试了九种"无添加"防腐剂的MIC值,对"无添加"防腐剂在防腐方面最具有说服力的MIC值做出了较为系统和全面的研究。然后又对"无添加"防腐剂进行了挑战性试验,选取了新研制的一个"无添加"防腐体系华科-11K,做了防腐挑战性试验,试验效果良好。     

“红颜”草莓原生质体制备及瞬时转化体系的建立

为探索“红颜”草莓悬浮细胞系原生质体提取的最优条件,并建立“红颜”草莓原生质体瞬时转化体系,以“红颜”草莓悬浮细胞为材料,对酶液组成、酶解温度、酶解方式进行研究。用PEG介导的瞬时转化法将标记基因GFP转化到“红颜”草莓原生质体中。结果显示：以“红颜”草莓悬浮细胞系作为分离材料,酶液组合为CPW中含有0.5%PVP+0.1%MES+1%纤维素酶+0.5%离析酶+0.01%半纤维素酶+0.9 mol/L甘露醇,在低速（50 r/min）恒温（31 ℃）震摇下进行酶解反应,酶解10 h时,达到“红颜”草莓原生质体最佳分离效果,每克鲜重产量可得原生质体6×10⁸ 个,活力值可达93.0%。PEG介导法成功将含有绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）的植物表达载体转化“红颜”草莓悬浮细胞原生质体,转化效率达44%。通过实验筛选得到“红颜”草莓悬浮细胞原生质体的最佳制备条件,建立“红颜”草莓悬浮细胞原生质体的瞬时转化体系,为进一步开展“红颜”草莓功能基因及合成生物学研究奠定基础。